組織學制片技術(shù) 課件

組織學制片技術(shù)組織學與胚胎學教研室組織學制片技術(shù)組織學與胚胎學教研室1目的要求1、了解組織學制片的基本程序；2、熟悉HE染色的步驟；3、掌握HE染色結(jié)果的觀察。目的要求1、了解組織學制片的基本程序；21．切片標本：組織經(jīng)固定、切片（包括冰凍切片、石蠟切片及火棉膠切片）染色、封固而制成的各種玻片標本。它為組織學中最常用的標本。一、組織學常用的幾種標本類型1．切片標本：組織經(jīng)固定、切片（包括冰凍切片、石蠟切片及火棉32．鋪片標本：將腸系膜或皮下組織鋪于載玻片上，經(jīng)固定、染色、封固而制成的標本。2．鋪片標本：將腸系膜或皮下組織鋪于載玻片上，經(jīng)固定、染色、43．涂片標本：主要是將液態(tài)組織如血液、骨髓、痰液、腹水、精液等液體涂抹于載玻片上，經(jīng)固定、染色制成的組織標本，以供觀察細胞的形態(tài)與其微細結(jié)構(gòu)。血液涂片宮頸涂片3．涂片標本：主要是將液態(tài)組織如血液、骨髓、痰液、腹水、精液54．磨片標本：不經(jīng)脫鈣及切片手續(xù)，而直接用手工在磨石上磨制成薄片，以便在顯微鏡下觀察的骨、牙磨片標本。大麗紫染色4．磨片標本：不經(jīng)脫鈣及切片手續(xù)，而直接用手工在磨石上磨制成65．分離標本：將極小組織塊用化學藥物的水溶液浸泡后，溶去其細胞間質(zhì)，采用機械分離方法（如振蕩、針撥等方式）使之分離成單個而又完整的細胞，經(jīng)染色后涂于載玻片上進行鏡檢。5．分離標本：將極小組織塊用化學藥物的水溶液浸泡后，溶去其細76．壓片標本：組織經(jīng)化學藥物軟化及染色后，用蓋片壓封于載玻片上進行鏡檢的標本。如運動終板的制作。6．壓片標本：組織經(jīng)化學藥物軟化及染色后，用蓋片壓封于載玻片87．整裝標本：一種是將很小的動物或早期胚胎經(jīng)固定、染色后，封固于載玻片上。另一種是將小動物、胚胎或病變器官經(jīng)固定后，保存于固定液中瓶裝供肉眼觀察用?？闪私馀唧w的表面立體形態(tài)特征及病變部位與周圍組織的毗鄰關(guān)系。7．整裝標本：一種是將很小的動物或早期胚胎經(jīng)固定、染色后，封98．活體標本：在組織細胞生活狀態(tài)下進行觀察的標本，或生活狀態(tài)下進行活體染色后制成的標本。8．活體標本：在組織細胞生活狀態(tài)下進行觀察的標本，或生活狀態(tài)109．血管注射標本：一種是將樹脂類鑄形劑經(jīng)血管灌注后，用強酸或強堿腐蝕血管周圍組織而制成的血管鑄形標本，可瓶裝供肉眼觀察或進一步處理后作掃描電鏡觀察。另一種是將染料加明膠配制成染色液注入血管內(nèi)，然后取材、固定、包埋、切片和封固所制成的組織切片標本。這類標本主要用于了解血管的走行及其與所支配組織或器官的相互關(guān)系。9．血管注射標本：一種是將樹脂類鑄形劑經(jīng)血管灌注后，用強酸11組織切片的制作方法有：石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、超薄切片（電鏡標本）、樹脂切片、碳蠟切片等。石蠟切片法是最常用的方法，本節(jié)將較詳細講授其制作步驟。二、組織切片的常規(guī)制作（一）概述組織切片的制作方法有：石蠟切片法、冰凍切片法、12組織切片制作方法的基本程序為：取材→固定→脫水→透明→包埋→切片→染色→封固。組織切片制作方法的基本程序為：13組織學制片技術(shù)課件14（1）頸椎脫臼法（2）斷頭法（3）麻醉法（4）空氣栓塞法：（二）動物的致死與取材1、動物致死法：

