臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)筆記

《微生物檢驗(yàn)》第195頁(yè)緒論【內(nèi)容講解】

一、微生物

概念：微生物是存在于自然界的一大群形體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、肉眼不能直接看到，必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百至數(shù)萬(wàn)倍才能看到的微小生物。

微生物的分類：（三型八大類）三型八大類特點(diǎn)非細(xì)胞型微生物病毒（亞病毒和朊粒）無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單，體積最微小，能通過(guò)細(xì)菌濾器；

單一核酸；

活性細(xì)胞內(nèi)寄生。原核細(xì)胞型微生物細(xì)菌、放線菌、螺旋體、支原體、衣原體、立克次體僅有原始核；

缺乏完整的細(xì)胞器。真核細(xì)胞型微生物真菌細(xì)胞核分化程度較高；

有絲分裂進(jìn)行繁殖；

有多種完整的細(xì)胞器。微生物與人類的關(guān)系（寄居人類）

正常菌群：指定居在人類皮膚及與外界相通的腔道黏膜上的各類非致病微生物，非但無(wú)害，而且具有拮抗某些病原微生物和提供某些營(yíng)養(yǎng)物的作用。

條件致病性微生物：原屬正常菌群中的細(xì)菌，不會(huì)引起疾病，由于機(jī)體抵抗力下降、微生物寄居部位改變或菌群失調(diào)，此時(shí)該菌可致病。臨床上多引起內(nèi)源性感染。

病原微生物：可引起人類和動(dòng)、植物致病的微生物，影響人類健康與生命，是醫(yī)學(xué)微生物中要研究的主體。

二、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)和臨床微生物學(xué)

微生物學(xué)：生物學(xué)的一個(gè)重要分支。

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)：研究對(duì)人類致病的微生物及其生命活動(dòng)規(guī)律，只涵蓋了微生物學(xué)的很小一部分。

臨床微生物學(xué)：屬于醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的范疇。側(cè)重研究感染性疾病快速、準(zhǔn)確的診斷病原體的策略與方法，為臨床診斷提供依據(jù)。

臨床微生物學(xué)的性質(zhì)和任務(wù)

臨床微生物學(xué)：

屬于醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的范疇。

側(cè)重研究感染性疾病快速、準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷的策略與方法，為臨床診斷提供依據(jù)。

（一）臨床微生物學(xué)的性質(zhì)和任務(wù)

1.研究感染性疾病的病原體特征

2.提供快速、準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷

3.指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物

4.對(duì)醫(yī)院感染進(jìn)行監(jiān)控

①病原學(xué)診斷；

②藥物敏感試驗(yàn)；

③環(huán)境、器械等微生物學(xué)調(diào)查；

④保證醫(yī)院內(nèi)消毒、滅菌質(zhì)量；

⑤細(xì)菌學(xué)分型試驗(yàn)和同源性分析；

⑥對(duì)醫(yī)院工作人員進(jìn)行培訓(xùn)工作；

⑦建立醫(yī)院感染預(yù)防控制體系，落實(shí)相關(guān)制度和措施。

（二）臨床微生物檢驗(yàn)的思路與原則

1.確保分析前質(zhì)量臨床標(biāo)本可靠

2.全面了解機(jī)體正常菌群

3.保證檢驗(yàn)質(zhì)量、快速準(zhǔn)確提供信息

4.微生物學(xué)定性、定量和定位分析結(jié)合患者病情，并對(duì)分離菌進(jìn)行定性、定量及定位分析，方可保證檢驗(yàn)結(jié)果符合臨床診斷

5.加強(qiáng)與臨床聯(lián)系

臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的現(xiàn)狀、發(fā)展和展望

（一）感染性疾病的現(xiàn)狀

1.易感人群不斷增加

2.新病原體不斷出現(xiàn)、已控制的病原體死灰復(fù)燃

3.感染因子在非感染性疾病中的作用越來(lái)越明顯

4.細(xì)菌耐藥和醫(yī)院感染的問(wèn)題日趨嚴(yán)重

（二）快速診斷方法的發(fā)展

1.改變流程、縮短報(bào)告周期

2.非培養(yǎng)快速鑒定

（三）分子生物學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展

（四）計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展

（五）愿景和展望

【例題】不屬于原核細(xì)胞型的微生物是

A.螺旋體

B.放線菌

C.病毒

D.細(xì)菌

E.立克次體[答疑編號(hào)502383010101]

【正確答案】C

【例題】正常情況下，機(jī)體有菌的部位是

A.胃

B.骨骼

C.肌肉

D.血液

E.外耳道[答疑編號(hào)502383010102]

【正確答案】E

本章小結(jié)：

一、微生物的概念和分類

二、微生物與人類的關(guān)系

三、臨床微生物的思路和原則細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)●考點(diǎn)

細(xì)菌的大小和形態(tài)

細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)

細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)

細(xì)菌L型

【內(nèi)容講解】

一、細(xì)菌的大小和形態(tài)

大?。盒误w微小，通常以微米作為測(cè)量單位

形態(tài)：

球菌

雙球菌；鏈球菌；葡萄球菌；四聯(lián)球菌和八疊球菌

桿菌

螺形菌

弧菌；螺菌

影響細(xì)菌形態(tài)的因素：①培養(yǎng)條件；②機(jī)體內(nèi)生態(tài)環(huán)境；③環(huán)境中不利于細(xì)菌生長(zhǎng)的物質(zhì)。

二、細(xì)菌的結(jié)構(gòu)

（一）基本結(jié)構(gòu)

1.細(xì)胞壁

細(xì)胞壁的主要功能：

①維持菌體固有形態(tài)并起保護(hù)作用

②與細(xì)胞膜共同完成菌體內(nèi)外的物質(zhì)交換（存在微孔）

③細(xì)胞壁上的抗原決定簇，決定著菌體的抗原性（蛋白）

④細(xì)胞壁是鞭毛運(yùn)動(dòng)的支點(diǎn)

革蘭陽(yáng)性菌（G+菌）

革蘭陰性菌（G-菌）

化學(xué)組成

基本成分：肽聚糖

G+菌特有成分：磷壁酸

G-菌特有成分：外膜

肽聚糖

細(xì)胞壁（革蘭陽(yáng)性菌）

細(xì)胞壁（革蘭陰性菌）

革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌細(xì)胞壁的比較

2.細(xì)胞膜

（1）細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和成分

結(jié)構(gòu)——脂質(zhì)雙層

化學(xué)成分——脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、少量多糖

（2）細(xì)胞膜的主要功能

①物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)

②生物合成

③呼吸作用

④分泌作用

中介體：又稱中間體，是細(xì)胞膜內(nèi)陷折疊而成的管狀囊狀結(jié)構(gòu)。其功能類似真核細(xì)胞的線粒體，故有人稱之為類線粒體。

3.細(xì)胞質(zhì)

（1）核糖體：蛋白質(zhì)的合成場(chǎng)所。

（2）核質(zhì)：一條細(xì)長(zhǎng)的閉環(huán)雙鏈DNA反復(fù)盤(pán)繞卷曲而成的塊狀物。核質(zhì)決定細(xì)菌性狀和遺傳特征，是細(xì)菌的主要遺傳物質(zhì)。

（3）質(zhì)粒：是細(xì)菌染色體（核質(zhì)）以外的遺傳物質(zhì)，為雙鏈閉環(huán)DNA分子，攜帶遺傳信息，控制細(xì)菌某些特定的遺傳性狀。

