第二節(jié)質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法課件

29十二月20221第二節(jié)質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法29十二月20221第二節(jié)質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法鑒別實(shí)驗(yàn)雜質(zhì)反省平安性反省含量〔效價(jià)〕測(cè)定鑒別實(shí)驗(yàn)一、鑒別實(shí)驗(yàn)鑒別：應(yīng)用化學(xué)法、物理法及生物學(xué)方法來(lái)確證生化藥物和基因工程藥物的真?zhèn)?。通常需求用?guī)范品或?qū)φ掌吩谕粭l件下停止對(duì)照實(shí)驗(yàn)加以確證。理化鑒別法生化鑒別法生物鑒別法一、鑒別實(shí)驗(yàn)鑒別：應(yīng)用化學(xué)法、物理法及生物〔一〕理化鑒別法1、化學(xué)鑒別法呈色法e.g.溶菌酶分子中的四個(gè)肽鍵上的氮原子能與Cu2+絡(luò)合，生成有顏色的配位化合物，肽鍵越多，顏色越深。沉淀法e.g.胃蛋白酶受酸、堿、重金屬或無(wú)機(jī)溶劑的作用，蛋白質(zhì)肽鏈的空間結(jié)構(gòu)被破壞，惹起變性而發(fā)生不溶性沉淀。鞣酸、沒(méi)食子酸或多種重金屬鹽溶液〔Ch.P2000)

〔一〕理化鑒別法1、化學(xué)鑒別法2、紫外分光光度法應(yīng)用藥物中的共軛系統(tǒng)在紫外區(qū)有特征吸收用于鑒別。3、高效液相色譜法應(yīng)用對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖的保管時(shí)間和肽圖譜的分歧性停止鑒別。

2、紫外分光光度法〔二〕、生化鑒別法1.酶法e.g.尿激酶能激活牛纖維蛋白溶酶原，而具有相反作用的鏈激酶不能激活牛纖維蛋白溶酶原而加以區(qū)別，并用直接觀察溶解纖維蛋白作用的氣泡上升法作為判別目的?！捕场⑸b別法1.酶法2.電泳法電泳：在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子或離子在電場(chǎng)的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移的現(xiàn)象。e.g.肝素——糖凝膠電泳法3.樣品脫鹽后用等電點(diǎn)聚焦法測(cè)定關(guān)于同一個(gè)產(chǎn)品來(lái)說(shuō)不論有幾個(gè)等電點(diǎn)，但批與批之間必需分歧，可說(shuō)明其工藝動(dòng)搖2.電泳法〔三〕、生物鑒別法應(yīng)用生物體停止實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒別藥物。e.g.胰島素——家兔驚厥實(shí)驗(yàn)

〔三〕、生物鑒別法應(yīng)用生物體停止實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒別藥物。二、雜質(zhì)反省〔一〕普通雜質(zhì)反省包括氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液的廓清度或溶液的顏色、水分及枯燥失重、熾灼殘?jiān)?。二、雜質(zhì)反省〔一〕普通雜質(zhì)反省〔二〕特殊雜質(zhì)反省特殊雜質(zhì)主要是指從消費(fèi)工藝中引入或原料中帶入的雜質(zhì)。許多生化藥物是從生物組織中提取或用微生物發(fā)酵法制得，藥物中易殘存一些雜質(zhì)或其他成分。1.原料藥的純度剖析2.消費(fèi)進(jìn)程中雜質(zhì)的反省基因工程藥物的質(zhì)量控制要比用傳統(tǒng)工藝消費(fèi)的生物藥物有更高的要求?！捕程厥怆s質(zhì)反省基因工程藥物的質(zhì)量控制要比用傳統(tǒng)工藝消費(fèi)的三、平安性反省〔一〕熱原反省法和細(xì)菌內(nèi)毒素反省法〔二〕異常毒性實(shí)驗(yàn)〔三〕過(guò)敏實(shí)驗(yàn)〔四〕降壓物質(zhì)實(shí)驗(yàn)〔五〕無(wú)菌實(shí)驗(yàn)〔六〕基因工程藥物中能夠雜質(zhì)與污染物反省〔七〕致突變實(shí)驗(yàn)〔八〕生殖毒性實(shí)驗(yàn)三、平安性反省〔一〕熱原反省法和細(xì)菌內(nèi)毒素反省法熱原反省法〔家兔法〕本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，以其體溫降低的水平，判定該供試品中所含熱原能否契合規(guī)則，是一種限制實(shí)驗(yàn)法。細(xì)菌內(nèi)毒素反省法——應(yīng)用鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素的凝聚反響。熱原反省法〔家兔法〕本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔異常毒性實(shí)驗(yàn)是用一定劑量的藥物按指定的操作方法和給藥途徑給予規(guī)則體重的某種實(shí)驗(yàn)植物，觀察其急性毒性反響。反響的判別以實(shí)驗(yàn)植物死亡與否為終點(diǎn)。中國(guó)藥典〔1995年版〕中規(guī)則了50多種藥物需做異常毒性反省。