2、組織取材時應(yīng)注意：(1)所取材料越新鮮越好；(2)切取組織的刀剪刃口必須鋒利；(3)取材時必須考慮切面的方向；(4)組織塊應(yīng)力求小而薄；(5)收縮較大的新鮮組織；(6)注意清潔；（1）頸椎脫臼法（2）斷頭法（3）麻醉法（4）空15使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，終止或抑制外源性和內(nèi)源性酶活性，防止組織自溶；使組織成份轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)從而有利于保存。這就是固定的基本意義。（三）標本的固定1．固定的目的使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，終止或抑制外源性和內(nèi)源性酶活性，防止組織16(1)組織塊不宜太大，一般以厚度為2毫米，長度不超過0.5厘米*0.5厘米。(2)固定液的量一般以組織塊大小的30倍為宜，最好在固定組織的瓶底墊上脫脂棉或幾層紗布以使固定液能從上下左右前后各方都能滲入組織塊。(3)固定的時間，一般以24小時為宜。2．固定的注意事項(1)組織塊不宜太大，一般以厚度為2毫米，長度不超過0.5厘17(4)后固定：柔軟組織在新鮮時不易切成小塊，往往采用重新固定法處理。（5）特殊固定：神經(jīng)組織以在活體動物灌流固定后再重新投入固定液為佳，有些組織如肺則采用由氣管注射固定液后再投入固定液為好。(4)后固定：柔軟組織在新鮮時不易切成小塊，往往采用重新固18常用的固定液有：（1）10%福爾馬林液：商品甲醛（36%—40%甲醛水溶液）配成固定液其濃度為3.6%—4%，也就是習慣上稱為10%的福爾馬林液。（2）10%中性緩沖福爾馬林液：商品甲醛10ml，0.1mol/LpH7.4PBS90ml。3．固定劑用以固定組織的藥劑，稱為固定液。常用的固定液有：3．固定劑用以固定組織的藥劑，稱為固定液。19（3）4%多聚甲醛磷酸緩沖液（pH7.4）（4）Bouin’s液：苦味酸飽和水溶液75份，甲醛25份，冰醋酸5份配制而成。

組織學制片技術(shù)課件20（1）灌注法（Irrigationmethod）自左心室插入主動脈，先以生理鹽水沖冼血液后，注入固定液，30min后取材，置同一固定劑后固定。（2）浸入法（Immersionmethod）

。4．固定方法（1）灌注法（Irrigationmethod）自左心21材料固定后，藥劑繼續(xù)留在組織中，易使組織破壞，必須用水或酒精洗去。5．固定后處理三種方式進行處理：（3）直接入脫水劑。（2）酒精充分洗滌（Bouin’s液含苦味酸）；（1）流水沖洗（鉻酸或鉻酸鹽固定的組織）；材料固定后，藥劑繼續(xù)留在組織中，易使組織破壞，必須用221、目的：脫水與透明的目的在于為石蠟滲透至組織塊內(nèi)部以便進一步包埋做必要的準備。脫水必須從低濃度開始，逐漸轉(zhuǎn)入高濃度脫水劑。另外脫水必須進行得很徹底。

2、常用脫水劑：（1）酒精：

（2）丙酮：

（四）脫水與透明1、目的：脫水與透明的目的在于為石蠟滲透至組織塊內(nèi)部以便進233、常用的透明劑有二甲苯、甲苯、氯仿等。二甲苯：透明組織的能力強，但易使組織收縮和變脆，故在二甲苯中不宜擱置太久。氯仿：其透明能力遠比二甲苯慢，透明時間可以延長至24小時也無妨。

3、常用的透明劑有二甲苯、甲苯、氯仿等。241．

目的：由于生物體的組織有各種硬度不同的成份，必須加石蠟等作支持物質(zhì)滲入組織塊內(nèi)部，并將組織塊包埋起來，然后用切片機以制作極薄的切片。2．

種類：包埋物質(zhì)目前廣泛采用的除石蠟外，還有火棉膠、炭蠟、明膠以及環(huán)氧樹脂、OTC(冰凍切片包埋劑）等。（五）包埋1．目的：由于生物體的組織有各種硬度不同的成份，必須加石蠟25商品石蠟的處理：浸蠟：包埋：通常使用包埋盒。石蠟包埋法：

