您身邊具有輔助降血壓功能的物質(zhì)(保健品)

PAGEPAGE45具有輔助降血壓功能的物質(zhì)血壓（bloodpressure，BP）是血液在血管內(nèi)流動時，對血管壁產(chǎn)生的側(cè)壓力。它是推動血液在血管內(nèi)流動的動力。包括動脈血壓、毛細血管壓和靜脈血壓。人們常說的血壓是指動脈血壓，心室收縮，血液從心室流入動脈，此時血液對動脈的壓力最高，稱為收縮壓（systolicbloodpressure，SBP）。心室舒張，動脈血管彈性回縮，血液仍慢慢繼續(xù)向前流動，但血壓下降，此時的壓力稱為舒張壓（diastolicbloodpressure，DBP）。正常的血壓是血液循環(huán)流動的前提，血壓在多種因素調(diào)節(jié)下保持正常，從而提供各組織器官以足夠的血量，藉以維持正常的新陳代謝。血壓異常（低血壓、高血壓）會造成嚴重后果。高血壓是目前最常見的血壓異常情況。一、對高血壓的認識高血壓（hypertension）是以體循環(huán)動脈壓增高為主要表現(xiàn)的臨床綜合征，可伴有心臟、血管、腦和腎臟等器官功能性或器質(zhì)性改變的全身性疾病，是最常見的心血管疾病?？煞譃樵l(fā)性高血壓和繼發(fā)性高血壓兩大類。在絕大多數(shù)患者中，高血壓的病因不明，稱之為原發(fā)性高血壓（primaryhypertension），比例占高血壓患者的90%～95%以上；血壓升高是由于某些疾病的一種臨床表現(xiàn)，本身有明確而獨立的病因，稱為繼發(fā)性高血壓（secondaryhypertension），占總高血壓患者的5%～10%左右。我國目前采用國際上統(tǒng)一的高血壓診斷標準，WHO/ISH（世界衛(wèi)生組織及國際高血壓聯(lián)盟）1999年規(guī)定：①理想血壓：收縮壓<120mmHg、舒張壓<80mmHg。②正常血壓：收縮壓<130mmHg、舒張壓<85mmHg。③正常高值：收縮壓130～139mmHg、舒張壓85～89mmHg。④高血壓：收縮壓≥140mmHg和（或）舒張壓≥90mmHg。以上標準適用于男女兩性任何年齡的成人，對于兒童，目前尚無公認的高血壓診斷標準，但通常低于成人高血壓診斷的水平。二、高血壓的病因及危害近年來流行病學調(diào)查資料顯示，盡管人們對高血的研究和認識都有了很大的提高，檢測手段和治療方法也取得了很大的進步，但高血壓仍是心血管疾病死亡的重要原因之一。高血壓發(fā)病的原因很多，現(xiàn)代醫(yī)學認為主要原因來自遺傳和環(huán)境兩個方面。一般認為高血壓是在一定的遺傳背景下由于多種后天環(huán)境因素作用使正常血壓調(diào)節(jié)機制失代償所致。人體血壓大小主要決定于心排血量及體循環(huán)的周圍血管阻力，一切影響這兩方面的因素均可導(dǎo)致血壓異常。人體本身具有調(diào)節(jié)異常血壓的機制，一般分為神經(jīng)性調(diào)節(jié)（快）和體液性調(diào)節(jié)（慢）。血壓的快速調(diào)節(jié)主要通過壓力感受器及交感神經(jīng)活動來實現(xiàn)，而慢性調(diào)節(jié)則主要通過腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)及腎臟對體液容量的調(diào)節(jié)活動來完成。如果這兩類血壓調(diào)節(jié)機制失去平衡則會導(dǎo)致高血壓的產(chǎn)生。高血壓早期無明顯病理學改變，僅表現(xiàn)為心排血量增加和全身小動脈張力的增加。高血壓持續(xù)及進展即引起全身小動脈病變，小動脈中層平滑肌細胞增殖和纖維化，管壁增厚和管腔狹窄，使外周阻力持續(xù)增高，導(dǎo)致重要靶器官心、腦、腎組織缺血，長期高血壓及伴隨的危險因素可促進動脈粥樣硬化的形成，該病變主要累及中、大動脈。最終引起腦、心、腎、視網(wǎng)膜等重要器官結(jié)構(gòu)與功能的損害，導(dǎo)致這些器官功能衰竭，迄今仍是心、腦血管疾病死亡的重要原因之一。①心：由于長期周圍血管阻力升高，加重心臟負荷，早期發(fā)生代償性左心室肥厚，隨著病情發(fā)展心臟繼續(xù)擴張，最后可能發(fā)生心力衰竭及嚴重心律失常。長期高血壓可促使脂質(zhì)在大、中動脈內(nèi)膜沉積，引起動脈粥樣硬化的形成，尤其是冠狀動脈硬化的發(fā)展。②腦：長期的血壓升高，使腦部小動脈硬化及血栓形成，易于破裂出血或痙攣導(dǎo)致腦血栓的形成。③腎：由于腎臟入球和出球小動脈痙攣、硬化、退變導(dǎo)致腎實質(zhì)的缺血、缺氧，最終導(dǎo)致腎小球纖維化、萎縮至腎衰竭。④視網(wǎng)膜：血壓長期升高使得視網(wǎng)膜小動脈從痙攣到硬化，發(fā)生視網(wǎng)膜出血或滲出。三、高血壓的預(yù)防和治療1992年國際心臟會議提出高血壓預(yù)防的主要內(nèi)容是的“健康四大基石”，即“合理膳食、適量運動、戒煙限酒、心理平衡”，其核心就是健康的生活方式，可使高血壓的發(fā)病率下降55%。①合理膳食合理的膳食很重要，以低脂、低鈉、低膽固醇的飲食為主，食鹽攝入量的標準為每天少于6克。少吃高脂肪、高鹽、高熱量的食品，多吃新鮮蔬菜、水果和堅果，從飲食上控制體重的增加。②適量運動進行適度的體育鍛煉，如快走、慢跑、健身操等，以促進熱量的消耗。③戒煙限酒吸煙和過量飲酒均會刺激心率增加和血管收縮，導(dǎo)致血壓升高，更重要的是，吸煙是腦卒的重要危險因素。因此，為了降低心血管病的危險因素，吸煙的人應(yīng)爭取戒煙。每日飲少量的酒，能有效地降低高血壓病及冠心病的患病率和病死率。適量飲酒能緩解緊張情緒，過量則適得其反。④心理平衡緊張、急躁和焦慮會使血壓升高。勞逸結(jié)合，心情放松，保持足夠的睡眠，養(yǎng)成良好的生活習慣。四、具有輔助降血壓功能的物質(zhì)對于“輔助降血壓”功能認定，保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范（2003版）中保健食品的功能實驗是這樣認定“輔助降血壓”功能的：選擇符合條件的原發(fā)性高血壓患者（收縮壓≥140mmHg和或舒張壓≥90mmHg），受試者在試食觀察期間不改變原有抗高血壓藥物治療方案的基礎(chǔ)上，按推薦劑量和服用方法服用30～45天，血壓達到以下標準為有效：舒張壓下降≥10mmHg或降至正常；收縮壓下降≥20mmHg或降至正常。按癥狀輕重（重癥3分，中癥2分，輕癥1分）統(tǒng)計食前后積分值和計算改善率，癥狀改善1分及1分以上為有效。研究輔助降血壓功能食品目的不是在于單純降低患者血壓,重點是在于改善高血壓癥狀,促進心、腦、腎、血管病理改變的恢復(fù)?，F(xiàn)代醫(yī)學研究證明,西醫(yī)降壓藥和中醫(yī)降壓藥各有其優(yōu)缺點。西藥并未解決導(dǎo)致血壓升高的病理因素,一旦停藥血壓就會很快反彈升高,使患者必須終身服藥。中藥的降壓效果雖不如西藥,但能通過其對臟腑機能的調(diào)節(jié),改善導(dǎo)致血壓升高的病理因素而達到防治血壓升高的效果。且中醫(yī)認為藥補不如食補,具有藥食兩用的藥物更是高血壓患者的理想選擇。研究表明,降血壓功能食品功效成分主要有黃酮（蘆丁等），皂苷，不飽和脂肪酸，粗多糖，低聚糖類，維生素，鉀鎂硒等微量元素等。目前，市場上共有60多種“輔助降血壓”功能的保健食品，產(chǎn)品大多與輔助降血脂、改善睡眠、抗氧化、輔助降血糖等功能搭配，大多輔助降血壓物質(zhì)也具有降血脂的功能。從劑型上來看，以中草藥為原料的膠囊、茶飲、提取物沖劑最為常見。