（4）胞質(zhì)顆粒：又稱內(nèi)含物，包括多糖（如糖原、淀粉等）、脂類、磷酸鹽等。異染顆粒是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一（白喉棒狀桿菌）。

（二）特殊結(jié)構(gòu)

1.莢膜

概念：某些細(xì)菌在細(xì)胞壁外包繞的一層界限分明，且不易被洗脫的黏稠性物質(zhì)。

功能：

①對(duì)細(xì)菌具有保護(hù)作用（抵抗吞噬細(xì)胞的吞噬作用及細(xì)胞因子的傷害）

②致病作用（肺炎鏈球菌）

③抗原性

④鑒別細(xì)菌的依據(jù)（莢膜腫脹實(shí)驗(yàn)）

2.鞭毛

概念：由細(xì)胞質(zhì)伸出的蛋白性絲狀物

分類：?jiǎn)伪廾浑p鞭毛；叢鞭毛；周鞭毛

功能：

（1）細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官

（2）致病作用（有利于細(xì)菌進(jìn)入粘液層）

（3）抗原性（其本質(zhì)是蛋白質(zhì)）

3.菌毛

概念：極其纖細(xì)的蛋白性絲狀物。菌毛比鞭毛更細(xì)，且短而直，硬而多，須用電鏡才能看到。

種類及功能：

普通菌毛：粘附作用，與致病性有關(guān)

性菌毛：比普通菌毛長(zhǎng)而粗，中空呈管狀（結(jié)合方式轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)）

經(jīng)接合方式轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)

雄性菌（F+菌），雌性菌（F-菌）

4.芽胞

概念：某些細(xì)菌（主要是革蘭陽(yáng)性桿菌）在一定條件下，細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)脫水濃縮而形成的圓形或橢圓形的小體。

生物學(xué)意義：

（1）某些疾病的潛在傳染源

（2）將芽胞是否被殺死而作為判斷滅菌效果的指標(biāo)

（3）具有重要鑒別價(jià)值（大小、位置，破傷風(fēng)，芽孢位于頂端，肉毒梭菌押寶位于中間部位）

（4）芽胞在適宜條件可以發(fā)育成相應(yīng)的繁殖體

三、細(xì)菌L型（非典型形態(tài)與結(jié)構(gòu)）

細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型（細(xì)菌L型），在某種情況下細(xì)胞壁肽聚糖結(jié)構(gòu)可遭破壞，或當(dāng)其合成受到抑制時(shí)，革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁幾乎完全缺失，原生質(zhì)僅被一層胞膜包繞，一般呈球形，稱原生質(zhì)體。革蘭陰性菌經(jīng)溶菌酶處理后，因其細(xì)胞壁中肽聚糖含量較少，且可保留某些或全部的外膜保護(hù)，內(nèi)部滲透壓又比革蘭陽(yáng)性菌低，故形成一種對(duì)低滲環(huán)境具有一定抵抗力的圓球體，或稱原生質(zhì)球。原生質(zhì)體與原生質(zhì)球都是細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌，通常將能有效生長(zhǎng)和增殖的細(xì)胞壁缺陷型細(xì)菌稱為細(xì)菌L型。因是在法國(guó)Lister研究院最早發(fā)現(xiàn)這種細(xì)胞壁缺陷細(xì)菌，故取Lister的第一字母L命名。細(xì)菌L型呈明顯的多形性，大小不一，形態(tài)各異，有圓形、卵圓形、膨大的桿狀或長(zhǎng)絲狀。染色時(shí)不易著色，染色性常發(fā)生變化。革蘭染色大多呈陰性，被染成紅色，且著色不均勻；由于細(xì)胞壁缺陷程度不一，在同一視野中可出現(xiàn)陽(yáng)性、陰性混雜現(xiàn)象，或菌體內(nèi)出現(xiàn)革蘭陽(yáng)性濃染顆粒。細(xì)菌L型生長(zhǎng)緩慢，營(yíng)養(yǎng)要求高，對(duì)滲透壓敏感，普通培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，培養(yǎng)時(shí)必須用高滲的含血清的培養(yǎng)基。細(xì)菌L型在含血清的高滲低瓊脂培養(yǎng)基中能緩慢生長(zhǎng)，可形成三種類型的菌落：

①“油煎蛋”樣菌落（典型L型細(xì)菌）：菌落較小，中心致密并深陷人瓊脂中；四周較薄，由透明的顆粒組成，在低倍鏡下觀察菌落呈“油煎蛋”狀。

②顆粒型菌落（簡(jiǎn)稱G型菌落）：整個(gè)菌落由透明的顆粒組成，無(wú)致密的核心。

③絲狀菌落（簡(jiǎn)稱F型菌落）：菌落中心如典型L型菌落，但周邊呈絲狀。

【例題】細(xì)菌的測(cè)量單位是

A.km

B.nm

C.cm

D.mm

E.μm[答疑編號(hào)502383020101]

【正確答案】E

【例題】具有黏附能力的細(xì)菌結(jié)構(gòu)是

A.莢膜

B.鞭毛

C.菌毛

D.芽胞

E.中介體[答疑編號(hào)502383020102]

【正確答案】C

【例題】青霉素的抗菌作用機(jī)制是

A.抑制細(xì)菌的核酸代謝

B.干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成

C.破壞細(xì)胞壁中的肽聚糖

D.破壞細(xì)胞膜

E.抑制細(xì)菌的酶活性[答疑編號(hào)502383020103]

【正確答案】C

【例題】革蘭陰性菌特有的成分是

A.肽聚糖

B.壁磷壁酸

C.膜磷壁酸

D.外膜

E.脂類[答疑編號(hào)502383020104]

【正確答案】D

【例題】關(guān)于細(xì)菌L型，下列哪一項(xiàng)是錯(cuò)誤的

A.細(xì)菌L型是遺傳性變異的細(xì)菌

B.細(xì)菌L型是細(xì)菌失去細(xì)胞壁所形成的細(xì)胞壁缺陷型

C.細(xì)胞壁的缺陷主要是肽聚糖的缺陷

D.細(xì)菌L型在脫離誘導(dǎo)劑后可回復(fù)為原來(lái)的細(xì)菌

E.凡能破壞肽聚糖結(jié)構(gòu)或抑制其合成的物質(zhì)都能導(dǎo)致細(xì)菌L型的形成[答疑編號(hào)502383020105]

【正確答案】A

本章小結(jié)：

一、細(xì)菌的形態(tài)

二、細(xì)菌的結(jié)構(gòu)

三、細(xì)菌L型細(xì)菌的生理●考點(diǎn)

細(xì)菌的化學(xué)組成

細(xì)菌的物理性狀

細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件

細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律

細(xì)菌的代謝

【內(nèi)容講解】

一、細(xì)菌的化學(xué)組成

基本組成：水、無(wú)機(jī)鹽、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸。

特有的化學(xué)物質(zhì)：肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、D型氨基酸、二氨基庚二酸（DAP）、吡啶二羧酸（DPA）、2-酮基-3-脫氧辛酸（KDO）、脂多糖（LPS）等。

