GUIDE-VET-04-實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的疼痛與痛苦的識(shí)別和緩解制度

上海睿智化學(xué)研究有限公司上海睿智化學(xué)研究有限公司保密，不許復(fù)制上海睿智化學(xué)研究有限公司標(biāo)準(zhǔn)管理程序（SMP）SMP序號(hào)：CP-GUIDE-VET-04生效期：2008年4月31日版本：01頁(yè)碼：1of10SMP:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的疼痛與痛苦的識(shí)別和緩解制度制定人：賈敏、張圣香制定日期：2008年4月1日審核人：查若鵬審核日期：2008年4月12日批準(zhǔn)人：聞丹憶,）批準(zhǔn)日期：2008年4月31日存檔人：狄怡樂(lè)存檔日期：2008年4月31日分發(fā)名單：<質(zhì)量保證部門（原始檔案）所有SMP手冊(cè)SMP:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的疼痛與痛苦的識(shí)別和緩解制度SMP:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的疼痛與痛苦的識(shí)別和緩解制度頁(yè)碼：of10上海睿智化學(xué)研究有限公司上海睿智化學(xué)研究有限公司保密，不許復(fù)制1.0目的為了遵循動(dòng)物福利法、人道的對(duì)待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作做出指導(dǎo)。2.0范圍此適用于所有試驗(yàn)人員、獸醫(yī)和麻醉劑管理人員。3.0參考文獻(xiàn)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》《麻醉劑管理?xiàng)l例》《Thedevelopmentofscience-basedguidelinesforlaboratoryanimalcare》AmericanCollegeofLaboratoryAnimalMedicine.1997.AnesthesiaandAnalgesiainLaboratoryAnimals.D.F.Kohn,S.K.Wixson,W.J.WhiteandG.J.Benson,eds.AcademicPress.NationalResearchCouncil.2000.DefinitionofPainandDistressandReportingRequirementsforLaboratoryAnimals.Wolfensohn,S.andM.Lloyd,1998.HandbookofLaboratoryAnimalManagementandWelfare,SecondEdition.BlackwellScience,Oxford.334pp.RecognitionandAlleviationofPainandDistressinLaboratoryAnimals.NRC.1992.4.0內(nèi)容4.1疼痛與止痛?外科手術(shù)或具侵略性的實(shí)驗(yàn)對(duì)動(dòng)物會(huì)產(chǎn)生疼痛而導(dǎo)致一系列的生理反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。站在人道的立場(chǎng)，可以在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的條件下，于手術(shù)后內(nèi)給予止痛劑注射。一般可以給予下列藥物作止痛、消炎的處理：令抗休克的類固醇