國家衛(wèi)生部和國家食品藥品監(jiān)督管理局批準具有輔助降血壓功能的部分物質(zhì)：杜仲，杜仲葉，羅布麻葉，葛根、決明子、丹參、天麻，綠茶，澤瀉，三七，絞股藍，菊花，大蒜油，海澡酸鉀，?；撬?，山楂，銀杏葉，蘆?。ㄌ崛∥铮t花，藏紅花，大棗，甘草，海帶，蒲公英，夏枯草，玉米胚芽油，硒及富硒食品，維生素E，藜蒿，槐米，昆布，桑白皮，微晶纖維素，蜜環(huán)菌菌絲體。其它具有輔助降血壓功能的物質(zhì)：γ-氨基丁酸（GABA），茶氨酸，低聚糖類，虎杖，降血壓肽，鉤藤，荷葉，野菊花，淫羊藿，可可多酚，靈芝，大豆低聚肽，海藻酸低聚糖，釀造醋，牡蠣肉，貝母，無花果，芹菜等等。杜仲和杜仲葉（一）主要功效成分介紹1．組成、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)杜仲(拉丁植物名EucommiaulmoidesOliver)是名貴藥材，英文名CORTEXEUCOMMIAE，別名思仙、思仲、木綿、石思仙、扯絲皮、絲連皮、玉絲皮、絲棉皮等。為杜仲科植物的干燥樹皮。4～6月剝?nèi)?，刮去粗皮，堆置“發(fā)汗”至內(nèi)皮呈紫褐色，曬干而成。氣微，味稍苦。杜仲入藥在我國已有2000多年的歷史，祖國醫(yī)學認為，杜仲味甘、微辛、性溫，具有補肝腎、強筋骨、安胎之功效[1][2]。近年來，許多學者對杜仲的化學成分進行了大量研究，發(fā)現(xiàn)杜仲的皮、葉有相似的化學成分和藥理作用。杜仲化學成分復(fù)雜，目前已確定有活性成分有木脂素及其苷類化合物[3]，木脂素包括雙環(huán)氧木質(zhì)素類(如松脂素單糖甙、松脂素二糖甙或稱松脂醇二葡萄糖甙，中脂素、中脂素單糖甙，中脂素二糖甙、丁香素、丁香素單糖甙、丁香素二糖甙)；單環(huán)氧木質(zhì)素類(如橄欖素、橄欖素二糖甙)、環(huán)木質(zhì)素類(如橄欖素)；新木質(zhì)素類(如二羥基脫氫二松柏醇、柑桔素B)；倍半木質(zhì)素類(如耳草素二糖甙)等。其中松脂素二糖甙為杜仲皮主要降壓成分，丁香素二糖甙有抗癌活性，一些木質(zhì)素類化合物對CAMP磷酸二酯酶有強的抑制活性，故可成為血管擴張劑[4]；苯丙素類化合物，木脂素的前體，主要有綠原酸（杜仲葉主要功能指標之一）、咖啡酸、二氫咖啡酸、松柏酸、愈創(chuàng)木丙三醇、松柏苷、丁香苷、間羥基苯丙酸、綠原酸甲酯、香草酸、β-谷甾醇、熊果酸、寇布拉苷[5]；環(huán)烯醚萜類；黃酮類化合物（槲皮素、蘆丁類物質(zhì)）；兒茶素；氨基酸；微量元素及維生素、杜仲膠、杜仲抗真菌蛋白、揮發(fā)性成分（不飽和脂肪酸類）、萜類和甾醇類化合物、單糖和多糖類化合物等等。杜仲有種類繁多的化學成分和廣泛的藥理藥效，臨床應(yīng)用前景極為廣闊，在醫(yī)藥領(lǐng)域有巨大潛力。大量動物實驗表明，杜仲的皮、葉提取物有降血壓、降血脂、降血糖、抗腫瘤、抗衰老作用、利尿、增強免疫力等功效作用。經(jīng)廣泛研究證明，杜仲提取物中取有降血壓功能的活性成分為木脂素類化合物、蘆丁和槲皮素等。木脂素類化合物是目前杜仲化學成分中研究最多、結(jié)構(gòu)最清晰、成分最明確的一類化合物，從杜仲中分離出的木脂素類化合物已有27種，其中多數(shù)為苷類化合物。結(jié)構(gòu)見表DZ01[6]。其中的松脂醇二葡萄糖苷是最主要的降壓成分。北京中醫(yī)學院李家實等[7]對杜仲皮和葉分別作了降壓實驗，結(jié)果表明，杜仲葉和皮中的生物堿、桃葉珊瑚甙、氯原酸、糖類均有同程度的降壓作用。此外，水溶性硅、鈣含量高，都可能參與對心血管功能的調(diào)節(jié)。松脂醇二葡萄糖苷，英文名稱：PinoresinolDiglucoside，分子式：C32H42O16，分子量：682.67，CAS號：63902-38-5，化學分類：Lignans木脂素類。松脂醇二葡萄糖苷是杜仲提取物中主要的降壓成分之一。圖DZ01松脂醇二葡萄糖苷分子結(jié)構(gòu)式蘆丁，英文名稱：Rutin，分子式：C27H30O16，分子量：610.51，CASNO：153-18-4，淺黃色針狀結(jié)晶（水），熔點176℃-178℃，難溶于冷水，可溶于熱水、甲醇、乙醇、吡啶，易溶于堿水。產(chǎn)品來源：蕓香葉、煙葉、棗、杏、杜仲、橙皮、番茄、蕎麥花等中。主要由醇提、萃取、層析、結(jié)晶等工序完成。保存于陰涼干燥、避光、避高溫。圖DZ02蘆丁分子結(jié)構(gòu)式槲皮素，英文名：Quercetin，又名櫟精，槲皮黃素，分子式：C15H10O7分子量：302.24，溶于冰醋酸，堿性水溶液呈黃色，幾乎不溶于水。二水合物為黃色針狀結(jié)晶（稀乙醇），在95-97°C成為無水物，熔點314°C（分解）。熔點314℃，極微溶于水和乙醚，溶于冰醋酸及堿性水溶液顯黃色等。幾乎不溶于水，乙醇溶液味很苦，可作為藥品，具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外還有降低血壓、增強毛細血管抵抗力、減少毛細血管脆性、降血脂、擴張冠狀動脈，增加冠脈血流量等作用。用于治療慢性支氣管炎。對冠心病及高血壓患者也有輔助治療作用。圖DZ03槲皮素分子結(jié)構(gòu)式表DZ01杜仲中已知27種木脂素化合物結(jié)構(gòu)[6]綠原酸，英文名：Chlorogenicacid；別名：氯原酸,咖啡鞣酸；化學名：(1S,3R,4R,5R)-3-[[3-(3,4-二羥基苯基)-1-氧代-2-丙烯基]氧]-1,4,5-三羥基環(huán)己烷甲酸；CASNO:327-97-9；分子式及分子量：C16H18O9=354.30。天然的綠原酸是由咖啡酸（Caffeicacid）與奎尼酸（Quinicacid，1-羥基六氫沒食子酸）生成的縮酚酸，是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物。圖DZ04綠原酸的分子結(jié)構(gòu)式2．生物學和藥理學功能杜仲降血壓功效很早就在動物和臨床試驗成功證實了。美國威斯康星大學CharlesJsih等[8]研究認為杜仲提取物中降血壓的有效成分是松脂醇二葡萄糖苷、杜仲綠原酸和桃葉珊瑚甙等。作用機理是由于其直接作用于血管平滑肌，使血管擴張?？梢愿纳聘哐獕喊Y狀，減少血管損傷，改善腦、腎等臟器的循環(huán)?？荡鎽?zhàn)等[9]用杜仲口服液灌胃自發(fā)性高血壓大鼠，實驗研究證實：杜仲口服液對自發(fā)性高血壓大鼠有明顯的降壓作用，且對機體健康無不良影響。黃志新等[10]用杜仲水提液對腎性高血壓小鼠灌胃，也證實具有降血壓作用，最大耐受量灌胃，也未見急性毒性反應(yīng)。李家實等[7]用杜仲水浸提物進行了急性降血壓試驗，發(fā)現(xiàn)杜仲的降壓作用與其中含有的綠原酸、桃葉珊瑚苷和糖類等物質(zhì)有關(guān)。李武明等人[11]通過對45例高血壓受試者臨床觀察發(fā)現(xiàn)，復(fù)方杜仲片具有較好的降壓作用，且能明顯改善臨床癥狀，并兼有降低TG、TC、ET、TXA2和升高NO的作用，無不良反應(yīng)；張瑛朝等[12]通過對60例高血壓受試者的臨床研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)方杜仲葉合劑對人體有明顯的降壓及調(diào)節(jié)血脂的作用，且對機體健康無不良影響。3．安全性（毒理）杜仲提取物的安全性[2]：小鼠LD50為17.3±0.52g/kg(煎劑小鼠腹注)。杜仲葉提取物的安全性[2]：①大鼠LD50>5.64g/kg(大鼠，經(jīng)口)。②對4周齡大鼠每日飼以5g/kg體重杜仲提取物，經(jīng)14d后，測體重，用乙醚麻醉后放血致死，解剖，觀察胸、腹部并測定其肝、腎、脾臟質(zhì)量，均無異常發(fā)現(xiàn)。