細(xì)菌含有核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）兩種核酸。RNA主要存在于胞質(zhì)中，占細(xì)菌干重的10%；DNA則存在于染色體和質(zhì)粒中，占細(xì)菌干重的3%左右。DNA作為細(xì)菌的遺傳物質(zhì)是指導(dǎo)細(xì)菌新陳代謝、生長(zhǎng)繁殖和遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)菌的DNA堿基配對(duì)是腺嘌呤（A）與胸腺嘧啶（T），鳥(niǎo)嘌呤（G）與胞嘧啶（C）。每種細(xì)菌DNA中的G＋C含量摩爾百分比有一定范圍，變化不大，不受菌齡和外界環(huán)境因素的影響，故可作為細(xì)菌分類的一個(gè)重要依據(jù)。

二、細(xì)菌的物理性狀

帶電現(xiàn)象

表面積細(xì)菌體積雖小，但單位體積的表面積遠(yuǎn)比其他生物細(xì)胞要大。細(xì)菌的表面積大，有利于菌體內(nèi)外界的物質(zhì)交換，故細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖迅速。

光學(xué)性質(zhì)細(xì)菌細(xì)胞為半透明體，當(dāng)光線照射在菌體上，一部分光被吸收，另一部分光被折射，故細(xì)菌懸液呈混濁狀態(tài)。菌數(shù)越多，濁度越大。

半透性與滲透性細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜都有半透性，使細(xì)菌與外界進(jìn)行物質(zhì)交換。細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜都具有半透膜性質(zhì)，可允許水分子通過(guò)，而對(duì)其他物質(zhì)則有選擇性通過(guò)作用。細(xì)菌吸取營(yíng)養(yǎng)和排出代謝產(chǎn)物，均有賴于這種通透作用。革蘭陽(yáng)性菌體內(nèi)滲透壓高達(dá)506.625～2533.125Pa；革蘭陰性菌也有506.625～607.96Pa。細(xì)菌具有堅(jiān)韌的細(xì)胞壁，能耐受菌體內(nèi)的高滲透壓，并能保護(hù)細(xì)菌在低滲透壓環(huán)境中不致膨脹破裂。

三、細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)

1.營(yíng)養(yǎng)類型

2.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

包括水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽類和生長(zhǎng)因子等五類。

3.營(yíng)養(yǎng)機(jī)制

轉(zhuǎn)運(yùn)的方式：①離子轉(zhuǎn)運(yùn)；②透性酶轉(zhuǎn)運(yùn)；③磷酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。

轉(zhuǎn)運(yùn)途徑：①被動(dòng)擴(kuò)散；②主動(dòng)吸收；③基團(tuán)轉(zhuǎn)位

四、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件

1.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

2.合適的pH7.2～7.6

3.適宜的溫度35～37℃

4.必要的氣體

根據(jù)對(duì)氧的需要程度，可將細(xì)菌分為：

（1）需氧菌：必須在有氧（空氣）的情況下才能生長(zhǎng)。

（2）微需氧菌：在5%～6%的低氧環(huán)境中才能生長(zhǎng)。(腸道彎曲菌，幽門(mén)螺桿菌)

（3）厭氧菌：必須在無(wú)氧的環(huán)境中才能生長(zhǎng)。

（4）兼性厭氧菌：在有氧和無(wú)氧環(huán)境中均能生長(zhǎng)。

CO2(5-10)%生長(zhǎng)（腦膜炎奈瑟菌）

五、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律

1.細(xì)菌個(gè)體的生長(zhǎng)繁殖

方式：無(wú)性二分裂

代時(shí)：20～30min

2.細(xì)菌群體的生長(zhǎng)繁殖

細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線：

（1）遲緩期：適應(yīng)階段

（2）對(duì)數(shù)期：細(xì)菌的形態(tài)、染色性、生理活性都較典型

（3）穩(wěn)定期：細(xì)菌繁殖數(shù)與死亡數(shù)大致平衡

（4）衰亡期：細(xì)菌死亡逐漸增多，死菌數(shù)超過(guò)活菌數(shù)

六、細(xì)菌的新陳代謝

酶催化整個(gè)細(xì)胞的全部代謝活動(dòng)

能量代謝

細(xì)菌代謝所需能量主要是以生物氧化作用而獲得的

細(xì)菌合成代謝產(chǎn)物及其意義

（1）熱原質(zhì)：大多數(shù)為革蘭陰性菌合成的菌體脂多糖

（2）毒素：

內(nèi)毒素：G-菌的脂多糖

外毒素：G+菌產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，毒性強(qiáng)且有高度的選擇性

（3）侵襲性酶：有些細(xì)菌還能產(chǎn)生具有侵襲性的酶，如卵磷脂酶、透明質(zhì)酸酶等

注：毒素和侵襲性酶在細(xì)菌致病性中甚為重要

（4）色素：

水溶性色素

脂溶性色素

注：有鑒定作用

（5）抗生素

（6）細(xì)菌素

（7）維生素

【例題】細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件包括

A.充足的營(yíng)養(yǎng)

B.合適的酸堿度

C.適宜的溫度

D.必要的氣體

E.瓊脂[答疑編號(hào)502383030101]

【正確答案】ABCD

【例題】細(xì)菌特有的化學(xué)物質(zhì)有

A.肽聚糖

B.磷壁酸

C.二氨基庚二酸（DAP）

D.吡啶二羧酸（DPA）

E.脂多糖（LPS）[答疑編號(hào)502383030102]

【正確答案】ABCDE

【例題】研究細(xì)菌性狀最好選用哪個(gè)生長(zhǎng)期的細(xì)菌

A.遲緩期

B.對(duì)數(shù)期

C.穩(wěn)定期

D.衰亡期

E.以上均可[答疑編號(hào)502383030103]

【正確答案】B

【例題】下列物質(zhì)中不是細(xì)菌合成代謝產(chǎn)物的是

A.色素

B.細(xì)菌素

C.熱原質(zhì)

D.抗毒素

E.抗生素[答疑編號(hào)502383030104]

【正確答案】D

本章小結(jié)：

一、細(xì)菌的化學(xué)組成

二、細(xì)菌的物理性狀

三、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件

四、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律

五、細(xì)菌的合成代謝細(xì)菌的遺傳與變異●考點(diǎn)

細(xì)菌的遺傳物質(zhì)

細(xì)菌的變異現(xiàn)象

細(xì)菌變異的機(jī)制

遺傳變異研究的實(shí)際意義

【內(nèi)容講解】

一、遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)

細(xì)菌的遺傳物質(zhì)是DNA

細(xì)菌遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)存在于染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)位因子

（一）細(xì)菌染色體

為一條環(huán)狀閉合雙螺旋長(zhǎng)鏈，反復(fù)折疊扭曲形成負(fù)超螺旋結(jié)構(gòu)，減少了二級(jí)結(jié)構(gòu)右手螺旋張力，使其結(jié)構(gòu)更趨穩(wěn)定；同時(shí)，負(fù)超螺旋的存在使復(fù)制又能不斷向前推進(jìn)，并為復(fù)制起始階段解鏈提供所需能量。

細(xì)菌的基因結(jié)構(gòu)呈連續(xù)性、幾乎無(wú)內(nèi)含子，因此，轉(zhuǎn)錄后的DNA不需加工剪切即可產(chǎn)生成熟的mRNA。細(xì)菌DNA復(fù)制和表達(dá)，大多數(shù)細(xì)菌的基因組中只有一個(gè)起始點(diǎn)順序，復(fù)制時(shí)成團(tuán)的DNA解開(kāi)成環(huán)狀。由DNA經(jīng)過(guò)RNA到多肽鏈的過(guò)程，即基因表達(dá)的過(guò)程。