反復溶化以增加石蠟的硬度和密度。溫度不能超過該石蠟的溶點的2℃以上；1~2h。商品石蠟的處理：石蠟包埋法：反復溶化以增加石蠟的硬度和密26包埋通常使用組織包埋機、包埋盒及配套使用的不銹鋼模具。把熔蠟倒入模具內(nèi)，再用加熱的彎曲鈍頭鑷子夾取已經(jīng)過浸蠟的組織塊，使切面朝下平正地置放于模具底面的中央處，然后放上包埋盒，繼續(xù)加滿蠟，待包埋盒表面的熔蠟凝固后，將其移入加冰塊的冷水中加速凝固，包埋即告完成。包埋通常使用組織包埋機、包埋盒及配套使用的不銹27170%乙醇常溫12～24h280%乙醇常溫12～24h390%乙醇常溫2～3h495%乙醇Ⅰ常溫1～2h595%乙醇Ⅱ常溫1～2h6100%乙醇Ⅰ常溫1h7100%乙醇Ⅱ常溫1h8二甲苯Ⅰ常溫20~30min9二甲苯Ⅱ常溫20~30min10石蠟Ⅰ48~50℃0.5h11石蠟Ⅱ48~50℃0.5h12石蠟Ⅲ58~60℃0.5h13石蠟Ⅳ58~60℃0.5h組織塊處理時間表170%乙醇常溫12～24h280%乙醇常溫12～28石蠟切片機可分三個部分，一是安裝切片刀的部分，有調(diào)節(jié)刀片斜度和固著刀片的螺旋。一是安裝材料的部分，也有螺旋可以調(diào)節(jié)材料的位置。另一是操縱在旋轉(zhuǎn)中向前推進的部分，控制著切片的厚薄，是比較重要而復雜的部分。（六）組織切片技術(shù)1、切片機簡介：石蠟切片機可分三個部分，一是安裝切片刀的部分，有調(diào)節(jié)29德國冰凍切片機冰凍切片機制冷系統(tǒng)自動進樣/切片系統(tǒng)照明系統(tǒng)德國冰凍切片機冰凍切片機302、載玻片和蓋玻片處理：新載玻片上有油污，必須經(jīng)過清潔液浸泡、充分漂洗、酒精浸泡、烤干備用。2、載玻片和蓋玻片處理：新載玻片上有油污，必須經(jīng)過清潔液浸泡31

(1)明膠液：這是粘片最常用的膠液，簡便優(yōu)良。(2)蛋白甘油：雞蛋清50ml，甘油50m1，水楊酸納1g。（3）樹脂膠：又稱白色乳膠，使用濃度為1%～2%，以蒸餾水稀釋即可。（4）多聚賴氨酸，APES（3-氨丙基-乙氧基甲硅烷）。3、載玻片上涂粘附劑：(1)明膠液：這是粘片最常用的膠液，簡便優(yōu)良。3324．切片步驟：

（1）切片刀或一次性切片刀必須鋒利。（2）將切片刀安裝在持刀座上（以15°為宜）。（3）將蠟塊（包埋盒）固定于支持器上，調(diào)整蠟塊和刀刃至適當位置。（4）細心移動刀座或蠟塊支持器，使蠟塊與刀刃接觸，旋緊刀座和蠟塊支持器。（5）修整蠟塊（粗切）：勻速旋轉(zhuǎn)切片輪，修切蠟塊表面至包埋其中的組織塊完整地全部切到。4．切片步驟：33（6）調(diào)節(jié)切片厚度調(diào)節(jié)器（一般為4~6μm），進行切片，切出的蠟片應(yīng)連續(xù)成蠟帶。蠟帶應(yīng)完整無缺，厚度適宜、均勻，無刀痕、顫痕、皺折、開裂、缺損、松解等。（7）以專用小鑷子輕輕夾到蠟片，放入伸展器的溫水中（42℃左右），使切片全面展開。（8）將蠟片附貼于包被有粘附劑的載玻片上，蠟片應(yīng)置放在載玻片右（或左）2/3處的中央，蠟片與載玻片之間無氣泡。（9）放入溫箱中，40～45℃約1小時烘干即可。（6）調(diào)節(jié)切片厚度調(diào)節(jié)器（一般為4~6μm），進行切片，切出34（七）染色:1、染料及染色液簡介：