③曾對成人12名每天給予含杜仲葉提取物6～12g/d×10d的飲料飲用，經(jīng)臨床藥理評價，確認無有害作用。④杜仲葉常作茶飲，不僅在中國，而且在日本也較普及。劉月鳳等[13]人對杜仲提取物的亞慢性毒理學研究表明，給小鼠以最大劑量18.2g/kg灌胃，7d內(nèi)動物均無異常反應(yīng)。小鼠精神狀態(tài)良好，無死亡發(fā)生，給藥后的第8天處死動物，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等均無異常發(fā)生。劉麗春等[14]對復(fù)方杜仲片的毒理學研究表明，復(fù)方杜仲片以灌胃給藥小鼠藥，測得最大耐受量為35.6g/kg，接近臨床劑量的200倍。在觀察期間，全部小鼠存活，剖檢，肉眼觀察主要臟器，未見心、肝、脾、肺、腎等主要臟器組織明顯異常。急性毒理學試驗也進一步證實了杜仲提取物為基本無毒物。黃武光等[15]用杜仲葉沖劑靜脈注射給藥麻醉貓和對小鼠灌胃進行急性毒性實驗，結(jié)果杜仲葉沖劑能使麻醉貓血壓平緩而較持久地明顯降低：對小鼠空腹最大耐受量灌胃，未見急性毒性反應(yīng)。因此認為杜仲葉沖劑具有明顯降壓作用，且無明顯急性毒性反應(yīng)。隋海霞等[16]運用急性毒性試驗、細胞毒性試驗、遺傳毒性試驗對杜仲進行了較系統(tǒng)的安全性評價。結(jié)果：杜仲的LD50為160.0g／kg；對CHO和CHL細胞的Ic50均為109．38mg／ml，并且在該劑量之下為陰性結(jié)果。認為杜仲屬無毒物，在較高劑量下對CHO和CHL細胞均表現(xiàn)出一定的毒性，該實驗條件下無細胞染色體畸變的遺傳毒性。張國紅等[17]研究杜仲康茶對大鼠性功能的影響及其對小鼠的急性毒性作用，以最大劑量給小鼠灌胃后觀察7d，全部動物存活．未觀察到急性毒性的發(fā)生。（二）功效成分的檢測方法1.松脂醇二葡萄糖苷的檢測方法目前，用于杜仲及提取物中松脂醇二葡萄糖苷的檢測方法有薄層色譜法、反相高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法。其中以反相高效液相色譜法報道最多。樣品經(jīng)提取后，在反相色譜柱上與雜質(zhì)分離，紫外檢測定量。伍慶,張明時,王興寧等[18]采用高效液相色譜法同時測定杜仲藥材中綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量，采用DiamonsilC18柱(5μm,250mm×4.6mm),以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15:85:0.5)為流動相,檢測波長227nm。樣品中綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加樣回收率分別為95%～98%,96%～103%;綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷的線性范圍分別為0.298～2.98μg，γ=0.999和0.872～8.72μg，γ=0.9998。王月茹,謝偉,王西芳等[19]采用高效液相色譜法測定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量，使用ODS-C18柱(5μm,4.6mm×250mm)為分析柱，流動相為：乙腈-0.1%磷酸(15:85)，檢測波長為227nm，流速為1.0mL/min，柱溫:30℃。松脂醇二葡萄糖苷在1.086～5.430μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(γ姜新義等[20]以正交設(shè)計方法確定樣品制備的最佳條件，采用HPLC法測定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量。于45℃下采用超聲提取20min，并用改良的色譜條件進行杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量測定，所得結(jié)果與采用現(xiàn)行中國藥典法(2005年版一部)測得的松脂醇二葡萄糖苷含量接近，含量測定中所采用的流動相為乙腈-水(15:85).獲得了對稱性良好的色譜峰和理想的分離度。所建方法樣品處理過程簡便、迅速,含量測定結(jié)果準確可靠、分離效果好、穩(wěn)定性好,可以快速并準確測定多批樣品張倩茹等[21]建立杜仲及相應(yīng)制劑中松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的含量測定方法，方法也采用高效液相色譜法測定，色譜條件中色譜柱采用AgilentEclipseXDB-C18150×4.6mm,5μm)，流動相:甲醇-水(26:74)，流速:1.0mL/min，檢測波長：230nm，柱溫為25℃，進樣量：10μL，PDG在0.05080～0.5080mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性(γ羅旭彪等[22]采用液相色譜-質(zhì)譜儀檢測杜仲中松脂醇二葡萄糖苷。流動相0.1%甲酸水溶液和甲醇體系，梯度洗脫，質(zhì)譜條件采用負離子掃描，定量離子為m/z519，待測物在0.03～0.45μg范圍內(nèi)呈良好線性(r=0.9920)。方法定性準確、重復(fù)性好。方法已經(jīng)成功地分析了杜仲的皮、葉、提取物、天麻杜仲膠囊和杜仲茶中9種活性成分。2.綠原酸、蘆丁和槲皮素功效成分的檢測方法目前氯原酸的分離與測定方法較多，主要有：高效液相色譜法、反相高效色譜法、紫外可見分光光度法、紙層析－紫外分光光度法、薄層掃描法、毛細管電泳法。吳紅等[23]采用紫外分光光度法及薄層色譜掃描法分別測定。紙層析紫外分光光度法(剪洗法)測得杜仲葉中氯原酸含量為1.949%，變異系數(shù)(CV)1.34%，回收率100.44%。薄層色譜掃描法測得含量為1.886%，變異系數(shù)1.72%，回收率101.27%。馬柏林等[24]利用氯原酸的配位效應(yīng)進行顯色的有關(guān)參數(shù)，建立了測定氯原酸的可見分光光度法。方法具有儀器簡單、靈敏度高、選擇性好、快速準確、容易普及等優(yōu)點。用于樣品中氯原酸測定的標準偏差為1.0%～3.1%，標準加入回收率為100.8%～102.4%。張澤楷等[25]采用高效液相色譜法(HPLC)同時測定杜仲降壓片中綠原酸、蘆丁含量。色譜條件：SpherisorbBDS-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫，流速1ml/min，檢測波長350nm，樣品中綠原酸、蘆丁加樣回收率分別為99%、98%。董娟娥等[26]建立了利用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)同時測定杜仲雄花及其產(chǎn)品中京尼平苷酸和綠原酸的方法。所用的色譜柱為Shim-packVP-ODS(150mm×4.6mm,5μm)，流動相為甲醇-水-乙酸(體積比為24∶75∶1)，檢測波長為240nm。在該色譜條件下綠原酸的含量在0.075～1.200g/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)0.9990。王柏強等[27]建立測定杜仲緩釋滴丸中綠原酸含量的高效液相色譜(HPLC)法。以迪馬C18柱(250mm×4.6mm，5μm)為色譜柱，乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為327nm。