（二）細(xì)菌質(zhì)粒

概念：細(xì)菌體內(nèi)染色體外的閉合環(huán)狀雙股DNA，有時(shí)也可呈線狀或超螺旋狀。

質(zhì)粒的基本特性：

①質(zhì)粒DNA的復(fù)制為不依賴細(xì)菌染色體而自主復(fù)制；

②可自行丟失和消除；

③轉(zhuǎn)移性；

④編碼產(chǎn)物賦予細(xì)菌某些性狀特征。

質(zhì)粒的種類種類作用F質(zhì)粒（致育質(zhì)粒或致育因子）可編碼性菌毛R質(zhì)粒（耐藥性質(zhì)粒）編碼細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的耐藥性Vi質(zhì)粒（毒力質(zhì)粒）編碼與細(xì)菌致病性有關(guān)的毒力因子細(xì)菌素質(zhì)粒（如Col質(zhì)粒）編碼大腸埃希菌產(chǎn)生大腸菌素（三）細(xì)菌轉(zhuǎn)位因子

概念：為存在于細(xì)菌染色體或質(zhì)粒上的一段特異的核苷酸序列重復(fù)，它可在DNA分子中移動(dòng)，不斷改變它們?cè)诨蚪M內(nèi)的位置，從一個(gè)基因組移動(dòng)到另一個(gè)基因組中。

分類：

①插入序列：兩末端為反向重復(fù)順序和轉(zhuǎn)座有關(guān)的基因組成，不攜帶其他任何已知和插入功能無(wú)關(guān)的基因區(qū)域，是最小的轉(zhuǎn)位因子。

②轉(zhuǎn)座子：除攜帶與轉(zhuǎn)位有關(guān)的基因外，還攜帶一些結(jié)構(gòu)基因，能整合到受體DNA的多個(gè)“熱點(diǎn)”上。

③轉(zhuǎn)座噬菌體：一些具有轉(zhuǎn)座功能的溶原性噬菌體。

二、細(xì)菌的變異現(xiàn)象

形態(tài)與結(jié)構(gòu)變異

如細(xì)菌的L型形態(tài)呈現(xiàn)高度多形性且對(duì)滲透壓敏感，在普通培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。細(xì)菌的一些特殊結(jié)構(gòu)，如莢膜（肺鏈）、芽胞、鞭毛（HO變異）等也可發(fā)生變異。

菌落變異（S-R變異）

病毒突變株是一種空斑突變株，是有些病毒在敏感細(xì)胞內(nèi)連續(xù)培養(yǎng)傳代過(guò)程中產(chǎn)生大小、外形不同于野生型的空斑。

毒力變異

有毒力減弱和增強(qiáng)兩種?？ń槊缡且恢甓玖p弱而保留抗原性的變異株，預(yù)防接種對(duì)人不致病，卻可使人獲得免疫力。

耐藥性變異

其產(chǎn)生可通過(guò)細(xì)菌染色體耐藥基因的突變、耐藥質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)座子的插入，使細(xì)菌產(chǎn)生一些新的酶類或多肽類物質(zhì)，破壞抗菌藥物或阻擋藥物向靶細(xì)胞穿透，或發(fā)生新的代謝途徑，從而產(chǎn)生對(duì)抗生素的耐藥性，造成臨床藥物治療的失敗。

熱源性變異

酶活性變異

三、細(xì)菌變異的機(jī)制

基因的突變

基因的轉(zhuǎn)移和重組

（一）基因的突變

基因突變的規(guī)律

（1）自發(fā)突變和誘導(dǎo)

一般細(xì)菌每分裂106～109次即可發(fā)生一次

（2）隨機(jī)突變和選擇

突變是隨機(jī)和不定向的，細(xì)菌染色體上數(shù)千個(gè)基因中哪個(gè)基因發(fā)生突變、導(dǎo)致何種性狀的改變均不是由外界因素決定。

（3）突變和回復(fù)突變

某種細(xì)菌在自然環(huán)境下大多數(shù)所具有的表型菌株稱為野生型菌株，發(fā)生突變后的菌株則稱為突變型株。經(jīng)過(guò)再次突變又可成為與野生型相同表型的過(guò)程稱為回復(fù)突變。

突變的類型

（1）堿基的置換

·轉(zhuǎn)換

·顛換

（2）堿基的插入和缺失——移碼突變

（3）轉(zhuǎn)位因子的插入

（二）基因物質(zhì)的轉(zhuǎn)移和重組

1.轉(zhuǎn)化

2.轉(zhuǎn)導(dǎo)

3.接合

4.溶源性轉(zhuǎn)換

5.原生質(zhì)體融合

1.轉(zhuǎn)化：是受體菌直接攝取供體菌提供的游離DNA片段整合重組，使受體菌的性狀發(fā)生變異的過(guò)程。（受體菌處于感受態(tài)之中）

2.轉(zhuǎn)導(dǎo)：是以噬菌體為媒介，將供體菌的基因轉(zhuǎn)移到受體菌內(nèi)，導(dǎo)致受體菌基因改變的過(guò)程。

普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)

3.接合：受體菌和供體菌直接接觸，供體菌通過(guò)性菌毛將所帶有的F質(zhì)?；蝾愃七z傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移至受體菌的過(guò)程。

4.溶原性轉(zhuǎn)換：是噬菌體的DNA與細(xì)菌染色體重組，使宿主菌遺傳結(jié)構(gòu)發(fā)生改變而引起的遺傳型變異。

5.原生質(zhì)體融合：兩種經(jīng)過(guò)處理失去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體混和可發(fā)生融合，融合后的雙倍體細(xì)胞可發(fā)生細(xì)菌染色體間的重組。

四、遺傳變異研究的實(shí)際意義

在疾病的診斷、治療與預(yù)防中的應(yīng)用

在測(cè)定致癌物質(zhì)中的應(yīng)用

在流行病學(xué)中的應(yīng)用

在基因工程中的應(yīng)用

【例題】細(xì)菌形態(tài)和結(jié)構(gòu)變異包括

A.細(xì)菌的L型變異

B.有莢膜變異

C.芽胞變異

D.鞭毛變異

E.菌落變異[答疑編號(hào)502383040101]

【正確答案】ABCD

【例題】研究細(xì)菌的遺傳變異在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用包括

A.在疾病診斷中的應(yīng)用

B.在疾病治療方面的應(yīng)用

C.在疾病預(yù)防方面的應(yīng)用

D.在檢測(cè)致癌物質(zhì)方面的應(yīng)用

E.在基因工程方面的應(yīng)用[答疑編號(hào)502383040102]

【正確答案】ABCDE

【例題】細(xì)菌遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)存在于

A.染色體和質(zhì)粒中

B.質(zhì)粒和轉(zhuǎn)位因子中

C.染色體和轉(zhuǎn)位因子中

D.染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)位因子中

E.染色體、質(zhì)粒、溫和噬菌體和轉(zhuǎn)位因子[答疑編號(hào)502383040103]

【正確答案】D

【例題】介導(dǎo)細(xì)菌間接合的物質(zhì)是

A.鞭毛

B.菌毛

C.普通菌毛

D.性菌毛

E.核糖體[答疑編號(hào)502383040104]

【正確答案】D

本章小結(jié)：

一、細(xì)菌遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)

