動物實驗基本操作

動實基操一固、別定標(biāo)）【實目】在做動物試驗時，為確保給藥、實驗順利進行，防止被動物咬傷、準(zhǔn)確辨動物性別準(zhǔn)確標(biāo)識動物要學(xué)會用正確方法捉拿實驗動物握辨別動物性別的方法以及掌握標(biāo)識動物的方法?！緦崒Α縎D大鼠KM小鼠雌雄各半，體重180-250g?！緦嵠骱推菲鞑模菏蠡\、大小鼠固定器、方木板、美式圖釘、細(xì)繩、防護手套藥品：苦味酸80%~90%酒精飽和溶液20%拉坦【實步】一小的拿徒固：用右手提起尾巴中部，在鼠籠蓋或其他粗糙面上。向后上方輕拉，此時，小鼠前肢緊緊抓住粗糙表面拇指和食指迅速捏住小鼠頸背部皮膚小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夾住小鼠背部皮膚名指壓住小鼠尾根部將其固定于手中右手可行注射或其它操作。固器定靜注射或給藥時小放進固定器中或者大小和量適當(dāng)?shù)娜萑鐭冻鑫舶?，該類容器夠壓住尾部，避免其活動。勿固定過緊造成窒息死亡。進行腹腔手術(shù)或心臟采血時先準(zhǔn)備一個15-20cm的木板邊釘入五顆釘子將小鼠四肢分別用20-30cm的繩捆綁的另一頭分別綁在方木板的釘子上且在頭部上顎切齒牽引一根線繩，也固定在釘子上，達(dá)到完全固定。二大的拿4-5周內(nèi)大鼠，方法同小鼠。齡較大的，則1首先戴好防護手套。、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上3、手順勢按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行4、以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取保定。三性判小鼠、大鼠性別判定幼鼠外殖器與肛門間隔短的♀，外生殖器與肛門間隔長的是♂。成年動物可直接肉眼辨認(rèn)，雄性有膨起的陰囊和陰莖，雌性動物有陰道口。四動的記小鼠的短期標(biāo)記法：苦酸80%~90%精飽和溶液（黃色出于自己的編號【注事】實驗人員要有精神準(zhǔn)備：掌握方法，膽大心細(xì)，做好防護。動物興奮的時候不要抓取，待其安靜下來。根據(jù)受試動物的給藥部位或采血方法的不同，事先選擇徒手固定還是固定器固定。固定時把握好力度，過分用力會使小鼠頸椎脫臼或窒息死亡，若用力過輕頭部能反轉(zhuǎn)過來咬傷實驗者的手?！舅伎碱}】1.在定實驗動物時如何才能快準(zhǔn)、穩(wěn)？動實基操二給途、血【實目】在做動物試驗時，為確保給藥、采血實驗順利進行，要掌握根據(jù)不同的情進行動物給藥以及采血的正確方法?！緦崒Α縎D大鼠180-250g小18-22g雄半?！緦嵠骱推菲鞑模菏蠡\、大小鼠固定器、方木板、長釘、細(xì)繩、防護手胃，注射器1ml,5ml棉球，剪毛剪、手術(shù)剪、手術(shù)刀、采血管、彎頭鑷子藥品：生理鹽水75％酒精棉球，一次性采血管，一次性EP管【實步】一給途、大小的胃用左手固定鼠手持灌胃器安好灌胃針并已吸好藥)灌胃針從鼠的嘴角插入口腔，壓迫鼠的頭部口腔和食管成一直線輕轉(zhuǎn)動針頭刺激鼠的吞咽將胃針沿咽后壁慢慢插入食管，如果動物掙扎厲害，退出灌胃針，待動物安靜下來，重新插入。灌胃針前端達(dá)到膈肌水平即可慢推灌藥液，如很通暢，則說明已進入胃內(nèi)。如不通暢，且動物掙扎厲害，須拔出重新操作。皮注左手拇指和食指輕輕提起動物皮膚，右手持注射器注針刺入皮下針頭容易擺動則證明針頭已在皮下送藥液緩慢拔出注射針稍微用手指壓片刻針刺部位，以防藥物外漏。肌注選用肌肉發(fā)達(dá)，無大血管經(jīng)過的部位，如臀部或股部肉注比皮下和腹腔注射用得較少當(dāng)給動物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時采肌肉注射）腹注、左手抓取并固定好動物，將腹部朝上B、右手持注射器將針在下腹部腹白線稍左或偏右的位置，從下腹部朝頭方向幾乎平行地刺入皮下，進針3-5mm。