綠原酸在1.3～130.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積值線性關(guān)系良好，γ=0.9999(n=6)。該方法操作簡便,結(jié)果準確可靠。孫娟娟等[28]比較具有降壓作用的5個科屬代表性植物中蘆丁和槲皮素含量差異。建立一種反相高效液相色譜法同時測定中藥材(連翹、杜仲、槐花、金銀花、雪蓮花)中蘆丁和槲皮素的含量，2種黃酮化合物線性范圍為10～5000ng，平均加樣回收率均在97%～102%，精密度和重復(fù)性RSD均小于5%，定量限(S/N=10)低于5.0ng。何新榮等[29]建立采用高效毛細管電泳測定杜仲中有效成分綠原酸(CA)含量的方法。方法采用毛細管區(qū)帶電泳(CZE)，以內(nèi)標法測定。運行電解質(zhì)為含80mmol/L硼砂緩沖液-100mmol/L氫氧化鈉(20：1,pH=9.32),工作電壓30kV，柱溫25℃余濟海等[30]建立反相高效液相色譜法同時測定了杜仲葉中2種黃酮類成分—蘆丁和槲皮素的含量。色譜柱為Nova-PakC18(3.9mm×300mm,4μm)，流動相為甲醇-0.5%磷酸溶液(50:50)，流速0.6mL/min，檢測波長為356nm，蘆丁和槲皮素的線性范圍分別為0.246～4.92μg(γ=0.9999)和0.0846～1.692μg(γ=0.9999)，平均回收率(n=5)分別99.8%和102.1%。方法準確、快速、重現(xiàn)性好，適用于同時測定杜仲葉中黃酮類成分的含量。伍慶等[31]建立同時測定杜仲葉中蘆丁、槲皮素、山萘酚的高效液相色譜法。采用SpherisorbBDSC18柱(5μm,250mm×4.6mm)，以甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫，流速1mL/min，檢測波長350nm。蘆丁、槲皮素、山萘酚的線性范圍分別為0.579μg～5.79μg，γ=0.9999；0.12μg～1.20μg，γ=0.9998；0.109μg～1.09μg，γ=0.9999。陳望愛等[32]建立了分析比較杜仲和杜仲葉中揮發(fā)油和黃酮類的化學成分。對于揮發(fā)性成分,采用毛細管氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)技術(shù)和化學計量學的方法對各個色譜峰定性,并用色譜峰面積歸一法定量；對于黃酮類成分,采用高效液相色譜-二極管陣列(HPLC-DAD)分析技術(shù)并結(jié)合標準曲線法給蘆丁、槲皮素和山柰酚定量。王明艷等[33]利用分子自組裝技術(shù)制備了4-(3-吡啶基)-2-巰基咪唑(PMI)修飾金電極.采用一階微分線性掃描伏安法同時測定蘆丁和槲皮素的含量,發(fā)現(xiàn)兩氧化峰相差200mV左右.在優(yōu)化條件下,在共存溶液中當蘆丁及槲皮素分別在5.0～100.0μmol/L和10.0～150.0μmol/L濃度范圍內(nèi),其氧化峰電流與濃度有良好的線性關(guān)系,檢出限分別為1.0μmol/L和2.0μmol/L。林淼等[34]采用毛細管電泳/電化學檢測法(CE/ED)同時分離測定了杜仲葉、杜仲皮及市售杜仲保健品中蘆丁、抗壞血酸、金絲桃甙、綠原酸、槲皮素等多種生物活性成分的含量,考察了運行緩沖液酸度和濃度、分離電壓、氧化電位和進樣時間等實驗參數(shù)對分離、檢測的影響.在最優(yōu)化條件下，以300μm碳圓盤電極為檢測電極，檢測電位為+950mV(vs，SCE)，50mmol/L硼砂的運行緩沖液(pH9.0)中，各組分在20min內(nèi)可基本實現(xiàn)基線分離.各組分濃度與峰電流在3個數(shù)量級范圍內(nèi)呈良好線性，檢出限(S/N=3)在3.3×10-5～9.6×10-5g龔明貴等[35]用分光光度法測定杜仲花粉黃酮含量的方法。方法以蘆丁作為對照品，采用NaNO2-A1(NO3)3-NaOH體系顯色，R=0.9952，在波長510nm下檢測總黃酮含量為3.29%。張敏等[36]根據(jù)黃酮類化合物能與Al3+形成穩(wěn)定的熒光絡(luò)合物，建立一種測定杜仲葉總黃酮的新方法.用60%乙醇加熱回流提取杜仲葉有效成分，以蘆丁為標樣，選擇激發(fā)波長λex=436nm，發(fā)射波長λem=483nm，采用熒光分光光度法測定杜仲葉中總黃酮含量，方法檢出限為1.27×10-9mol/L，線性范圍在1.64×10-8～3.63×10-5mol/L之間，線性回歸方程:y=17.923x+1.398，相關(guān)系數(shù)γ=0.9989，平均回收率99.8%-104.2%，相對標準差(RSD)0.84%。（三）檢測方法實例方法一保健食品中松脂醇二葡萄糖苷和綠原酸含量的測定[16]1、方法提要建立同時測定杜仲藥材中綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷含量的高效液相色譜法。方法采用DiamonsilC18柱(5μm,250mm×4.6mm),以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15+85+0.5)為流動相,檢測波長227nm。樣品中綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加樣回收率分別為95%～98%,96%～103%，綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷的線性范圍分別為0.298μg~2.98μg，γ=0.9999和0.872μg~8.72μg,γ=0.9998。2、試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。2.1乙腈：色譜純。2.2甲醇。2.3磷酸。2.4綠原酸及松脂醇二葡萄糖苷標準品：中國藥品檢驗所。2.4.1標準品儲備液分別準確稱取2.4對照品適量,用60%甲醇溶解后置于25mL的容量瓶,并稀釋至刻度,配置成含綠原酸1.49mg/mL,松脂醇二葡萄糖苷4.35mg/mL的對照品儲備溶液。2.4.2標準品溶液應(yīng)用液分別準確吸取對照品儲備溶液1.00mL置于10mL的容量瓶中,用60%甲醇溶解并稀釋至刻度,配置成含綠原酸0.149mg/mL,松脂醇二葡萄糖苷0.435mg/mL的標準品應(yīng)用溶液。臨用現(xiàn)配。3、儀器及條件3.1回流裝置。3.2水浴鍋。3.3高效液相色譜儀：帶紫外檢測器或二級管陣列檢測器。3.4色譜條件色譜柱DiamonsilC18柱(5μm,250mm×4.6mm),流動相為乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15+85+0.5),檢測波長227nm。4、測定步驟4.1樣品處理供試品溶液精密稱取杜仲藥材粉末(過60目篩)2g，于100mL錐形瓶中,加入25mL60%甲醇溶液,稱定重量,在水浴上回流提取1h,冷卻后用60%甲醇補足重量。過0.45μm的濾膜供HPLC分析。4.2標準曲線分別準確吸取標準應(yīng)用液（2.4.2）綠原酸0.149mg/mL,松脂醇二葡萄糖苷0.435mg/mL，進樣2μL，5μL，10μL，15μL，20μL，按3.4色譜條件進行分析，外標法定量。4.3標準品和樣品色譜進樣量均為10μL，測定峰面積，用外標法計算含量。