二、細(xì)菌的變異現(xiàn)象

三、細(xì)菌變異的機(jī)制（基因轉(zhuǎn)移與重組）

四、細(xì)菌遺傳變異的實(shí)際意義細(xì)菌的分類與命名●考點(diǎn)

微生物在生物化學(xué)分類中的地位

細(xì)菌的分類單位、系統(tǒng)和命名

細(xì)菌的分類方法

【內(nèi)容講解】

一、微生物在生物化學(xué)分類中的地位

（一）細(xì)菌與原核生物界

細(xì)菌、衣原體、立克次體、螺旋體、放線菌、支原體歸屬于原核生物界

其分類等級(jí)依次為界、門(mén)、綱、目、科、屬、種

（二）真菌與真菌界

真菌是真核細(xì)胞型微生物，歸屬真菌界

（三）病毒與病毒界

病毒沒(méi)有典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，歸屬于病毒界

病毒的分類等級(jí)依次為科、屬、種

二、細(xì)菌的分類單位、系統(tǒng)和命名

（一）細(xì)菌的分類單位

細(xì)菌的分類等級(jí)為界、門(mén)、綱、目、科、屬、種。

臨床細(xì)菌檢驗(yàn)常用的分類單位是科、屬、種。

種是細(xì)菌分類的基本單位。

形態(tài)學(xué)和生理學(xué)性狀相同的細(xì)菌群體構(gòu)成一個(gè)菌種；

性狀相近、關(guān)系密切的若干菌種組成屬；相近的屬歸為科，依次類推。

標(biāo)準(zhǔn)菌株：具有該種細(xì)菌典型特征的菌株

在細(xì)菌的分類、鑒定和命名時(shí)都以標(biāo)準(zhǔn)菌株為依據(jù)

標(biāo)準(zhǔn)菌株也可作為質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)

（二）細(xì)菌的命名

采用拉丁文雙命名法：

屬名（名詞大寫(xiě)）+種名（形容詞小寫(xiě)）（印刷用斜體）

例:Mycobacteriumtuberculosis

中文名:種名+屬名

例:結(jié)核分枝桿菌

（三）細(xì)菌的分類系統(tǒng)

目前國(guó)際上普遍采用伯杰分類系統(tǒng)。

也有采用CDC（美國(guó)疾病預(yù)防和控制中心）分類系統(tǒng)。

三、細(xì)菌的分類方法

（一）生理學(xué)與生物化學(xué)分類法

1.傳統(tǒng)分類法

原則：生物的基本性質(zhì)主次原則。

按細(xì)胞形態(tài)、革蘭染色性、鞭毛及代謝特點(diǎn)作為較高一級(jí)分類依據(jù)。

科、屬、種的分類主要依靠生化特性和抗原結(jié)構(gòu)。

2.數(shù)值分類法

原則：細(xì)菌的基本性質(zhì)同等重要原則

采用標(biāo)準(zhǔn)化、成品化和配套生化反應(yīng)試劑條，檢測(cè)細(xì)菌的數(shù)十個(gè)生理生化特性。

陰陽(yáng)性結(jié)果—數(shù)字—電子計(jì)算機(jī)進(jìn)行計(jì)算—比較、測(cè)定相似度—區(qū)分細(xì)菌的種群—確定細(xì)菌親緣關(guān)系

（二）遺傳學(xué)分類法

以細(xì)菌的核酸、蛋白質(zhì)等在組成上的同源程度分類。目前較為穩(wěn)定的遺傳學(xué)的分類方法有下列幾種：

1.DNAG+Cmol測(cè)定，簡(jiǎn)稱G-C比。

2.核酸同源值測(cè)定。

3.核糖體RNA堿基序列測(cè)定。

【例題】細(xì)菌分類的基本單位是

A綱

B目

C科

D屬

E種[答疑編號(hào)502383050101]

【正確答案】E

【例題】目前國(guó)際上普遍采用的分類系統(tǒng)是

A伯杰

BCDC

C傳統(tǒng)

D數(shù)值

E遺傳學(xué)[答疑編號(hào)502383050102]

【正確答案】A

【例題】臨床細(xì)菌檢驗(yàn)常用的分類單位是

A綱

B目

C科

D屬

E種[答疑編號(hào)502383050103]

【正確答案】CDE

本章小結(jié)：

一、臨床細(xì)菌檢驗(yàn)常用的分類單位是科、屬、種。種是細(xì)菌分類的基本單位。

二、細(xì)菌的分類單位、系統(tǒng)和命名

三、細(xì)菌的分類方法微生物檢驗(yàn)概述考點(diǎn)：

臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的目的與要求

標(biāo)本采集與運(yùn)送

微生物學(xué)檢查方法

臨床微生物實(shí)驗(yàn)室安全措施和質(zhì)量保證

【內(nèi)容講解】

一、臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的目的

1.為臨床感染性疾病的診斷提供病原學(xué)依據(jù)。

2.為臨床感染性疾病的治療提供參考用藥的信息。

3.為醫(yī)院感染提供病原微生物及其耐藥性動(dòng)態(tài)信息。

4.改進(jìn)或更新臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的方法。

二、臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的要求

1.快速、準(zhǔn)確地提出檢驗(yàn)報(bào)告。

2.檢驗(yàn)人員必須有較豐富的微生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)和熟練、正確的操作技能，必須養(yǎng)成有菌觀點(diǎn)和無(wú)菌操作的習(xí)慣。

3.臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)必須進(jìn)行全面質(zhì)量控制，并參加和接受質(zhì)量控制考核。

4.重視實(shí)驗(yàn)室消毒滅菌工作。

三、診斷試驗(yàn)的選擇原則

1.選擇有鑒定價(jià)值的試驗(yàn)

要對(duì)兩種細(xì)菌進(jìn)行鑒定，須選擇一項(xiàng)兩種菌呈現(xiàn)截然不同結(jié)果的試驗(yàn)，即一種菌呈現(xiàn)陽(yáng)性（陽(yáng)性反應(yīng)的菌株陽(yáng)性率須大于90%），另一種菌為陰性（陰性反應(yīng)的菌株陽(yáng)性率應(yīng)小于10%），這項(xiàng)試驗(yàn)才有鑒定價(jià)值。否則，就沒(méi)有鑒定價(jià)值。

2.選擇簡(jiǎn)易、快速、方便的試驗(yàn)

（1）鑒定一種細(xì)菌可能有多種特異的方法，沒(méi)有必要逐一進(jìn)行試驗(yàn)，只選擇其中一或兩種達(dá)到目的即可，多選無(wú)意義。如金黃色葡萄球菌凝固酶試驗(yàn)、耐熱DNA酶試驗(yàn)、甘露醇分解試驗(yàn)均陽(yáng)性，只選較簡(jiǎn)單的凝固酶試驗(yàn)就足夠了。

（2）選擇操作簡(jiǎn)便、快速的方法。

（3）選用復(fù)合培養(yǎng)基，一次操作可同時(shí)看幾個(gè)生化反應(yīng)，如克氏雙糖鐵（KIA），動(dòng)力靛基質(zhì)脲酶（MIU）等。

3.綜合考慮試驗(yàn)的敏感性和特異性

敏感性=所有陽(yáng)性結(jié)果數(shù)／所有感染病人數(shù)，試驗(yàn)敏感性越高，假陰性結(jié)果就越少。特異性=陰性結(jié)果總數(shù)／未感染病人數(shù)，特異性越高，假陽(yáng)性結(jié)果越少。試驗(yàn)的敏感性和特異性是相互聯(lián)系的，試驗(yàn)的敏感性增加，會(huì)使特異性下降，反之亦然。