令麻醉性鎮(zhèn)痛劑令非類固醇類抗炎癥藥物?小鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的疼痛評(píng)價(jià)與止痛措施:洪痛程度評(píng)估項(xiàng)目j、輕微中等嚴(yán)重體重體重體重減少原體重的%以下體重減少原體重的0%體重減少原體重的％以上外觀身體姿勢(shì)短暫弓背，特別是投藥后間歇性弓背持續(xù)性弓背毛發(fā)豎起情形部分毛發(fā)豎起明顯皮毛粗糙明顯皮毛粗糙，并伴隨其他癥狀如弓背、遲鈍反應(yīng)及行為臨床癥狀呼吸正常間歇性呼吸異常持續(xù)性呼吸困難流延短暫的間歇性弄濕下額皮毛持續(xù)性弄濕下額附近的皮毛震顫短暫的間歇性持續(xù)性痙攣無(wú)間歇性（每次以下）持續(xù)性（若每次超過(guò)以上，則建議安樂(lè)死）沉睡、臥倒無(wú)短暫的（以下）持續(xù)以上（若每次超過(guò)以上，則建議安樂(lè)死）無(wú)刺激時(shí)一般行為社會(huì)化行為與群體有對(duì)等的互動(dòng)與群體互動(dòng)較少?zèng)]有任何的互動(dòng)行為對(duì)刺激的反應(yīng)受刺激時(shí)行為反應(yīng)變化不大受刺激時(shí)也壓抑行為反應(yīng)（如被人捉抓時(shí)）對(duì)刺激或外部行為無(wú)任何反應(yīng)止痛措施繼續(xù)觀察，至逐漸恢復(fù)正常給予止痛劑無(wú)法解除疼痛，采取安樂(lè)死

?大鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的疼痛評(píng)價(jià)與止痛措施:f一飛痛程度評(píng)估項(xiàng)目輕微中等嚴(yán)重體重（不包含暫時(shí)性體重減輕）體重體重減少少于原體重0體重減少少于原體重?5體重減少少于原體重％以上食物飲水消耗內(nèi)僅攝食正常量的％內(nèi)攝食低于正常量的0以下天內(nèi)攝食低于正常量的%，或食欲不振超過(guò)外觀身體姿勢(shì)短暫弓背，特別是投藥后間歇性弓背持續(xù)性弓背毛發(fā)豎起情形部分毛發(fā)豎起明顯皮毛粗糙明顯皮毛粗糙，并伴其他癥狀如弓背、遲鈍反應(yīng)及行為臨床癥狀呼吸正常間歇性的呼吸異常持續(xù)性的呼吸困難流延短暫的間歇性弄濕下額皮毛持續(xù)性弄濕下額附近的皮毛震顫短暫的間歇性的持續(xù)性的痙攣無(wú)間歇性的（每次以下）持續(xù)性的（若每次超過(guò)以上，則建議安樂(lè)死）沉睡、臥倒無(wú)短暫的（以下）持續(xù)超過(guò)以上（若每次超過(guò)以上，則建議安樂(lè)死）無(wú)刺激時(shí)一般行為社會(huì)化行為與群體有對(duì)等的互動(dòng)與群體互動(dòng)較少?zèng)]有任何的互動(dòng)對(duì)刺激的反應(yīng)受刺激時(shí)行為反應(yīng)變化不大受刺激時(shí)會(huì)有較少的反應(yīng)（如：被人捉抓）對(duì)刺激或外部行為無(wú)任何的反應(yīng)止痛措施繼續(xù)觀察，至逐漸恢復(fù)正常給予止痛劑無(wú)法解除疼痛，采取安樂(lè)死?疼痛是一種精神緊張因子，如果不能緩解，就會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物無(wú)法承受的精神緊張和痛苦。對(duì)研究用的動(dòng)物適當(dāng)使用麻醉劑和鎮(zhèn)痛劑，在倫理學(xué)和科學(xué)方面都是必不可少的。2麻醉淺（不完全）麻醉：應(yīng)用麻醉藥物使動(dòng)物入睡，反射活動(dòng)降低或部分消失，肌肉微松弛；深（完全）麻醉：應(yīng)用麻醉藥物使動(dòng)物呈深睡狀態(tài)，反射消失及肌肉松馳。后者多用于身體狀況良好，手術(shù)實(shí)驗(yàn)復(fù)雜的情況。全身麻醉前準(zhǔn)備在實(shí)施全身麻醉時(shí)，以下幾個(gè)問(wèn)題不容忽視：令動(dòng)物禁食?小時(shí)。不能少于小時(shí)。令麻醉前不能使用瀉劑。因?yàn)闉a劑可導(dǎo)致降低血液的堿儲(chǔ)，從而增加血流和組織的酸度，在麻醉和失血情況下，易發(fā)生酸中毒并能降低損傷組織的抗感染能力。令麻醉后的動(dòng)物必須保持氣道的通暢和組織（眼球、舌、腸等器官）的營(yíng)養(yǎng)。