5、測定低限、回收率、精密度5.1線性關(guān)系綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷的回歸方程分別為：Y=267175X+1288.1,γ=0.9999,Y=188306X+280.73,γ=0.9998。綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷分別在0.298μg~2.98μg，0.872μg~8.72μg間呈良好的線性關(guān)系。5.2回收率和樣品提取液的穩(wěn)定性實驗精密稱取已測含量的杜仲藥材粉末6份,每份2g,按樣品含綠原酸及松脂醇二葡萄糖苷的80%,100%,120%精密加入綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷對照品儲備溶液,按4.1方法處理樣品。測得綠原酸及松脂醇二葡萄糖苷的回收率分別為95%~98%,96%~103%；精密度RSD分別為0.8%~1.7%,1.5%~2.7%,n=3。樣品溶液穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液,分別在0，2，4，6，8，10，12h測定,綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷含量的RSD分別為1.7%，2.2%，n=7。表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。5.3精密度對同一份杜仲樣品平行測定5次,綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分別為：0.23%，1.5%，n=5。同時稱取同一份杜仲樣品5份,按4.1方法進行樣品前處理,在3.4色譜條件下分別測定,綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分別為：0.76%，0.69%，n=5。6、譜圖圖DZ05杜仲提取物中綠原酸和松脂醇二葡萄苷色譜圖7、方法討論7.1提取溶劑的選擇綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷屬于芳香族化合物,易溶于水及強極的溶劑中,本文選擇甲醇-水、乙醇-水和水3種溶劑作為提取溶劑,結(jié)果表明,以60%的甲醇作為提取溶劑時,綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷提取較完全。7.2提取方法的選擇本實驗考慮了超聲、回流、索氏提取3種提取方法,發(fā)現(xiàn)回流提取效率明顯高于其他兩種提取方法;實驗中通過比較了提取溫度、提取時間對提取率的影響。結(jié)果以回流法提取、提取溫度80℃7.3檢測波長的選擇綠原酸和松脂醇二葡萄糖苷的對照品溶液的紫外分析表明,綠原酸在220nm,246nm,232nm,松脂醇二葡萄糖苷在227nm,280nm,288nm有較強吸收,對各波長進行比較,發(fā)現(xiàn)在227nm處兩組分都具有較好的靈敏度,應(yīng)此選擇227nm為檢測波長。方法二保健食品中蘆丁和槲皮素含量的測定[28]1、方法提要建立反相高效液相色譜法同時測定了杜仲葉中2種黃酮類成分—蘆丁和槲皮素的含量。色譜柱為Nova-PakC18(3.9mm×300mm，4μm)，流動相為甲醇-0.5％磷酸溶液(50:50)，流速0.6mL／min，檢測波長為356nm。蘆丁和槲皮素的線性范圍分別為0.246g～4.92g(相關(guān)系數(shù)0.9999)和0.0846g～1.2、試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。2.1甲醇：色譜純。2.2磷酸。2.3乙醇。2.4蘆丁和槲皮索對照品：中國藥品生物制品鑒定所。2.5對照品溶液。準確稱取蘆丁對照品6.15mg，槲皮素對照品2.16mg，用濃度70％甲醇溶液溶解后定容于25mL容量瓶中，配制成含蘆丁0.2460mg/mL和含槲皮素0.0864mg/mL的對照品混合溶液，用0.45μm濾膜過濾。3、儀器及條件3.1高效液相色譜儀：帶紫外檢測器或二級管陣列檢測器。3.2超聲波提取儀。3.3旋渦混勻器。3.4樣品粉碎機。3.5樣品篩：40目。3.6色譜條件流動相：甲醇-0.5％磷酸(50:50)，流速0.6mL/min，進樣體積l0μL，檢測波長326nm，柱溫25℃，外標法定量4、測定步驟4.1提取樣品粉碎后過40目篩，準確稱取約5.0g，置具塞三角燒瓶中，加入70％乙醇旋渦2min后超聲提取2h，提取液過濾，濾渣洗滌2次，合并濾液于50mL容量瓶中，乙醇定容至刻度，0.45μm濾膜過濾，4.2測定將4.1樣品提取液按（3.6）所述色譜條件進樣測定，同時分別準確吸取對照品混合溶液1.0μL、5.0μL、10μL、l5μL、20μL進樣分析，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標作標準曲線。5、測定低限、回收率、精密度5.1線性范圍以對照品的進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行線性擬合，蘆丁和槲皮素的回歸方程分別為：Y=2.01×105-1.92×104(γ=0.9999)，Y=2.32×10105-1.10×104(γ=0.9999)。蘆丁在0.246μg～4.92μg，槲皮素在0.0846μg～1.692μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。5.2回收率精密稱定已知蘆丁和槲皮素含量的杜仲葉5份，每份約5.0g，加入適量對照品混合溶液，按4.1所述方法制備樣品溶液，測定加樣樣品中兩組分含量，蘆丁和槲皮素的平均加樣回收率分別為99.8％、102.1％。5.3精密度5.3.1對照品測量的精密度。取對照品混合溶液重復(fù)進樣5次，進樣量10μL，以峰面積外標法定量，蘆丁、槲皮素峰面積RSD分別為0.3％和0.6％。5.3.2樣品測量的精密度。取杜仲葉供試樣品重復(fù)進樣5次，進樣量10μL，以峰面積外標法定量，蘆丁、槲皮素RSD分別為0.5％和0.7％。5.3.3樣品測量的穩(wěn)定性。取樣品提取液放置2h、4h、6h、8h后，進樣進樣分析，測得蘆丁、槲皮素峰面積RSD為1.1％和0.5％，說明樣品在測定時間內(nèi)穩(wěn)定。6、譜圖.圖DZ06HPLC測定杜仲中蘆丁和槲皮素色譜圖7、方法討論7.1采用超聲提取，以不同濃度的乙醇為提取劑，考察了2種黃酮類成分的提取效果。結(jié)果表明，用濃度70％乙醇提取時蘆丁和槲皮素得率最高。7.2檢測波長的選擇取蘆丁和槲皮素對照品混合溶液進樣，使用PAD檢測器進行三維掃描，提取190～600nm波長范圍內(nèi)2組分的紫外光譜，流動相中蘆丁最大吸收波長分別為204.5nm、256.3nm和357.4nm，槲皮素最大吸收波長分別為203.4nm、255.2nm和367.9nm。提取各波長下色譜進行比較，選擇356nm作為檢測波長基線平穩(wěn)，干擾小，峰形好。（四）參考文獻國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).北京,化學工業(yè)出版社,2005.凌關(guān)庭.保健食品原料手冊(第二版).化學工業(yè)出版社,2006尉芹，馬希漢等．杜仲化學成分研究．西北林學院學報，1995，10(4)：88～93杜紅巖.杜仲活性成分與藥理研究的新進展.經(jīng)濟林研究2003，21(2)：58—61成軍,白焱晶,趙玉英等.杜仲葉苯丙素類成分的研究[J].中國中藥雜志,2002,27(1)：38管淑玉蘇薇薇.