四、標(biāo)本的采集和運(yùn)送

標(biāo)本質(zhì)量的好壞直接影響診斷結(jié)果的正誤，是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提。

（一）標(biāo)本采集的一般原則

1.早期采集：病程早期、急性期或癥狀典型時(shí)，而且必須在使用抗生素或其他抗菌藥物之前采集。

2.無(wú)菌采集：應(yīng)無(wú)外源性污染。

在采集無(wú)菌標(biāo)本時(shí)，應(yīng)注意對(duì)局部及周圍皮膚的消毒；對(duì)于與外界相通的腔道，應(yīng)由底部取活組織檢查；對(duì)于從正常菌群寄生部位（如口腔）采集的標(biāo)本,應(yīng)明確檢查的目的菌，在進(jìn)行分離培養(yǎng)時(shí)，采用特殊選擇性培養(yǎng)基。

3.根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集

4.采集適量標(biāo)本：采集量不應(yīng)過(guò)少，而且要有代表性，同時(shí)有些標(biāo)本還要注意在不同時(shí)間采集不同部位標(biāo)本。

5.安全采集：采集標(biāo)本時(shí)不僅要防止皮膚和黏膜正常菌群對(duì)標(biāo)本的污染。同時(shí)也要注意安全，防止傳播和自身感染。

（二）標(biāo)本的處理

一些對(duì)環(huán)境敏感的細(xì)菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并立即送檢，而其他所有的標(biāo)本采集后最好在2h之內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。若不能及時(shí)送檢，標(biāo)本應(yīng)置于一定環(huán)境中保存，如尸檢組織、支氣管洗液、心包液、痰、尿等標(biāo)本應(yīng)保存在4℃環(huán)境中。腦脊液、滑膜液等則要在25℃保存。一般情況下，用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本保存時(shí)間不應(yīng)超過(guò)24h。

病人標(biāo)本中可能含有大量致病菌，不管標(biāo)本運(yùn)送距離遠(yuǎn)近，都必須注意安全防護(hù)。標(biāo)本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必須包裝好，防止送檢過(guò)程中倒翻或碰破流出。對(duì)于烈性傳染病標(biāo)本運(yùn)送時(shí)更要特別嚴(yán)格，必須按規(guī)定包裝，由專人運(yùn)送。

厭氧性標(biāo)本應(yīng)放在專門(mén)的運(yùn)送瓶或試管內(nèi)運(yùn)送，有時(shí)可直接用抽取標(biāo)本的注射器運(yùn)送。

五、微生物學(xué)檢查

微生物學(xué)檢查方法方法鑒定類型速度直接鏡檢初步診斷5～10min免疫熒光（直接法）快速診斷1～2h乳膠凝集快速診斷15～30min對(duì)流免疫電泳快速診斷2h氣-液相色譜鑒定1.5～2hDNA探針快速診斷、鑒定1～3天PCR快速診斷數(shù)小時(shí)微量鑒定系統(tǒng)鑒定3～6h常規(guī)法確定診斷數(shù)天或以上

微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù):

1.形態(tài)學(xué)檢查

2.分離培養(yǎng)技術(shù)

3.生物化學(xué)試驗(yàn)

4.血清學(xué)試驗(yàn)

5.動(dòng)物試驗(yàn)

6.免疫檢測(cè)技術(shù)

7.發(fā)光分析技術(shù)

8.鱟試驗(yàn)（檢測(cè)內(nèi)毒素）

9.分子生物學(xué)技術(shù)

免疫檢測(cè)技術(shù):

微生物學(xué)中常用的免疫檢測(cè)技術(shù)包括

凝集反應(yīng)

沉淀反應(yīng)

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

免疫熒光技術(shù)

酶免疫測(cè)定

皮膚反應(yīng)

發(fā)光分析技術(shù):

依賴酶或化學(xué)反應(yīng)釋放能量引起發(fā)光物質(zhì)（如魯米諾、熒光素等）發(fā)光的檢測(cè)方法。

具有操作簡(jiǎn)便、快速、敏感度高、無(wú)污染特點(diǎn)。

根據(jù)發(fā)光原理，主要分為生物及化學(xué)發(fā)光兩種方法。

鱟試驗(yàn)（檢測(cè)內(nèi)毒素）:

基本原理是內(nèi)毒素在堿性金屬離子存在下激活鱟試劑中凝固酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂?，凝固酶使存在于鱟試劑中的凝固蛋白原生成凝固蛋白，產(chǎn)生凝膠。凝膠的形成速度及其堅(jiān)固程度與內(nèi)毒素濃度有關(guān)。鱟試驗(yàn)陽(yáng)性表明有革蘭染色陰性菌或內(nèi)毒素血癥,也可用于生物制品或注射液的內(nèi)毒素污染檢測(cè)。

分子生物學(xué)技術(shù)：

對(duì)生物體的基因組DNA片段及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析，進(jìn)而對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷?；蛟\斷技術(shù)可克服病原微生物的傳統(tǒng)檢測(cè)方法靈敏度低、特異性低及速度慢等不足之處，并可用于流行病學(xué)的大量現(xiàn)場(chǎng)篩查工作。

六、臨床微生物實(shí)驗(yàn)室安全措施和質(zhì)量保證

（一）實(shí)驗(yàn)室感染來(lái)源

1.在檢驗(yàn)操作過(guò)程中可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的微生物氣溶膠。

2.接觸感染材料或使之附著于衣服帶出室外以及其他偶然事故如菌液滴落于物體表面，注射時(shí)不慎刺破皮膚等。

（二）感染性廢棄物的處理

1.任何污染材料未經(jīng)消毒不能拿出實(shí)驗(yàn)室。

2.液體廢棄物必須收集在防漏、未破的容器內(nèi)，經(jīng)高濃度的化學(xué)消毒劑處理。

3.對(duì)剩余標(biāo)本、接種過(guò)的培養(yǎng)基、菌種等丟棄前均需適當(dāng)消毒。

4.動(dòng)物房的廢物在處理前及動(dòng)物籠被清洗前均需消毒，最好經(jīng)高壓蒸氣滅菌。

5.對(duì)于任何有污染的銳器如針頭、注射器、玻片等在處理前不要用手接觸。

（三）微生物實(shí)驗(yàn)室的室內(nèi)質(zhì)控

1.對(duì)細(xì)菌檢驗(yàn)人員的要求；

2.操作手冊(cè)；

3.儀器設(shè)備的功能監(jiān)測(cè)；

4.培養(yǎng)基的質(zhì)量控制；

5.試劑、染色液以及抗生素的質(zhì)量控制；

6.標(biāo)本檢驗(yàn)的質(zhì)量控制；

7.標(biāo)準(zhǔn)菌株的來(lái)源和保存及室內(nèi)質(zhì)量的全面控制。

標(biāo)本采集的一般原則有

A、早期采集

B、無(wú)菌采集

C、根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集

D、采集適量標(biāo)本

E、安全采集[答疑編號(hào)502383060101]

【正確答案】ABCDE

關(guān)于標(biāo)本處理的說(shuō)法錯(cuò)誤的是

A、標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢

B、痰、尿等標(biāo)本應(yīng)保存在4℃環(huán)境中

C、細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本保存時(shí)間可超過(guò)24h

D、厭氧性標(biāo)本可用抽取標(biāo)本的注射器送檢

E、腦脊液標(biāo)本要在25℃保存[答疑編號(hào)502383060102]