所以依具體情況準(zhǔn)備滴眼液、濕毛巾、溫的生理鹽水等。令若犬做長(zhǎng)時(shí)間，實(shí)驗(yàn)前小時(shí)應(yīng)灌腸排除積糞。令檢查麻醉劑質(zhì)量、數(shù)量是否滿足要求，麻醉保定器具是否有破損（漏氣或堵塞），有關(guān)麻醉中毒急救品和器材是否準(zhǔn)備齊妥，以應(yīng)急需。麻醉的分期第一期：無(wú)痛期動(dòng)物開(kāi)始失去知覺(jué)第二期：興奮期呼吸急促、狂亂或吼叫、對(duì)刺激非常敏感。第三期：手術(shù)麻醉期分四節(jié)，一、二節(jié)最適合手術(shù)。第四期：休克死亡期呼吸、心跳幾乎停止，?分鐘內(nèi)可能死亡。第三期的第三、四節(jié)是動(dòng)物接近死亡的高危險(xiǎn)期，此時(shí)必須暫停手術(shù)進(jìn)行急救，否則動(dòng)物一旦進(jìn)入四期休克就可能死亡。麻醉各期的生理變化：麻醉期呼吸瞳孔眼球轉(zhuǎn)移反射肌肉張力脈搏血壓第一期規(guī)則正常隨意存在正常升高第二期不規(guī)則擴(kuò)張不隨意存在激動(dòng)緊張升高第三期第一節(jié)（輕度）深度、速度增加收縮不隨意或固定不動(dòng)眼結(jié)膜、咽喉輕微松弛正常第二節(jié)（中度）正常正常固定不動(dòng)咽喉中度松弛正常第三節(jié)（深度）深度、速度降低輕微擴(kuò)張固定不動(dòng)無(wú)輕微松弛脈搏不振、血壓下降第四節(jié)（過(guò)量）腹式呼吸中度擴(kuò)張固定不動(dòng)無(wú)固定不動(dòng)脈搏、血壓下降休克死亡期腹式呼吸輕度擴(kuò)張固定不動(dòng)無(wú)固定不動(dòng)脈搏、血壓為零?動(dòng)物麻醉的方法有全身麻醉、局部麻醉、針刺麻醉、復(fù)合麻醉、低溫麻醉等。一般實(shí)驗(yàn)室所采用的大部分是全身麻醉（吸入麻醉和非吸入麻醉）。吸入麻醉：常用的吸入麻醉劑有乙醚、氟脘、甲氧氟脘、氯仿等。乙氟烷的吸入麻醉：令乙氟脘無(wú)色透明，極易揮發(fā)，特殊氣味，易燃易爆，須保存于暗色容器中置陰涼處。令操作：連接蒸發(fā)器，氣體流量計(jì)和呼吸環(huán)形管，將連接好的該套裝置放在通風(fēng)良好處進(jìn)行操作。灌注麻醉劑：確定蒸發(fā)器上的控制刻度盤保持在“OFF”位置，逆時(shí)針旋開(kāi)填充蓋，并確保排出的栓子處于關(guān)閉狀態(tài)。緩慢倒入異氟烷麻醉劑，通過(guò)安裝在側(cè)面的玻璃視鏡觀察麻醉劑的量。順時(shí)針旋上填充蓋，確保旋緊已防泄漏。啟動(dòng)蒸發(fā)器推下控制刻度盤旁邊的鎖定杠桿。逆時(shí)針?lè)较蛐齽?dòng)控制刻度盤，調(diào)至理想濃度。打開(kāi)異氟烷麻醉劑的排出栓子，蒸氣流量開(kāi)始在刻度盤上越過(guò)“0”刻度做輕微的移動(dòng)。設(shè)置氣體流量計(jì)打開(kāi)氧氣鋼瓶上的控制閥門，確保氧氣流入氣體環(huán)管內(nèi)。彈出流量計(jì)上的閥門，順時(shí)針旋動(dòng)，調(diào)至理想壓力。將動(dòng)物的頭部放在呼吸環(huán)管口進(jìn)行麻醉，當(dāng)動(dòng)物角膜反射遲鈍、肌緊張降低，將動(dòng)物移走，進(jìn)行相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)操作。若動(dòng)物逐漸開(kāi)始恢復(fù)肌緊張（重新掙扎）則重復(fù)麻醉一次，待平靜后即可進(jìn)行驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)完成后，關(guān)閉氧氣鋼瓶的控制閥門，將流量計(jì)上的閥門及蒸發(fā)器上的控制刻度盤歸零，并關(guān)閉異氟烷麻醉劑的排出栓子?；旌蠚怏w（）的吸入麻醉：令少量動(dòng)物使用透明的小盒或透明小箱子進(jìn)行麻醉，大量動(dòng)物則使用大盒進(jìn)行。