杜仲化學成分與藥理研究進展.中藥材，2003，26（2）：124～129李家實．閻玉凝．杜仲皮與葉化學成分初步研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試驗都已證明羅布麻的飲用安全性。虞穎映、王海明[12]用小鼠對市售羅布麻茶的飲用安全進行了食品安全性毒理學評價。小鼠經(jīng)口急性毒性實驗、遺傳毒性實驗、傳統(tǒng)致畸實驗。結(jié)果表明羅布麻茶提取物對雌雄大、小白鼠的急性經(jīng)口LD50均大于10.0g/kg；微核試驗、精子畸形試驗和致畸試驗結(jié)果表明羅布麻茶無致突變、致畸作用；30（二）功效成分的檢測方法1.羅布麻中槲皮素、異槲皮苷和金絲桃苷的檢測方法羅布麻提取物中降血壓活性成分有異槲皮苷、金絲桃苷、蘆丁和槲皮素幾類黃酮類物質(zhì)，檢測的目標物不同，因此前處理也有所不同。一是測定提取物中總黃酮（以蘆丁為對照品）的含量來衡量樣品中是否含有降壓活性成分，常采用分光光度法比色法；二是隨著分析檢測技術(shù)的進步，利用現(xiàn)代色譜分離技術(shù)，將提取物中異槲皮苷、金絲桃苷、槲皮素、蘆丁進行色譜分離后，紫外或PDA檢測；三是采用將提取物中異槲皮苷、金絲桃苷等黃酮類物質(zhì)水解為槲皮素后，再測定水解產(chǎn)物中的槲皮素。常有檢測方法有分光光度法、紙層析法、薄層層析法、反相高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、毛細管區(qū)帶電泳-電化學檢測法、液質(zhì)聯(lián)用儀等。范維剛等[13]以蘆丁為對照品，NaNO2-AlCl3-NaOH體系為顯色劑分光光度法測定羅布麻葉內(nèi)的黃酮類物質(zhì)。建立了蘆丁濃度-吸光度關(guān)系的回歸方程為A=0.145+7.9464C,r=0.9993.平均回收率為97.67%,相對標準偏差為0.52%。劉東平等[14]以金絲桃苷作為對照品采用三種不同的顯色劑建立的測定方法測定羅布麻葉中總黃酮含量。結(jié)果以金絲桃苷為對照品紫外分光光度法測定的結(jié)果最高(4.21%),以金絲桃苷為對照品三氯化鋁顯色法測定的結(jié)果次之(3.81%),而以金絲桃苷作為對照品亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉絡(luò)合比色法測定的結(jié)果最低(3.31%)。因此，他覺得以金絲桃苷為對照品，在酸性(加入醋酸一醋酸鈉緩沖液)條件下加入三氯化鋁顯色法后的測定方法為羅布麻葉總黃酮含量測定的適用方法。第一種直接紫外檢測的方法，雜質(zhì)干擾太大，結(jié)果偏高，方法不可取。該文獻認為總黃酮測定的經(jīng)典主法以蘆丁為對照品比色測定，但新疆的羅布麻中蘆丁含量很低，因此他推薦用羅布麻中含量較高的金絲桃苷來作對照品。范維剛，解成喜等[15]以蘆丁為對照品，NaNO2-A1C13-NaOH體系為顯色劑分光光度法測定羅布麻葉內(nèi)的黃酮類物質(zhì)。相關(guān)系數(shù)0.9993,平均回收率為97.67%．相對標準偏差為0.52%。黃湘蘭、曾凡[16]采用薄層層析法測定羅布麻葉水浸膏中總黃酮和槲皮，也取得了比較滿意的結(jié)果。劉景國，劉文亮等[17]也采用薄層色譜法測鑒別羅布麻的活性成分。范維剛[18]以采用反相高效液相色譜法測定了羅布麻葉中槲皮素和山萘酚。色譜柱為Nova-pakC18(150mm×4.6mmi.d.)，流動相為甲醇+1％乙酸梯度洗脫，流速為0.6mL/min，檢測波長為360nm。槲皮素在0.0137～0.136μg、山萘酚在0.0053～0.0265μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9998和0.9980。槲皮素的回收率為99.6％，RSD為0.97％；山萘酚的回收率為98.2％，RSD為2.0％。韓利文等[19]建立羅布麻葉中有效成分金絲桃苷的HPLC含量測定方法,并且對不同種屬和產(chǎn)地的羅布麻葉進行比較。采用Shim-PackVP-ODS色譜柱，乙腈-四氫呋喃-0.1%醋酸(15.5∶5.5∶79)為流動相，流速10mL/min，檢測波長為360nm，柱溫為30℃，進樣量20μL，結(jié)果金絲桃苷線性范圍0.01～0.2mg/mL(γ=0.9999)。郁韻秋等[4]采用HPLC法同時測定羅布麻浸膏粉中金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的含量。樣品以甲醇溶解后，過濾進色譜分析。色譜柱為YMC-PackC18(250mm×4.6mm)，流動相為乙腈-甲醇(10：1)和0.生物酶解的技術(shù)也應(yīng)用到羅布麻活性成分提取和檢測中，所得到的產(chǎn)物和產(chǎn)物量也比經(jīng)典方法水解技術(shù)多。張語遲等[20]采用酶解的技術(shù)對樣品進行前處理后，用高效液相色譜法和電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)并結(jié)合核磁共振和紫外光譜技術(shù)對復(fù)合酶提取的羅布麻葉成分進行了分析，結(jié)果表明復(fù)合酶可顯著提高羅布麻葉的提取效率，提取物中白麻苷、蘆丁、金絲桃苷、廣寄生苷、乙?；愰纹に亍⒁阴；鸾z桃苷、山奈酚-3-0-葡萄糖苷、山奈酚-3-0-半乳糖苷、槲皮素、山奈酚和貫葉金絲桃素含量明顯增多，并得到了常規(guī)提取方法中不能得到的槲皮素-3-0-β-D-葡萄糖醛酸、廣寄生甘等化合物。同時張語遲也用電噴霧液質(zhì)聯(lián)用儀測定了羅布紅麻和羅布白麻的16種主要成分[21]。（三）檢測方法實例方法一保健食品中羅布麻總黃酮含量的測定（分光光度比色法）[22]（方法來源《保健食品檢驗與技術(shù)規(guī)范》2003版）1試劑1.1聚酰胺粉1.2蘆丁標準溶液；稱取5.0㎎蘆丁，加甲醇溶解并定容至100ml，即得50ug/ml。1.3乙醇：分析純。1.4甲醇：分析純。2分析步驟2.1試樣處理：稱取一定量的試樣，加乙醇定容至25ml，搖勻后，超聲提取20分鐘，放置，吸取上清液1.0ml，于蒸發(fā)皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴中揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。先用20ml苯洗，苯液棄去，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至25ml。此液于波長360nm測定吸收值。同時以蘆丁為標準品，測定表標準曲線，求回歸方程，計算試樣中總黃酮的含量。2.2蘆丁標準曲線：吸取蘆丁標準溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于10ml比色管中，加甲醇至刻度，搖勻，于波長360nm比色。求回歸方程，計算試樣中總黃酮的含量。3計算和結(jié)果表示 X= 式中： X試樣中總黃酮的含量，㎎/100gA由標準曲線算得被測液中黃酮量，ug;M試樣質(zhì)量，g；V1測定用試樣體積，ml；V2試樣定容總體積，ml。計算結(jié)果保留二位有效數(shù)字。方法二羅布麻提取物中金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的含量測定[4]1、方法提要采用HPLC法同時測定含羅布麻提取物中金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的含量。