【正確答案】C

室內(nèi)質(zhì)量控制的內(nèi)容包括

A、實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)

B、常用儀器設(shè)備的檢測(cè)

C、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

D、試劑的質(zhì)量控制

E、全體技術(shù)人員的水平[答疑編號(hào)502383060103]

【正確答案】ABCDE細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查法●考點(diǎn)

顯微鏡的種類及應(yīng)用

不染色細(xì)菌標(biāo)本檢查法

細(xì)菌染色標(biāo)本檢查法

【內(nèi)容講解】

細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查：

不染色標(biāo)本檢查法

染色標(biāo)本檢查法

顯微鏡是觀察細(xì)菌形態(tài)所必備的基本工具。

形態(tài)學(xué)檢查（鏡檢）的意義：

可以迅速了解標(biāo)本中有無(wú)細(xì)菌及大致的菌量；

根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色性有助于對(duì)病原菌的初步識(shí)別和分類，為進(jìn)一步作生化反應(yīng)、血清學(xué)鑒定提供依據(jù)。

可得到初步診斷，對(duì)臨床早期診斷和治療疾病有一定的參考意義。

一、顯微鏡

普通光學(xué)顯微鏡

暗視野顯微鏡

相差顯微鏡

熒光顯微鏡

電子顯微鏡

普通光學(xué)顯微鏡

以自然光或燈光為光源，顯微鏡的最大分辨率為波長(zhǎng)的一半，即0.25μm。

暗視野顯微鏡

多用于檢查不染色的活細(xì)菌和螺旋體的形態(tài)及運(yùn)動(dòng)觀察。

相差顯微鏡

利用相差板的光柵作用，將光相的差異轉(zhuǎn)換成光的強(qiáng)度的差異，使細(xì)菌中的某部分結(jié)構(gòu)比其他部分深暗，襯托出鮮明的對(duì)比。

本法主要用于檢查不染色活細(xì)菌的形態(tài)及某些內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

熒光顯微鏡

以高壓汞燈產(chǎn)生的紫外光或藍(lán)紫光為光源細(xì)菌經(jīng)熒光素染色后，置于熒光顯微鏡下，即可激發(fā)熒光，在暗色的背景下可以看到發(fā)射熒光的細(xì)菌。

用于細(xì)菌、病毒等的診斷或鑒別。

電子顯微鏡

以電子流代替光源

能分辨1nm的物體，細(xì)菌的表面形態(tài)和內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)均能清楚地顯現(xiàn)。

掃描電子顯微鏡：適于對(duì)細(xì)菌表面結(jié)構(gòu)及附件的觀察。

透射電子顯微鏡：適于觀察細(xì)菌內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)。

二、不染色細(xì)菌標(biāo)本的檢查

主要用于檢查生活狀態(tài)下細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況。

壓滴法

懸滴法

毛細(xì)管法：厭氧菌動(dòng)力觀察

動(dòng)力判斷：細(xì)菌如有動(dòng)力，有明顯的方向性位移；

細(xì)菌如無(wú)動(dòng)力，受水分子撞擊細(xì)菌呈現(xiàn)布朗運(yùn)動(dòng)，只在原地顫動(dòng)而無(wú)位置的改變。

三、細(xì)菌染色標(biāo)本的檢查

在普通光學(xué)顯微鏡下可以觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列、染色性、特殊結(jié)構(gòu)（芽胞、莢膜、鞭毛）、異染顆粒等。

常用染料：

①堿性染料（basicdye）—帶正電染料。其陽(yáng)離子部分為發(fā)色基團(tuán)，可與細(xì)胞中帶負(fù)電的組分結(jié)合。

如堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、美藍(lán)等。

②酸性染料（Aciddye）—帶負(fù)電染料。其陰離子部分為發(fā)色基團(tuán)，可與細(xì)胞中帶正電的組分結(jié)合。

如伊紅、剛果紅等。

③復(fù)合染料—堿性染料和酸性染料的復(fù)合物。

如瑞氏染料（伊紅美藍(lán)）、姬姆薩染料（伊紅天青）等。

細(xì)菌染色法

細(xì)菌染色的基本程序：

涂片→干燥→固定→染色（初染→媒染→脫色→復(fù)染）

單染色法

用一種染料將細(xì)菌和周圍物體染成同一種顏色。細(xì)菌經(jīng)單染色法處理后，可觀察其形態(tài)、排列、大小及簡(jiǎn)單的結(jié)構(gòu)，但不能顯示各種細(xì)菌染色性的差異。

復(fù)染色法

用兩種或兩種以上染料染色的方法，稱為復(fù)染色法或鑒別染色法。

常用的有革蘭染色法和抗酸染色法。

革蘭染色法（GramStain）

由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立。是細(xì)菌學(xué)中最經(jīng)典、最常用的染色方法。

方法：

結(jié)晶紫——碘液——95%酒精——稀釋石炭酸復(fù)紅

革蘭染色法（GramStain）

臨床意義：

鑒別細(xì)菌：將所有細(xì)菌分為G+菌和G-菌兩大類，可初步識(shí)別細(xì)菌，縮小范圍，有助于進(jìn)一步鑒定。

選擇藥物參考

與細(xì)菌致病性有關(guān)：大多G+菌的致病物質(zhì)是外毒素，而G-菌大多能產(chǎn)生內(nèi)毒素，兩種致病作用不同。

抗酸染色

將細(xì)菌分為兩大類：即抗酸性細(xì)菌和非抗酸性細(xì)菌。

臨床上主要用于結(jié)核病、麻風(fēng)病等的細(xì)菌檢查。

疑似結(jié)核分枝桿菌感染的標(biāo)本，經(jīng)抗酸染色后，若查見(jiàn)紅色抗酸桿菌，可報(bào)告為“找到抗酸分枝桿菌”，即可作出初步鑒定。對(duì)臨床疾病的診斷和治療具有重要參考價(jià)值。

【例題】用于觀察細(xì)菌超微結(jié)構(gòu)的顯微鏡是

A、普通光學(xué)顯微鏡

B、暗視野顯微鏡

C、相差顯微鏡

D、熒光顯微鏡

E、電子顯微鏡[答疑編號(hào)502383070101]

【正確答案】E

【例題】不屬于細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察的是

A、平板分區(qū)劃線觀察單個(gè)菌落

B、革蘭染色觀察細(xì)菌染色性

C、鞭毛染色觀察細(xì)菌的動(dòng)力

D、光鏡觀察細(xì)菌形態(tài)

E、暗視野顯微鏡觀察細(xì)菌動(dòng)力[答疑編號(hào)502383070102]

【正確答案】A

【例題】不染色標(biāo)本在普通光學(xué)顯微鏡下主要用于檢查細(xì)菌的

A、形態(tài)

B、動(dòng)力

C、結(jié)構(gòu)

D、大小

E、排列方式[答疑編號(hào)502383070103]

【正確答案】B

【例題】不染色標(biāo)本在普通光學(xué)顯微鏡下主要用于檢查細(xì)菌的動(dòng)力。常用方法有

A、玻片法

B、試管法

C、壓滴法

D、劃線法

E、懸滴法[答疑編號(hào)502383070104]