C、再使針頭與皮膚呈45°角斜穿過腹，當(dāng)針尖穿過腹肌進入腹腔時，有落空感，然后固定針頭，保持針尖不動，回抽，無回血，無腸液、尿液，便可緩緩?fù)迫胨幰?。靜注（靜注）A、大、小鼠尾靜脈共有(左、中、)，一般常選用兩側(cè)的靜脈。注射前，先把動物固定在暴露尾部的鼠尾固定器可用燒杯、鐵絲罩或粗試管等物代替.B、拔去尾部靜脈走向毛，用75酒精棉球反復(fù)擦拭鼠尾，以達(dá)到消毒、血管擴張及軟化表皮角質(zhì)的目的C、量從靜脈的遠(yuǎn)心端刺入血管一血，將藥液緩慢注入。D、注射完畢，用棉球壓住針眼拔去針頭，繼續(xù)壓迫數(shù)分鐘。二采心采將動物仰臥固定在鼠板上，剪去胸前區(qū)部位的被毛，消毒。在側(cè)第3-4肋間用手食指摸到心搏處右持注射器選擇心搏最強處穿刺。當(dāng)針穿刺入心臟時，血液由于心臟搏動的力量自動進入注射器需保留動物存活時麻后切開動物胸膛，直接用注射器刺入心臟內(nèi)采血，也可剪破心臟直接用注射器或吸管吸血。摘球血用手抓住動物頸部皮膚，并將動物輕壓在實驗臺上，稍微側(cè)臥，左手拇指盡量將動物眼周圍皮膚往眼后壓動物眼球突出并充血用彎頭鑷子迅速摘除眼球眼眶內(nèi)很快流出血液?？裘}（）血將物麻醉，采用側(cè)眼向固定體位，用左手拇指和食指從背部較緊地握住大（?。┦箢i部。取血時，左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè)，是頭部靜脈血液回流困難，眼球充分外突，眶靜脈叢充血?！咀⑹隆空莆辗椒ǎ懘笮募?xì)，做好防護。常用灌胃量：小鼠：～1ml,大～4ml摘取眼球采血法一般可取約為小鼠體重4-5%血液量?！究肌?.如熟練掌握大小鼠的給藥途和采血方法？動物實驗基本操作三安樂）【實目】在科學(xué)應(yīng)用和教學(xué)實驗中，因?qū)嶒灲K結(jié)、研究所需提供血液或其他組織臟、不適合繁殖或者是當(dāng)動物的疼痛與窘迫程度超過預(yù)期等情況下，需要我們以人道的方式使動物死亡動物在最低程度的疼痛恐懼并在最短的時間內(nèi)失去知覺和痛覺。【實對】KM小鼠雌雄各半，體重?！緦嵠骱推菲鞑模菏蠡\、大小鼠固定器、注射器1ml球，剪毛剪、手術(shù)剪、手術(shù)刀、采血管、彎頭鑷子、燒杯100ml、木板藥品：吸入性麻醉劑、注射型麻醉劑75酒精棉球【驗驟、頸椎臼用指和食指用力往下按住鼠頭，另一只手抓住鼠尾（鼠尾根部往后上方一拉，使頸椎脫臼，造成脊髓與腦髓斷離，動物立即死亡。放法麻動物后，將動物股、頸動、靜脈全切斷，血液立即噴出；用一塊濕紗布不斷擦去股動脈切周圍處的血液和血凝塊時不斷的用自來水沖洗流血股脈切口處保持暢通，動物3～5分內(nèi)即可致死。藥致法藥吸藥吸入是將有毒氣體或揮發(fā)性麻醉劑，被動物經(jīng)呼吸道吸入體而致死，將小鼠入含有乙醚的密封燒杯中3-5分后可死亡藥注將物（腹腔注射硫酸鎂）通過注射的方式注入動物體內(nèi)，使動死亡【意項1、實驗人員要有精神準(zhǔn)備：掌方法，膽大心細(xì)，做好防護、克服心理緊張等因素【考】1.安死的意義是什么？實二

家的管動插實目學(xué)習(xí)捉拿家兔的正確方法和固定。掌握常用手術(shù)器械的正確使用方法。學(xué)習(xí)動物實驗的基本作技術(shù)包括麻醉、口與止、氣管插管、頸動脈插管術(shù)實對健康家兔,雄均可,體～實內(nèi)家兔的捉拿、麻醉與固定頸總動脈、神經(jīng)等的分離技術(shù)氣管插管動脈插管器與品器：兔手術(shù)臺、哺乳類動物手術(shù)器械一套、三通、動脈夾、動脈插管、氣管插管、紗布、棉線、注射器、綁腿帶、污物杯。20%氨甲酸乙酯溶液(烏拉坦，4-5ml/kg體重，麻醉用)步和法一家的拿稱、兔捉：右抓住家兔頸背部皮膚，輕輕將家兔提起，迅速以左手托住其臀部，使家兔體重主要落左掌心上，以免損傷動物頸部。