樣品以甲醇溶解后，過濾進色譜分析。色譜柱為ODS-C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈-甲醇(10：1)和0．4％磷酸，梯度洗脫；二極管陣列檢測器：檢測波長360nm；分別以金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素對照品為外標，用標準曲線法進行定量．2、試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。2.1乙腈：色譜純。2.2甲醇：色譜純。2.3磷酸。2.4金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素標準品。2.4.1標準品儲備液分別準確稱取2.4對照品適量,用甲醇超聲溶解后定容于10mL的容量瓶,并稀釋至刻度，制得的金絲桃苷、異槲皮苷和槲皮素儲備液分別約為1.00mg／mL。2.4.2標準品溶液應(yīng)用液分別準確吸取對照品儲備溶液0.1mL置于10mL的容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度，以此類推，逐級稀釋，臨用現(xiàn)配。3、儀器及條件3.1回流裝置。3.2水浴鍋。3.3高效液相色譜儀：帶紫外檢測器或二級管陣列檢測器。3.4色譜條件色譜柱：ODS-C18，(250mm×4.6mm,5μm)，柱溫：35℃，流動相：A-0.4％磷酸，B-乙腈/甲醇(10:1)，流速1mL/min，梯度洗脫：0～15min，B由16％線性改變到23％；15-28min，B由23％線性改變到35.4％；至28min停止洗脫，回到初始比例平衡7min后進行下一個樣品分析，檢測波長為360nm。4、測定步驟4.1樣品處理精密稱取樣品0.2000g或相當，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解后超聲30min處理，再定容到100mL．過0.45μm的濾膜后供HPLC分析。4.2標準曲線分別準確吸取標準應(yīng)用液（2.4.2）配成約為0.2μg/mL～5.0μg/mL的標準系列，按3.4色譜條件進行分析，外標法定量。4.3標準品和樣品進樣量均為20μL，測定峰面積，用外標法計算含量。5、方法學指標5.1線性范圍分別制作3種物質(zhì)的線性范圍，在0.2μg/mL～5.0μg/mL范圍內(nèi)均成線性關(guān)系，以對照品的峰面積對相應(yīng)的濃度進行線性回歸，得回歸方程分別是：金絲桃苷Y=26.48x－1.16(γ=0.9994)，異槲皮苷Y=22.48x－0.48(γ=0.9995)，槲皮素Y=28.31x－0.68(γ=0.9996)。5.2回收率與精密度同一樣品溶液中，分別加入0.5ng三種對照品后混勻，平行6份，按照已建立的色譜條件測定，計算回收率。金絲桃苷的平均回收率90.94%(RSD=4.45%)、異槲皮苷的平均回收率99.96%(RSD=3.21%)、槲皮素的平均回收率85.57%(RSD=0.88%)。6、譜圖圖LBMY02標準溶液(a)和羅布麻樣品提取液(b)的色譜圖（1．金絲桃苷，2．異槲皮苷，3．槲皮素）7、方法討論7.1波長的選擇在200-400nm范圍內(nèi)對金絲桃苷、異槲皮苷和槲皮素進行紫外吸收掃描，金絲桃苷最大吸波長分別是254和356nm，異槲皮苷最大吸波長是254和346nn3，槲皮素最大吸波長是254和368nm，兼顧3種物質(zhì)的最大吸收，選擇360nm為檢測波長．圖LBMY03金絲桃苷(a)，異槲皮苷(b)和槲皮素(C)的紫外吸收掃描圖7.2流動相選擇在相同的梯度洗脫程序下考察了3種不同的流動相體系，分別是①A－乙腈／甲醇(10：1)，B－0.4%磷酸，②A－乙腈／甲醇(10:1)，B－0.2％三氟乙酸，③A－乙腈，B－水．結(jié)果顯示，其分離度分別達到1.64，1.62和1.58，均能達到基線分離．考慮到①的分離度最好，所以本文最終選擇其作為流動相條件。（四）參考文獻國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).北京,化學工業(yè)出版社,2005.凌關(guān)庭.保健食品原料手冊(第二版).化學工業(yè)出版社,2006嚴秀珍．白麻和紅麻化學成分的測定．中成藥研究，1987(12)：27—29郁韻秋等.高效液相色譜法同時測定羅布麻浸膏粉中金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的含量.復(fù)旦學報（自然科學版），2007，46（3）：418～422周裔彬，張偉等.羅布麻葉的研究進展.安徽農(nóng)業(yè)大學學報，2008，35(4)：619—622CharlesJSih,etal.SeparationandsynthesisofpinoresinoldiglucosidemoidesoliveJAmChemSoc1976,98(17):5412虞穎映，邵健忠，王海明.羅布麻茶對心血管系統(tǒng)的生物學效應(yīng)研究.同濟大學學報(醫(yī)學版),2006,27(4):40～44何念善.羅布麻復(fù)合茶治療原發(fā)性高血壓病56例臨床觀察[J].四川中醫(yī),2004,22(7)KagawaT，NakazawaY，eta1．StudiesonAntihy-pertensiveeffectofluobuma(ApocynumvenetumL．)leafExtract(2)．NaturalMedicines，2004，58(6)：299～302吳向起，楊新波，楊解人等.羅布麻提取物藥理活性的研究進展.解放軍藥學學報，2009,25（5）:435～439KimD，YokozawaT，HattoriM，KadotaS，NambaT.Effectsofaqueousextractsofapocynumvenetumleavesonspontaneouslyhypertensive，renalhypertensiveandNaC1-fed-hypertensiverats．JEthnopharmacol，2000，72：53-59虞穎映,王海明.羅布麻茶的飲用安全性評價.同濟大學學報(醫(yī)學版),2006,27(5):24～26范維剛,解成喜,李鋒等.羅布麻葉中總黃酮含量的測定[J].光譜實驗室,2005,22(3)劉東平,周亞球,王先榮.羅布麻葉總黃酮的測定方法探討[J].時珍國醫(yī)國藥,2007,18(3)范維剛，解成喜等.羅布麻葉中總黃酮含量的測定.光譜實驗室,2005,22(3):465～467黃湘蘭，曾凡.羅布麻葉化學成分測定.時珍國醫(yī)國藥,1998,9(6):539～540劉景國，劉文亮等.羅布麻降壓片的薄層色譜鑒別.黑龍江醫(yī)藥,2008,21(1):28～29范維剛.反相高效液相色譜法測定羅布麻葉中槲皮素和山萘酚.分析試驗室,2008,27(8):52～54韓利文,侯晉軍,李云蘭等.高效液相色譜法比較不同種屬和產(chǎn)地羅布麻葉中金絲桃苷的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學,2006,23(5)張語遲,劉春明.復(fù)合酶提取羅布麻葉的高效液相色譜—電噴霧質(zhì)譜研究[A].第二屆中草藥提取關(guān)鍵技術(shù)與提取物產(chǎn)業(yè)應(yīng)用研討會論文集[C].2009.張語遲,劉春明.羅布白麻與羅布紅麻的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析[J].分析測試學報,2009,28(10)衛(wèi)生部.保健食品檢驗與技術(shù)規(guī)范(2003版).中華人民共和國衛(wèi)生部，北京，2003（四川檢驗檢疫局胡江濤）決明子決明子，英文名：SemenCassiae