異常毒性實(shí)驗(yàn)是用一定劑量的藥物按指定的操植物：小鼠給藥途徑：尾靜脈注射法，皮下注射法，腹腔注射法，口服給藥結(jié)果判別：除另有規(guī)則外，全部5只小鼠在給藥后48小時(shí)內(nèi)不得有死亡；如有死亡時(shí)，應(yīng)另取體重18~19g的小鼠10復(fù)試，全部小鼠在48小時(shí)內(nèi)不得有死亡?！睠hP2000附錄ⅪC〕植物：小鼠過(guò)敏實(shí)驗(yàn)是反省異性蛋白的實(shí)驗(yàn)。藥物中假定夾雜有異性蛋白，在臨床運(yùn)用時(shí)易惹起病人多種過(guò)敏反響，輕者皮膚出現(xiàn)紅斑或丘疹，嚴(yán)重者可出現(xiàn)窒息、發(fā)結(jié)、血管神經(jīng)性水腫、血壓下降，甚至休克和死亡。因此，有能夠存在異性蛋白的藥物、應(yīng)作過(guò)敏實(shí)驗(yàn)。植物：豚鼠過(guò)敏實(shí)驗(yàn)是反省異性蛋白的實(shí)驗(yàn)。藥物中降壓物質(zhì)：指某些藥物中含有的能招致血壓降低的雜質(zhì)，包括組胺、類(lèi)組胺或其他招致血壓降低的物質(zhì)。危害：面部潮紅，脈搏減速，血壓下降來(lái)源：在用植物臟器或組織為原料制備生化藥物的進(jìn)程中，正常組織內(nèi)存在的組胺及局部氨基酸脫羧構(gòu)成的組胺、酪胺等胺類(lèi)物質(zhì)。方法：比擬對(duì)照品和供試品惹起麻醉貓〔或狗〕血壓下降的水平，以判別供試品中所含降壓物質(zhì)的限制能否契合規(guī)則。ChP2000降壓物質(zhì)：指某些藥物中含有的能招致血壓降低的雜質(zhì)，包括組胺、無(wú)菌反省法是反省藥品及敷料能否染有活菌的一種方法，是藥典中較重要的反省項(xiàng)目之一。由于許多生化藥物是在無(wú)菌條件下制備的，且不能高溫滅菌。因此，無(wú)菌反省就更有必要。中國(guó)藥典中簡(jiǎn)直一切的注射用藥均做無(wú)菌反省。參照?中國(guó)生物制品規(guī)程?無(wú)菌反省法是反省藥品及敷料能否染有活菌的一種方法，是藥典中較基因工程藥物中能夠的雜質(zhì)：殘留DNA、宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)、內(nèi)毒素、蛋白質(zhì)突變體和蛋白質(zhì)裂解物等。主要反省項(xiàng)目：外源性DNA、宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)、其他有關(guān)雜質(zhì)和細(xì)菌內(nèi)毒素?；蚬こ趟幬镏心軌虻碾s質(zhì)：致突變實(shí)驗(yàn)包括：微生物回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)——檢測(cè)基因突變