（1）蘇木精

（2）洋紅

（3）蘇丹Ⅲ

（4）伊紅

（5）堿性品（復）紅

（6）結(jié)晶紫

（7）亞甲藍或美藍

（8）甲基綠

（七）染色:352、Ehrlich蘇木精的配制蘇木精2克、銨明礬3克、無水酒精100毫升、甘油100毫升、蒸餾水100毫升。此液配成后，須經(jīng)1～2月，待它氧化成熟以后才能應(yīng)用，故必須先配制。3、伊紅液配制：伊紅2克、90%酒精（或蒸餾水）200毫升。2、Ehrlich蘇木精的配制36（1）取組織塊，經(jīng)固定后，常規(guī)石蠟包埋，切片，厚4~6μm。（2）切片常規(guī)二甲苯脫蠟，下行酒精至水．（3）明礬蘇木精液染色5—10min，自來水洗去浮色。（4）1%鹽酸乙醇分化20s（提插數(shù)下）。（5）自來水浸泡1h。4、HE染色（1）取組織塊，經(jīng)固定后，常規(guī)石蠟包埋，切片，厚4~6μm。37（6）上行酒精脫水：70％乙醇5min→80％乙醇5min→90％乙醇5min。（7）置1%伊紅液2—5min。（8）常規(guī)脫水，透明，封片．（6）上行酒精脫水：70％乙醇5min→80％乙醇5min→38胞核，嗜堿性，染為紫藍色胞質(zhì)，嗜酸性，染為紅色胞核，嗜堿性，染為紫藍色胞質(zhì)，嗜酸性，染為紅色395、關(guān)于HE染色時注意事項：（1）用含升汞的固定液固定的組織塊,在切片染色前，應(yīng)進行脫汞。具體方法：切片脫蠟，逐次進入70%酒精后，入稀碘液（碘1g，碘化鉀2g，蒸餾水3000ml）內(nèi)5～10min。蒸餾水稍洗，入5%硫代硫酸鈉溶液內(nèi)5min。蒸餾水充分洗后進入染色。（2）切片必須要充分干燥后才能進行染色；而染色過程中切忌讓切片干燥。5、關(guān)于HE染色時注意事項：（1）用含升汞的固定液固定的組40（3）用伊紅水溶液染切片時，往往在經(jīng)脫水的低濃度酒精時極易脫色，特別是對于細胞密集的組織更易出現(xiàn)這種情況。而用95%酒精配制的1%伊紅染液則可獲較滿意效果。（4）切片染蘇木精后，分色(1%鹽酸乙醇)這一步驟極為重要，應(yīng)在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清晰，而細胞質(zhì)等基本無色為佳。如果發(fā)現(xiàn)過染，可以延長分色時間，若染色太淺，則應(yīng)重新染色后再行分色，總之必需分色至核很清楚而背景無色才能往下進行。（3）用伊紅水溶液染切片時，往往在經(jīng)脫水的低濃度酒精時極易脫41（5）當切片從酒精移入二甲苯透明時，產(chǎn)生白色云霧，致使切片呈現(xiàn)模糊不透明狀態(tài)，是由于脫水不徹底或用于脫水的各級酒精不純所致。應(yīng)將切片退回無水酒精重新脫水，如再不透明時，則應(yīng)更換無水酒精。（6）封固時，蓋玻片一定要大于切片，如有漏出部分則不久將會褪色。（5）當切片從酒精移入二甲苯透明時，產(chǎn)生白色云霧，致使切片呈42組織學制片技術(shù)組織學與胚胎學教研室組織學制片技術(shù)組織學與胚胎學教研室43目的要求1、了解組織學制片的基本程序；2、熟悉HE染色的步驟；3、掌握HE染色結(jié)果的觀察。目的要求1、了解組織學制片的基本程序；441．