實(shí)驗(yàn)三：巨噬細(xì)胞課件

實(shí)驗(yàn)三：巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察第三組：孫佃鵬王湞東王淋淋王坤安王存理覃榮活實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、通過對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞血紅細(xì)胞的活動(dòng)觀察，加深理解細(xì)胞吞噬作用的過程和意義。2、掌握小白鼠腹腔注射給藥方法和頸椎脫臼處死方法。實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞吞噬原來是單細(xì)胞動(dòng)物攝取營養(yǎng)物質(zhì)的方式，也是原始的防御作用。隨著動(dòng)物界的進(jìn)化，在高等動(dòng)物中，則發(fā)展為大小兩類吞噬細(xì)胞，即巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞，成為非特異性免疫的重要組成部分。巨噬細(xì)胞（macrophage,MΦ）是結(jié)締組織中的一種防衛(wèi)細(xì)胞，它具有強(qiáng)大的吞噬作用，能吞噬侵入體內(nèi)的各種異物，如染料顆粒，細(xì)菌和組織碎片等。巨噬細(xì)胞由骨髓干細(xì)胞分化生成，然后進(jìn)入血液到達(dá)各組織內(nèi)，并進(jìn)一步分化為各種巨噬細(xì)胞。當(dāng)病原微生物或其他異物侵入機(jī)體時(shí)，能招引巨噬細(xì)胞，而巨噬細(xì)胞又有趨化性，能響應(yīng)招引因子的招引，產(chǎn)生活躍的變形運(yùn)動(dòng)，主動(dòng)向病原體或異物移行，在接觸到病原體或異物時(shí)形成吞噬性溶酶體，通過其中水解酶等的作用，將病原體殺死，消化分解，最后將不能消化的殘?jiān)懦?xì)胞外。實(shí)驗(yàn)用品一、材料1、小白鼠2、1%雞血細(xì)胞懸液自健康雞翼經(jīng)靜脈采血或從集市殺雞處接血1ml（防止污染），放入盛有4mlAlsever溶液瓶中，混勻置4℃冰箱保存?zhèn)溆茫ㄒ恢軆?nèi)使用)。使用前加入0.85%生理鹽水離心（1500/min10min）洗滌兩次，再用生理鹽水配成1%濃度懸液。二、試劑1、0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液臺(tái)盼藍(lán)（Trypanblue）0.4g0.85%的生理鹽水100ml2、6%的淀粉肉湯（含臺(tái)盼藍(lán)染液）牛肉膏0.3g蛋白胨1.0g氯化鈉0.5g蒸餾水100ml加熱后加入可溶性淀粉6.0g，促使溶解，再煮沸滅菌，4℃冰箱保存。用時(shí)水浴融化，加入0.4%臺(tái)盼藍(lán)適量混勻，使成藍(lán)色。臺(tái)盼藍(lán)或稱臺(tái)盼蘭、錐蟲藍(lán)、曲利苯藍(lán)，是一種細(xì)胞活性染料，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性（細(xì)胞活死性）。正常的活細(xì)胞，膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，使之不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，膜的通透性增加，臺(tái)盼藍(lán)可進(jìn)入細(xì)胞，與DNA結(jié)合，使之著色。臺(tái)盼藍(lán)可被巨噬細(xì)胞吞噬，故可用于巨噬細(xì)胞的活體染色劑。臺(tái)盼藍(lán)對人體有毒，操作小心?。?！臺(tái)盼藍(lán)簡介3、Alsever（阿氏液）溶液葡萄糖2.05g檸檬酸鈉（Na9C6H5O7·2H2O）0.89g檸檬酸（C6H5O7·H2O）0.05g氯化鈉0.42g蒸餾水100ml。調(diào)PH至7.2，過濾滅菌或高壓滅菌10min，4℃冰箱保存。三、器材注射器、解剖盤、剪刀、鑷子、吸管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、顯微鏡試驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)前一天，小白鼠腹腔注射1ml含臺(tái)盼藍(lán)的淀粉肉湯。實(shí)驗(yàn)時(shí)，腹腔注射1ml的1%雞血紅細(xì)胞懸液。解剖小鼠，玻棒蘸取適量腹腔液于干凈載玻片上，顯微鏡下觀察。20min后，頸椎脫臼法處死小白鼠。淀粉肉湯，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，并增加巨噬細(xì)胞吞噬活性。巨噬細(xì)胞吞