哺乳植物培育細(xì)胞染色體畸變實(shí)驗(yàn)——檢測(cè)能否影響DNA結(jié)構(gòu)或改動(dòng)信息

嚙齒植物微核實(shí)驗(yàn)——染色體畸變實(shí)驗(yàn)的補(bǔ)充

微生物電極法的致突變實(shí)驗(yàn)鼠傷寒沙門(mén)菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞〔CHL)NIH小鼠致突變實(shí)驗(yàn)包括：鼠傷寒沙門(mén)菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)中國(guó)倉(cāng)鼠肺生殖毒性實(shí)驗(yàn)包括：普通生殖毒性實(shí)驗(yàn)——反映對(duì)生殖進(jìn)程第一階段的影響〔妊娠前和妊娠初期〕致畸敏感期毒性實(shí)驗(yàn)——生殖進(jìn)程第二階段的影響圍生期毒性實(shí)驗(yàn)——生殖進(jìn)程第三階段〔分娩前后和泌乳期〕生殖毒性實(shí)驗(yàn)包括：四、含量〔效價(jià)〕測(cè)定含量表示方法百分含量 結(jié)構(gòu)明白的小分子藥物或經(jīng)水解后變成小分子的藥物生物效價(jià)或酶生機(jī)單位酶類(lèi)和蛋白質(zhì)等藥物四、含量〔效價(jià)〕測(cè)定含量表示方法百分含量 結(jié)構(gòu)明白的小分子藥含量測(cè)定1.HPLC法運(yùn)用適當(dāng)?shù)钠饰鲋鶞y(cè)定產(chǎn)品的總體純度。達(dá)95％以上。2.十二烷基硫酸鈉－聚丙烯酰胺凝膠電泳法〔SDS法〕產(chǎn)品假定存在聚合體，在非恢復(fù)狀況下用掃描計(jì)算聚合體的含量，普通控制在10％以下，單體加聚合體應(yīng)不少于95％。

22含量測(cè)定22效價(jià)測(cè)定效價(jià)測(cè)定均采用國(guó)際或國(guó)度參考品，或經(jīng)過(guò)國(guó)度檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可的參考品，以體內(nèi)或體外法〔細(xì)胞法〕測(cè)定其生物學(xué)活性，并標(biāo)明其活性單位。效價(jià)測(cè)定29十二月202224第二節(jié)質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法29十二月20221第二節(jié)質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法鑒別實(shí)驗(yàn)雜質(zhì)反省平安性反省含量〔效價(jià)〕測(cè)定鑒別實(shí)驗(yàn)一、鑒別實(shí)驗(yàn)鑒別：應(yīng)用化學(xué)法、物理法及生物學(xué)方法來(lái)確證生化藥物和基因工程藥物的真?zhèn)?。通常需求用?guī)范品或?qū)φ掌吩谕粭l件下停止對(duì)照實(shí)驗(yàn)加以確證。理化鑒別法生化鑒別法生物鑒別法一、鑒別實(shí)驗(yàn)鑒別：應(yīng)用化學(xué)法、物理法及生物〔一〕理化鑒別法1、化學(xué)鑒別法呈色法e.g.溶菌酶分子中的四個(gè)肽鍵上的氮原子能與Cu2+絡(luò)合，生成有顏色的配位化合物，肽鍵越多，顏色越深。沉淀法e.g.胃蛋白酶受酸、堿、重金屬或無(wú)機(jī)溶劑的作用，蛋白質(zhì)肽鏈的空間結(jié)構(gòu)被破壞，惹起變性而發(fā)生不溶性沉淀。鞣酸、沒(méi)食子酸或多種重金屬鹽溶液〔Ch.P2000)

〔一〕理化鑒別法1、化學(xué)鑒別法2、紫外分光光度法應(yīng)用藥物中的共軛系統(tǒng)在紫外區(qū)有特征吸收用于鑒別。3、高效液相色譜法應(yīng)用對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖的保管時(shí)間和肽圖譜的分歧性停止鑒別。

2、紫外分光光度法〔二〕、生化鑒別法1.酶法e.g.尿激酶能激活牛纖維蛋白溶酶原，而具有相反作用的鏈激酶不能激活牛纖維蛋白溶酶原而加以區(qū)別，并用直接觀察溶解纖維蛋白作用的氣泡上升法作為判別目的?！捕?、生化鑒別法1.酶法2.電泳法電泳：在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子或離子在電場(chǎng)的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移的現(xiàn)象。e.g.肝素——糖凝膠電泳法3.樣品脫鹽后用等電點(diǎn)聚焦法測(cè)定關(guān)于同一個(gè)產(chǎn)品來(lái)說(shuō)不論有幾個(gè)等電點(diǎn)，但批與批之間必需分歧，可說(shuō)明其工藝動(dòng)搖2.電泳法〔三〕、生物鑒別法應(yīng)用生物體停止實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒別藥物。e.g.胰島素——家兔驚厥實(shí)驗(yàn)