切片標本：組織經(jīng)固定、切片（包括冰凍切片、石蠟切片及火棉膠切片）染色、封固而制成的各種玻片標本。它為組織學中最常用的標本。一、組織學常用的幾種標本類型1．切片標本：組織經(jīng)固定、切片（包括冰凍切片、石蠟切片及火棉452．鋪片標本：將腸系膜或皮下組織鋪于載玻片上，經(jīng)固定、染色、封固而制成的標本。2．鋪片標本：將腸系膜或皮下組織鋪于載玻片上，經(jīng)固定、染色、463．涂片標本：主要是將液態(tài)組織如血液、骨髓、痰液、腹水、精液等液體涂抹于載玻片上，經(jīng)固定、染色制成的組織標本，以供觀察細胞的形態(tài)與其微細結(jié)構(gòu)。血液涂片宮頸涂片3．涂片標本：主要是將液態(tài)組織如血液、骨髓、痰液、腹水、精液474．磨片標本：不經(jīng)脫鈣及切片手續(xù)，而直接用手工在磨石上磨制成薄片，以便在顯微鏡下觀察的骨、牙磨片標本。大麗紫染色4．磨片標本：不經(jīng)脫鈣及切片手續(xù)，而直接用手工在磨石上磨制成485．分離標本：將極小組織塊用化學藥物的水溶液浸泡后，溶去其細胞間質(zhì)，采用機械分離方法（如振蕩、針撥等方式）使之分離成單個而又完整的細胞，經(jīng)染色后涂于載玻片上進行鏡檢。5．分離標本：將極小組織塊用化學藥物的水溶液浸泡后，溶去其細496．壓片標本：組織經(jīng)化學藥物軟化及染色后，用蓋片壓封于載玻片上進行鏡檢的標本。如運動終板的制作。6．壓片標本：組織經(jīng)化學藥物軟化及染色后，用蓋片壓封于載玻片507．整裝標本：一種是將很小的動物或早期胚胎經(jīng)固定、染色后，封固于載玻片上。另一種是將小動物、胚胎或病變器官經(jīng)固定后，保存于固定液中瓶裝供肉眼觀察用?？闪私馀唧w的表面立體形態(tài)特征及病變部位與周圍組織的毗鄰關(guān)系。7．整裝標本：一種是將很小的動物或早期胚胎經(jīng)固定、染色后，封518．活體標本：在組織細胞生活狀態(tài)下進行觀察的標本，或生活狀態(tài)下進行活體染色后制成的標本。8．活體標本：在組織細胞生活狀態(tài)下進行觀察的標本，或生活狀態(tài)529．血管注射標本：一種是將樹脂類鑄形劑經(jīng)血管灌注后，用強酸或強堿腐蝕血管周圍組織而制成的血管鑄形標本，可瓶裝供肉眼觀察或進一步處理后作掃描電鏡觀察。另一種是將染料加明膠配制成染色液注入血管內(nèi)，然后取材、固定、包埋、切片和封固所制成的組織切片標本。這類標本主要用于了解血管的走行及其與所支配組織或器官的相互關(guān)系。9．血管注射標本：一種是將樹脂類鑄形劑經(jīng)血管灌注后，用強酸53組織切片的制作方法有：石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、超薄切片（電鏡標本）、樹脂切片、碳蠟切片等。石蠟切片法是最常用的方法，本節(jié)將較詳細講授其制作步驟。二、組織切片的常規(guī)制作（一）概述組織切片的制作方法有：石蠟切片法、冰凍切片法、54組織切片制作方法的基本程序為：取材→固定→脫水→透明→包埋→切片→染色→封固。組織切片制作方法的基本程序為：55組織學制片技術(shù)課件56（1）頸椎脫臼法（2）斷頭法（3）麻醉法（4）空氣栓塞法：（二）動物的致死與取材1、動物致死法：