注點家兔般不咬人但腳爪銳，在扎易抓傷捉者，所捕捉要特別意其四肢。、兔稱：將兔放在嬰兒秤上，待家兔安靜的時候觀察體重并記錄。注點調(diào)零切勿使勁按壓稱面二家的醉1、醉藥的注射如圖1：助手的一側(cè)上肢彎曲與側(cè)的軀夾住家兔的半部位同時該側(cè)的托住家兔的腹部，另一只向上抓家兔的背部，充分露耳背緣耳緣靜脈實驗者的左食指、中指輕夾耳根使靜脈盈，從遠(yuǎn)心以℃角度進針刺入脈后順血管平行方向深入1cm，手拇指、食指在刺入部位將針頭與兔耳固定，即可注入麻醉藥。2、醉效果判定：可以通過觀動物呼吸平穩(wěn)深慢、角膜反射遲鈍或消失、肢體肌肉松弛、皮膚夾捏反射消失四方面來判定是否達(dá)到理想的麻醉效果三家的管動插仰固：頭用一根粗棉線拉住兔的兩門齒后栓在兔板的鐵柱或固定鉤上。兩前肢平直放在胸部兩側(cè),用粗繩一端腕關(guān)節(jié)以上部,縛繩從背后左右交叉穿過,壓在對側(cè)前肢的前臂上,再緊扎于兔板兩側(cè)的木鉤上,兩后肢左右分開,縛扎踝關(guān)節(jié)以上部,一端分別固定于兔板后兩側(cè)的木鉤上，如下圖2。氣插操要1）手術(shù)刀時，先用手或器械兩側(cè)組織牽拉緊張情況下，以刀刃作垂直的輕巧的切開，不要作刮削的動作。2）管插管術(shù)操作要點（）：頸部正中切開皮膚，鈍性分離暴露氣管、穿線備用。于氣管中段第三或第四軟骨環(huán)上向頭端作一縱向倒“”切口。將氣管導(dǎo)管由切口向胸部方向插入氣管腔內(nèi)。在氣管軟骨環(huán)之間進行結(jié)扎，并將棉線固定于插管分叉處。、脈管作點于氣管一側(cè)小心分離頸總動脈約3cm穿線備用。遠(yuǎn)心端結(jié)扎、近心端用動脈夾夾緊。用眼科剪與血管呈45℃的度遠(yuǎn)心端開始在向心一側(cè)剪開管壁的。④插管前導(dǎo)管和壓力換能器的肝素化。⑤插管后結(jié)扎固定。注事麻醉動物時,注射度先快后慢,邊注射邊觀察動物麻醉指征。如醉過淺,動物掙扎時可適量追加麻醉藥,切忌麻醉過深引起家兔死亡；手術(shù)過程中操作應(yīng)輕柔,盡避免不必要的損傷和出血；手術(shù)時,切頸部皮膚后,盡鈍性分離,以損傷血管；氣管插管前，應(yīng)注意止血，并將氣管分泌物清理干凈；動脈導(dǎo)管的插入端要光滑，不能過尖，以防刺破動脈壁，引起大出血。未扎緊動脈插管前不要松動動脈夾。實驗三、驗性肺水腫【實驗原理與目的水腫是臨床上常見的危重癥之一水腫是指過多的液體積聚在肺間質(zhì)或溢入肺泡腔內(nèi)的病理狀態(tài)肺毛細(xì)血管流體靜脈壓增高血漿膠體滲透壓降低肺微細(xì)管壁通透性增高淋巴回流障礙等因素的某個或多個同時或相繼作用般水腫液先在組織間隙中積聚，形成間質(zhì)性肺水腫，然后發(fā)展為肺泡性肺水腫腫生后可起氣體彌散障礙以及肺泡通氣與血流比例失調(diào)（如果氣道內(nèi)存在水腫液，還會引起通氣障礙最終導(dǎo)致呼吸功能不全大量上腺素可引起機體血液重新分布周管廣泛收縮血液由體循環(huán)急速轉(zhuǎn)移到肺循環(huán)左房壓力和肺毛細(xì)血管有效濾過壓增高體入肺間質(zhì)增多而出現(xiàn)肺水腫。本實驗的目的是用大劑量腎上腺素復(fù)制肺水腫模型急性肺水腫的表現(xiàn)發(fā)機理?！緦嶒瀸ο蟠笫螅菩鄄幌?，體重180-250g【實驗器材和藥品】器材：彈簧磅秤，電子天平，手術(shù)器械套2ml,5ml注射器，聽診器1具，濾紙。藥品：生理鹽水鹽酸腎上腺素注射液氨基甲酸乙酯溶液(烏拉坦體，麻醉用)?！緦嶒灢襟E和觀察指標(biāo)】取180-250g左體重相近的大鼠兩只，做好標(biāo)記（甲鼠乙鼠，觀察動物的一般情況、呼吸和膚色。甲鼠腹腔注鹽酸腎上腺素注射2ml；乙鼠腹腔注射同體積生理水。觀察動物變化如活動情況吸色做肺部聽診肺呼吸音意口鼻有無泡沫液體流出動物死亡，記錄時間；若注射藥物后物未死亡，可按%戊巴比妥鈉溶液1ml/100g腹注射