，為豆科植物決明（CassiaobtusifoliaL.）和小決明（CassiatoraL.）的干燥成熟種子。秋季采收成熟果實，曬干后入藥。決明略呈菱方形或短圓柱形，兩端平行傾斜，長3～7mm，寬2～4mm，表面綠棕色或暗棕色，平滑有光澤；小決明呈短圓柱形，較小，長3～5mm，寬2～3mm，表面棱線兩側(cè)各有一寬廣的淺黃棕色帶。本品粉末為黃棕色，氣微，味微苦。決明主產(chǎn)于江蘇、安徽、四川等地；小決明主產(chǎn)于廣西、廣東、云南等地，以野生或半野生為主，產(chǎn)量較小。中國衛(wèi)生部2002年錄入為可食用又可藥用的兩用原料[1][2]。決明子，別名草決明，馬蹄決明。味甘、苦、咸、微寒。主要功效：清熱明目，潤腸通便[1]。主要功效成分有蒽醌、吡酮類、多糖、氨基酸和微量元素等。其藥理作用：降血壓作用、降血脂作用、增強免疫功能、對cAMP磷酸二酯酶具有抑制作用、瀉下作用、抗菌作用等[3]。（一）主要功效成分介紹大、小決明子的種子中均含有蒽醌類化合物、吡咯酮類化合物、脂肪酸類、氨基酸和無機元素。其主要功效成分為蒽醌類化合物成分，含量約占1.1％～1.2%。游離蒽醌含量約為0.03％，結(jié)合蒽醌含量約為1.23％[4]。蒽醌苷元中主要含有大黃酚(0．28％)，生決明中含量較炒決明高[5]。目前，大多數(shù)學者認為，蒽醌糖苷是決明子發(fā)揮作用的主要成分。1．組成、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的快速發(fā)展，特別是紅外光譜、核磁共振和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的出現(xiàn)并應(yīng)用到未知物結(jié)構(gòu)的解析，決明子中蒽醌類化學成分及其分子結(jié)構(gòu)也被一一探明。目前，已知的決明子蒽醌類化合物主要有28種[6][7][8][9][10]，分別為大黃素(Emodin)、大黃酚(Chrysophand)、大黃酸(Rhein)、大黃素甲醚(Physeion)、蘆薈大黃素(Ale-emodin)、去氧大黃酚(Chrysarobin)、大黃酚-9-蒽酮(Chrysophanicacid-9-anthrone)、鈍葉素(Obtusifolin)、鈍葉決明素(Obtusin)、甲基鈍葉決明素(Chryso-obtusin)、橙鈍葉決明素(Aurantio-obtusin)、奎司丁(Questin)、葡萄糖鈍葉素(Gluco-obtusin)、葡萄糖鈍葉決明素(Gluco-obtusin)、葡萄糖橙鈍葉決明素(Gluco-aurantio-obttrsin)、1-去甲基橙鈍葉決明(1-desmethvlaurantio-obtusin)、1-去甲基鈍葉決明素(1-desmethvlobtusin)、1-去甲甲基鈍葉決明素(1-desmethylehryso-obtusin)、大黃酚-10-10’-二蒽酮(Chrysophanol-10-10’bianthrone)、灰綠曲霉多羥基蒽酮8-O-D萄糖-吡喃糖甙(Eehinulpolydrieanthrone-8-O-D-glucopyrmloside)、有翅決明素1-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(Alaternin-1-O-β-D-glucpyranoside)、大黃素-6-葡糖甙(Emodin-6-gluoside)、大黃素蒽酮(Emodinanthrone)、甲基鈍葉決明素-2-O-β-D-吡哺葡糖甙(Chryso-obtusin-2-O-β-D-glucopyranoside)、大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(Chyscion-8-O-β-D-glueopyranoside)、1,3-二羥基-6-甲氧基-7-甲基蒽醌(1,3-dihydmxy-6-methoxy-7-methylanthraquinone)、1-羥基-3,7-二甲醛基蒽醌(1-hydroxy-3,7-diformylanthraquinone)、大黃酚-1-β-龍膽二糖甙(Chrysopahol-1-β-geniohioside)。蒽醌是三環(huán)類有機化合物，分子結(jié)果式見圖JMZ01，是蒽醌類衍生物的母體；蒽醌類化合物的結(jié)構(gòu)式如圖JMZ02。圖JMZ01蒽醌分子結(jié)構(gòu)式圖JMZ01蒽醌類化合物分子結(jié)構(gòu)蒽醌 蒽酚 蒽酮圖JMZ03蒽醌、蒽酚與蒽酮轉(zhuǎn)化示意圖蒽醌類化合物包括蒽醌衍生物、蒽酚衍生物、蒽酮類衍生物。在一定條件下，這三類物質(zhì)是可以相互轉(zhuǎn)化的，蒽醌在酸性環(huán)境中被還原，可生成蒽酚及其互變異構(gòu)體—蒽酮。植物體內(nèi)的蒽醌類化合物可呈游離形式或糖苷形式。蒽醌苷中的糖多為葡萄糖，部分為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖等。蒽酚（或蒽酮）的羥基衍生物常以游離狀態(tài)或結(jié)合狀態(tài)與相應(yīng)的羥基蒽醌共存于植物中。蒽酚（或蒽酮）衍生物一般存在于新鮮植物中。新鮮決明子經(jīng)兩年以上貯存則檢測不到蒽酚。如果蒽酚衍生物的中位羥基與糖縮合成苷，則性質(zhì)比較穩(wěn)定，只有經(jīng)過水解除去糖才能易于被氧化轉(zhuǎn)變成蒽醌衍生物。2．生物學功能現(xiàn)代藥理研究表明，決明子具有降血脂、降血壓、抑菌、明目、增強免疫、利尿、抗氧化、抗衰老、抑制血小板凝集、緩瀉和潤腸通便功能等活性，其中主要成分－蒽醌類化合物，對高血壓、高血脂等心血管疾病均有較好療效，但長期服用對人體有害。決明子提取物對動物均有一定的降壓作用，乙醇提取物對試驗用自發(fā)遺傳性高血壓大鼠血壓有明顯降低作用，給藥后收縮壓、舒張壓明顯降低(P<0.01)，而且對呼吸、心率無影響。其脂溶性部分在10mg/kg時呈明顯降壓作用(p<0.05)作用的幅度和時間均比利血平更為顯著[11]。周然等[12]對17例高血壓病患者服用決明子茶(用開水浸泡決明子當茶飲)，2-3袋/d，45d為1療程。結(jié)果發(fā)現(xiàn)收縮壓和舒張壓有明顯的降低，根據(jù)對高血壓治療的療效標準判斷，顯效6例，有效6例，無效5例。崔斌等人[13]對決明子茶劑治療原發(fā)性高血壓26例臨床觀察，降壓效果明顯。3．安全性（毒理）決明子提取物經(jīng)小鼠LD50為36.35±2.38g/kg(為水煎劑小鼠腹注)。乙醇提取液小鼠90d亞慢性毒性試驗的最小毒副作用劑量為5.0g/kg，折合人體為3g/d。毒理學試驗表明本品不宜長期服用[2]。周宇紅等[14],高芃等[15]用決明子乙醇提取物對健康Wistar大鼠喂飼13周，解剖觀察臟器變化，喂飼決明子各組均出現(xiàn)腎臟腫大，色澤灰黑，腸系膜淋巴結(jié)腫大，呈灰白橢圓形結(jié)節(jié)狀突起，結(jié)腸腫脹，漿膜充血，腎小管上皮細胞內(nèi)可見棕褐色顆粒樣物質(zhì)沉積，黑色素染色陽性，動物睪丸曲細精管萎縮，無生精細胞等變化，而對照組無上述病理改變。認為決明子長期服用，可引起腎、結(jié)腸、直腸、腸系膜淋巴結(jié)、睪丸等靶器官病理改變，提示決明子不宜長期大量服用。（二）功效成分的檢測