2、組織取材時應(yīng)注意：(1)所取材料越新鮮越好；(2)切取組織的刀剪刃口必須鋒利；(3)取材時必須考慮切面的方向；(4)組織塊應(yīng)力求小而薄；(5)收縮較大的新鮮組織；(6)注意清潔；（1）頸椎脫臼法（2）斷頭法（3）麻醉法（4）空57使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，終止或抑制外源性和內(nèi)源性酶活性，防止組織自溶；使組織成份轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)從而有利于保存。這就是固定的基本意義。（三）標本的固定1．固定的目的使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，終止或抑制外源性和內(nèi)源性酶活性，防止組織58(1)組織塊不宜太大，一般以厚度為2毫米，長度不超過0.5厘米*0.5厘米。(2)固定液的量一般以組織塊大小的30倍為宜，最好在固定組織的瓶底墊上脫脂棉或幾層紗布以使固定液能從上下左右前后各方都能滲入組織塊。(3)固定的時間，一般以24小時為宜。2．固定的注意事項(1)組織塊不宜太大，一般以厚度為2毫米，長度不超過0.5厘59(4)后固定：柔軟組織在新鮮時不易切成小塊，往往采用重新固定法處理。（5）特殊固定：神經(jīng)組織以在活體動物灌流固定后再重新投入固定液為佳，有些組織如肺則采用由氣管注射固定液后再投入固定液為好。(4)后固定：柔軟組織在新鮮時不易切成小塊，往往采用重新固60常用的固定液有：（1）10%福爾馬林液：商品甲醛（36%—40%甲醛水溶液）配成固定液其濃度為3.6%—4%，也就是習慣上稱為10%的福爾馬林液。（2）10%中性緩沖福爾馬林液：商品甲醛10ml，0.1mol/LpH7.4PBS90ml。3．固定劑用以固定組織的藥劑，稱為固定液。常用的固定液有：3．固定劑用以固定組織的藥劑，稱為固定液。61（3）4%多聚甲醛磷酸緩沖液（pH7.4）（4）Bouin’s液：苦味酸飽和水溶液75份，甲醛25份，冰醋酸5份配制而成。

組織學制片技術(shù)課件62（1）灌注法（Irrigationmethod）自左心室插入主動脈，先以生理鹽水沖冼血液后，注入固定液，30min后取材，置同一固定劑后固定。（2）浸入法（Immersionmethod）

。4．固定方法（1）灌注法（Irrigationmethod）自左心63材料固定后，藥劑繼續(xù)留在組織中，易使組織破壞，必須用水或酒精洗去。5．固定后處理三種方式進行處理：（3）直接入脫水劑。（2）酒精充分洗滌（Bouin’s液含苦味酸）；（1）流水沖洗（鉻酸或鉻酸鹽固定的組織）；材料固定后，藥劑繼續(xù)留在組織中，易使組織破壞，必須用641、目的：脫水與透明的目的在于為石蠟滲透至組織塊內(nèi)部以便進一步包埋做必要的準備。脫水必須從低濃度開始，逐漸轉(zhuǎn)入高濃度脫水劑。另外脫水必須進行得很徹底。

2、常用脫水劑：（1）酒精：

（2）丙酮：

（四）脫水與透明1、目的：脫水與透明的目的在于為石蠟滲透至組織塊內(nèi)部以便進653、常用的透明劑有二甲苯、甲苯、氯仿等。二甲苯：透明組織的能力強，但易使組織收縮和變脆，故在二甲苯中不宜擱置太久。氯仿：其透明能力遠比二甲苯慢，透明時間可以延長至24小時也無妨。

3、常用的透明劑有二甲苯、甲苯、氯仿等。661．

目的：由于生物體的組織有各種硬度不同的成份，必須加石蠟等作支持物質(zhì)滲入組織塊內(nèi)部，并將組織塊包埋起來，然后用切片機以制作極薄的切片。2．

種類：包埋物質(zhì)目前廣泛采用的除石蠟外，還有火棉膠、炭蠟、明膠以及環(huán)氧樹脂、OTC(冰凍切片包埋劑）等。（五）包埋1．目的：由于生物體的組織有各種硬度不同的成份，必須加石蠟67商品石蠟的處理：浸蠟：包埋：通常使用包埋盒。石蠟包埋法：