〔三〕、生物鑒別法應(yīng)用生物體停止實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒別藥物。二、雜質(zhì)反省〔一〕普通雜質(zhì)反省包括氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液的廓清度或溶液的顏色、水分及枯燥失重、熾灼殘?jiān)?。二、雜質(zhì)反省〔一〕普通雜質(zhì)反省〔二〕特殊雜質(zhì)反省特殊雜質(zhì)主要是指從消費(fèi)工藝中引入或原料中帶入的雜質(zhì)。許多生化藥物是從生物組織中提取或用微生物發(fā)酵法制得，藥物中易殘存一些雜質(zhì)或其他成分。1.原料藥的純度剖析2.消費(fèi)進(jìn)程中雜質(zhì)的反省基因工程藥物的質(zhì)量控制要比用傳統(tǒng)工藝消費(fèi)的生物藥物有更高的要求。〔二〕特殊雜質(zhì)反省基因工程藥物的質(zhì)量控制要比用傳統(tǒng)工藝消費(fèi)的三、平安性反省〔一〕熱原反省法和細(xì)菌內(nèi)毒素反省法〔二〕異常毒性實(shí)驗(yàn)〔三〕過(guò)敏實(shí)驗(yàn)〔四〕降壓物質(zhì)實(shí)驗(yàn)〔五〕無(wú)菌實(shí)驗(yàn)〔六〕基因工程藥物中能夠雜質(zhì)與污染物反省〔七〕致突變實(shí)驗(yàn)〔八〕生殖毒性實(shí)驗(yàn)三、平安性反省〔一〕熱原反省法和細(xì)菌內(nèi)毒素反省法熱原反省法〔家兔法〕本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，以其體溫降低的水平，判定該供試品中所含熱原能否契合規(guī)則，是一種限制實(shí)驗(yàn)法。細(xì)菌內(nèi)毒素反省法——應(yīng)用鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素的凝聚反響。熱原反省法〔家兔法〕本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔異常毒性實(shí)驗(yàn)是用一定劑量的藥物按指定的操作方法和給藥途徑給予規(guī)則體重的某種實(shí)驗(yàn)植物，觀察其急性毒性反響。反響的判別以實(shí)驗(yàn)植物死亡與否為終點(diǎn)。中國(guó)藥典〔1995年版〕中規(guī)則了50多種藥物需做異常毒性反省。

異常毒性實(shí)驗(yàn)是用一定劑量的藥物按指定的操植物：小鼠給藥途徑：尾靜脈注射法，皮下注射法，腹腔注射法，口服給藥結(jié)果判別：除另有規(guī)則外，全部5只小鼠在給藥后48小時(shí)內(nèi)不得有死亡；如有死亡時(shí)，應(yīng)另取體重18~19g的小鼠10復(fù)試，全部小鼠在48小時(shí)內(nèi)不得有死亡。〔ChP2000附錄ⅪC〕植物：小鼠過(guò)敏實(shí)驗(yàn)是反省異性蛋白的實(shí)驗(yàn)。藥物中假定夾雜有異性蛋白，在臨床運(yùn)用時(shí)易惹起病人多種過(guò)敏反響，輕者皮膚出現(xiàn)紅斑或丘疹，嚴(yán)重者可出現(xiàn)窒息、發(fā)結(jié)、血管神經(jīng)性水腫、血壓下降，甚至休克和死亡。因此，有能夠存在異性蛋白的藥物、應(yīng)作過(guò)敏實(shí)驗(yàn)。植物：豚鼠過(guò)敏實(shí)驗(yàn)是反省異性蛋白的實(shí)驗(yàn)。藥物中降壓物質(zhì)：指某些藥物中含有的能招致血壓降低的雜質(zhì)，包括組胺、類(lèi)組胺或其他招致血壓降低的物質(zhì)。危害：面部潮紅，脈搏減速，血壓下降來(lái)源：在用植物臟器或組織為原料制備生化藥物的進(jìn)程中，正常組織內(nèi)存在的組胺及局部氨基酸脫羧構(gòu)成的組胺、酪胺等胺類(lèi)物質(zhì)。方法：比擬對(duì)照品和供試品惹起麻醉貓〔或狗〕血壓下降的水平，以判別供試品中所含降壓物質(zhì)的限制能否契合規(guī)則。ChP2000降壓物質(zhì)：指某些藥物中含有的能招致血壓降低的雜質(zhì)，包括組胺、無(wú)菌反省法是反省藥品及敷料能否染有活菌的一種方法，是藥典中較重要的反省項(xiàng)目之一。由于許多生化藥物是在無(wú)菌條件下制備的，且不能高溫滅菌。因此，無(wú)菌反省就更有必要。中國(guó)藥典中簡(jiǎn)直一切的注射用藥均做無(wú)菌反省。參照?中國(guó)生物制品規(guī)程?無(wú)菌反省法是反省藥品及敷料能否染有活菌的一種方法，是藥典中較基因工程藥物中能夠的雜質(zhì)：殘留DNA、宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)、內(nèi)毒素、蛋白質(zhì)突變體和蛋白質(zhì)裂解物等。主要反省項(xiàng)目：外源性DNA、宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)、其他有關(guān)雜質(zhì)和細(xì)菌內(nèi)毒素。基因工程藥物中能夠的雜質(zhì)：致突變實(shí)驗(yàn)包