如果需要麻醉的動(dòng)物數(shù)量眾多，則需將動(dòng)物分批進(jìn)行麻醉，不可使動(dòng)物堆疊于盒內(nèi)進(jìn)行。令操作：將動(dòng)物放入盒內(nèi)，打開(kāi)壓力閥，以的壓力差灌注混合氣體，至動(dòng)物自行倒下。當(dāng)動(dòng)物角膜反射遲鈍、肌緊張降低，即可關(guān)閉閥門，取出動(dòng)物。若動(dòng)物逐漸開(kāi)始恢復(fù)肌緊張（重新掙扎）則重復(fù)麻醉一次，待平靜后即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。?非吸入麻醉非吸入麻醉的給藥常用注射方法，如靜脈注射、肌肉內(nèi)注射、皮下注射、腹腔內(nèi)注射等。常用的麻醉劑如下：令巴比妥類：巴比妥鈉是最常用的一種動(dòng)物麻醉劑，麻醉潛伏期短，維持時(shí)間較長(zhǎng)。既可腹腔內(nèi)注射，又可以靜脈注射，一般用生理鹽水配制。操作：用該藥麻醉時(shí)，中型動(dòng)物多為靜脈給藥，也可腹腔給藥，小型動(dòng)物多為腹腔給藥。先一次推入總量的2/3待,觀察動(dòng)物的行為，若已達(dá)到所需的麻醉深度，則不一定全部給完所有藥量。動(dòng)物的健康狀況、體質(zhì)、年齡、性別也影響給藥劑量和麻醉效果，因此實(shí)際麻醉動(dòng)物時(shí)應(yīng)視具體情況對(duì)麻醉劑量進(jìn)行調(diào)整。令氯胺酮：國(guó)家管制藥。該麻醉劑注射后很快使動(dòng)物進(jìn)入淺睡眠狀態(tài)，但不引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)深度抑制，所以一些保護(hù)性反射仍然存在，麻醉的安全性相對(duì)高，是一種鎮(zhèn)痛麻醉劑。一般多用于犬、貓等動(dòng)物的基礎(chǔ)麻醉。本品能迅速通過(guò)胎盤屏障，影響胎兒，所以用于懷孕動(dòng)物時(shí)需慎重。雖然高劑量注射時(shí)，也可使動(dòng)物死亡，但由于死亡前動(dòng)物常呈現(xiàn)疼痛及抽搐現(xiàn)象，因此只用于動(dòng)物的一般性保定、鎮(zhèn)定、止痛及麻醉，不能作為動(dòng)物安樂(lè)死用藥劑。?實(shí)驗(yàn)麻醉并發(fā)癥的預(yù)防和急救實(shí)驗(yàn)過(guò)程中因麻醉深度或其它因素影響，可導(dǎo)致一些可見(jiàn)的臨床表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)加以處理。令呼吸停止呼吸停止常因舌回縮、呼吸被抑制、機(jī)體機(jī)能衰竭或用藥過(guò)量等因素造成呼吸困難，甚至呼吸停止。呼吸停止的表現(xiàn)是胸廓呼吸運(yùn)動(dòng)停止、粘膜發(fā)鉗、角膜反射消失或極低、瞳孔散大等。呼吸停止的初期，可見(jiàn)呼吸淺表、頻數(shù)不整而且間歇。此時(shí)必須停止供給麻醉劑，先張開(kāi)動(dòng)物口腔，拉出舌尖到口角外，輸氧同時(shí)，應(yīng)用心臟和呼吸興奮藥，如0.腎1上%腺素、可拉明、科第阿明等。令心跳停止心搏停止多因機(jī)體機(jī)能衰竭、藥物過(guò)敏或麻醉藥過(guò)量等因素引發(fā)。解救藥有安鈉咖、腎上腺素（興奮心搏）、地塞米松（抗過(guò)敏）和麻醉藥的拮抗劑。吸入氯仿、乙醚時(shí)，有時(shí)于麻醉初期出現(xiàn)反射性心跳停止，通常是由于劑量過(guò)大的原因。還有一種情況，就是手術(shù)后麻醉劑所致的心臟急性變性，心功能急劇衰竭而停跳。心跳停止的到來(lái)可能無(wú)預(yù)兆。呼吸和脈博突然消失，粘膜發(fā)鉗。心跳停止應(yīng)迅速采用心臟按摩，即用掌心（小動(dòng)物可用指心）在心臟區(qū)有節(jié)奏地敲擊胸壁，其頻率相當(dāng)于該動(dòng)物正常心臟收縮次數(shù)。同時(shí)，心室注射強(qiáng)心劑0.腎1上%腺