反復溶化以增加石蠟的硬度和密度。溫度不能超過該石蠟的溶點的2℃以上；1~2h。商品石蠟的處理：石蠟包埋法：反復溶化以增加石蠟的硬度和密68包埋通常使用組織包埋機、包埋盒及配套使用的不銹鋼模具。把熔蠟倒入模具內(nèi)，再用加熱的彎曲鈍頭鑷子夾取已經(jīng)過浸蠟的組織塊，使切面朝下平正地置放于模具底面的中央處，然后放上包埋盒，繼續(xù)加滿蠟，待包埋盒表面的熔蠟凝固后，將其移入加冰塊的冷水中加速凝固，包埋即告完成。包埋通常使用組織包埋機、包埋盒及配套使用的不銹69170%乙醇常溫12～24h280%乙醇常溫12～24h390%乙醇常溫2～3h495%乙醇Ⅰ常溫1～2h595%乙醇Ⅱ常溫1～2h6100%乙醇Ⅰ常溫1h7100%乙醇Ⅱ常溫1h8二甲苯Ⅰ常溫20~30min9二甲苯Ⅱ常溫20~30min10石蠟Ⅰ48~50℃0.5h11石蠟Ⅱ48~50℃0.5h12石蠟Ⅲ58~60℃0.5h13石蠟Ⅳ58~60℃0.5h組織塊處理時間表170%乙醇常溫12～24h280%乙醇常溫12～70石蠟切片機可分三個部分，一是安裝切片刀的部分，有調(diào)節(jié)刀片斜度和固著刀片的螺旋。一是安裝材料的部分，也有螺旋可以調(diào)節(jié)材料的位置。另一是操縱在旋轉(zhuǎn)中向前推進的部分，控制著切片的厚薄，是比較重要而復雜的部分。（六）組織切片技術(shù)1、切片機簡介：石蠟切片機可分三個部分，一是安裝切片刀的部分，有調(diào)節(jié)71德國冰凍切片機冰凍切片機制冷系統(tǒng)自動進樣/切片系統(tǒng)照明系統(tǒng)德國冰凍切片機冰凍切片機722、載玻片和蓋玻片處理：新載玻片上有油污，必須經(jīng)過清潔液浸泡、充分漂洗、酒精浸泡、烤干備用。2、載玻片和蓋玻片處理：新載玻片上有油污，必須經(jīng)過清潔液浸泡73

(1)明膠液：這是粘片最常用的膠液，簡便優(yōu)良。(2)蛋白甘油：雞蛋清50ml，甘油50m1，水楊酸納1g。（3）樹脂膠：又稱白色乳膠，使用濃度為1%～2%，以蒸餾水稀釋即可。（4）多聚賴氨酸，APES（3-氨丙基-乙氧基甲硅烷）。3、載玻片上涂粘附劑：(1)明膠液：這是粘片最常用的膠液，簡便優(yōu)良。3744．切片步驟：

（1）切片刀或一次性切片刀必須鋒利。（2）將切片刀安裝在持刀座上（以15°為宜）。（3）將蠟塊（包埋盒）固定于支持器上，調(diào)整蠟塊和刀刃至適當位置。（4）細心移動刀座或蠟塊支持器，使蠟塊與刀刃接觸，旋緊刀座和蠟塊支持器。（5）修整蠟塊（粗切）：勻速旋轉(zhuǎn)切片輪，修切蠟塊表面至包埋其中的組織塊完整地全部切到。4．切片步驟：75（6）調(diào)節(jié)切片厚度調(diào)節(jié)器（一般為4~6μm），進行切片，切出的蠟片應(yīng)連續(xù)成蠟帶。蠟帶應(yīng)完整無缺，厚度適宜、均勻，無刀痕、顫痕、皺折、開裂、缺損、松解等。（7）以專用小鑷子輕輕夾到蠟片，放入伸展器的溫水中（42℃左右），使切片全面展開。（8）將蠟片附貼于包被有粘附劑的載玻片上，蠟片應(yīng)置放在載玻片右（或左）2/3處的中央，蠟片與載玻片之間無氣泡。（9）放入溫箱中，40～45℃約1小時烘干即可。（6）調(diào)節(jié)切片厚度調(diào)節(jié)器（一般為4~6μm），進行切片，切出76（七）染色:1、染料及染色液簡介：

（1）蘇木精

（2）洋紅

（3）蘇丹Ⅲ

（4）伊紅

（5）堿性品（復）紅

（6）結(jié)晶紫

（7）亞甲藍或美藍

（8）甲基綠