【正確答案】CE

【例題】結(jié)核分枝桿菌常用的染色法是

A、姬姆薩染色法

B、抗酸染色

C、革蘭染色

D、鍍銀染色法

E、墨汁染色法[答疑編號(hào)502383070105]

【正確答案】B

【例題】革蘭染色所用染液的順序是

A、稀釋復(fù)紅→碘液→酒精→結(jié)晶紫

B、結(jié)晶紫→酒精→碘液→稀釋復(fù)紅

C、稀釋復(fù)紅→結(jié)晶紫→碘液→酒精

D、結(jié)晶紫→碘液→酒精→稀釋復(fù)紅

E、稀釋復(fù)紅→酒精→結(jié)晶紫→碘液[答疑編號(hào)502383070106]

【正確答案】D

本章小結(jié)：

一、顯微鏡的種類及用途

二、不染色標(biāo)本的檢查

三、染色標(biāo)本的檢查——革蘭染色法和抗酸染色法培養(yǎng)基●考點(diǎn)

▽培養(yǎng)基的組成成分

▽培養(yǎng)基的種類

▽分離培養(yǎng)基的選擇

【內(nèi)容講解】

培養(yǎng)基：

由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)物制品。

用途：用于細(xì)菌的分離純化培養(yǎng)、傳代、菌種保存，還可用于研究細(xì)菌的生理、生化特性，是對(duì)病原菌分離鑒定的重要環(huán)節(jié)和必不可少的手段。

一、培養(yǎng)基的組成成分

（一）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

（二）凝固物質(zhì)

（三）抑制劑和指示劑

（一）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

細(xì)菌需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)含有

——水、氮源、碳源、無(wú)機(jī)鹽類和生長(zhǎng)因子。

1.蛋白胨：

蛋白胨是制備培養(yǎng)基時(shí)最常用的成分之一，提供細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的氮源。

種類：植物胨和動(dòng)物胨。營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)。

優(yōu)點(diǎn)：蛋白胨易溶于水，遇酸不沉淀，不因受高溫而凝固，并為兩性電解質(zhì)，有緩沖作用。

缺點(diǎn)：吸水性強(qiáng)，應(yīng)注意干燥密封保存。

2.肉浸液：

是用新鮮牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。

肉浸液可為細(xì)菌提供氮源和碳源，但肉浸液中所含氮物質(zhì)過(guò)少而不能滿足細(xì)菌的需要，因此在制備培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)再加入l%～2%的蛋白胨和0.5%氯化鈉。

3.牛肉膏：

由肉浸液經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間加熱濃縮而制成。

糖類在加熱過(guò)程中被破壞，所以其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值低于肉浸液，但因無(wú)糖可用作腸道桿菌鑒別培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。

4.糖類、醇類：

為細(xì)菌生長(zhǎng)提供碳源和能源。

除葡萄糖、蔗糖主要作為碳源和能源的基本成分外，其他糖類和醇類主要用于鑒定細(xì)菌所做的發(fā)酵反應(yīng)。

5.血液：

血液中既含有蛋白質(zhì)、多種氨基酸、糖類、無(wú)機(jī)鹽類等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，又能提供輔酶（如V因子）、血紅素（X因子）等特殊生長(zhǎng)因子。

用途：加入血液用于培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌。

根據(jù)細(xì)菌在血液培養(yǎng)基中的溶血現(xiàn)象而進(jìn)行鑒定。

6.無(wú)機(jī)鹽類：

提供細(xì)菌生長(zhǎng)的各種元素，如：鉀、鈉、鐵、鎂、鈣、磷、硫等。

7.雞蛋和動(dòng)物血清：

是某些細(xì)菌生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以僅用于制備一些特殊的培養(yǎng)基。

8.生長(zhǎng)因子：是細(xì)菌生長(zhǎng)所必需的，但需要量很小。

（二）凝固物質(zhì)

最常用的凝固物質(zhì)為瓊脂，特殊情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。

瓊脂是從石花菜中提取出來(lái)的一種半乳糖膠，具有98℃以上融化，45℃以下凝固成凝膠狀態(tài)的特性。

（三）抑制劑和指示劑

目的：進(jìn)行選擇、鑒定及判斷結(jié)果的需要。

1.抑制劑

目的在于抑制非檢出菌（非病原菌）的生長(zhǎng)，以利于檢出菌（病原菌）的生長(zhǎng)。

常用的有膽鹽、煌綠、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉及一些染料和某些抗生素等。

2.指示劑：

目的是為了便于觀察細(xì)菌是否利用和分解培養(yǎng)基中的糖、醇類。

常用的有酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、中國(guó)藍(lán)等酸堿指示劑。美藍(lán)常用作氧化還原指示劑。

二、培養(yǎng)基種類

（一）按培養(yǎng)基的用途分類

（二）按培養(yǎng)基的性狀分類

（一）按培養(yǎng)基的用途分類培養(yǎng)基種類作用舉例基礎(chǔ)培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的增菌、檢驗(yàn)，也是制備其他培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。普通肉湯，普通瓊脂平板營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基供營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌和需要特殊生長(zhǎng)因子的細(xì)菌生長(zhǎng)血瓊脂平板、巧克力血平板鑒別培養(yǎng)基利用細(xì)菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，通過(guò)指示劑的反應(yīng)不同來(lái)鑒別細(xì)菌。糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-美藍(lán)瓊脂和動(dòng)力-吲哚-尿素（MIU）培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入抑制劑，去抑制標(biāo)本中的雜菌生長(zhǎng)，有助于對(duì)所選擇的細(xì)菌種類的生長(zhǎng)。培養(yǎng)腸道致病菌的SS瓊脂厭氧培養(yǎng)基培養(yǎng)專性厭氧菌的培養(yǎng)基皰肉培養(yǎng)基、琉基乙醇酸鈉培養(yǎng)基細(xì)菌L型培養(yǎng)基針對(duì)細(xì)胞壁缺損的細(xì)菌L型采用高滲低瓊脂培養(yǎng)基（二）按培養(yǎng)基的性狀分類培養(yǎng)基種類作用舉例液體培養(yǎng)基常用于增菌培養(yǎng)，也用于接種純菌觀察其生長(zhǎng)表現(xiàn)肉湯培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基多用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力，保存菌種液體培養(yǎng)基中加入0.3～0.5%瓊脂固體培養(yǎng)基用于微生物的分離純化、鑒定及藥敏試驗(yàn)液體培養(yǎng)基中加入1.5～2.0%瓊脂

三、分離培養(yǎng)基的選擇

（一）血平板

適于各類細(xì)菌的生長(zhǎng)。

（二）巧克力血平板

其中含有V和X因子，適于接種疑有嗜血桿菌、奈瑟菌等的標(biāo)本。

（三）中國(guó)藍(lán)平板或伊紅美藍(lán)平板

可抑制革蘭陽(yáng)性細(xì)菌，有選擇地促進(jìn)革蘭陰性細(xì)菌生長(zhǎng)，是較好的弱選擇性培養(yǎng)基。

發(fā)酵型革蘭陰性桿菌因分解乳糖能力不同，在此平板上菌落顏色不同，便于鑒別菌種。

（四）麥康凱平板

具中等強(qiáng)度選擇性，抑菌力略強(qiáng)，有少數(shù)革蘭陰性菌不生長(zhǎng)。

在麥康凱平板上能否生長(zhǎng)，是非發(fā)酵菌鑒定的一個(gè)依據(jù)。

（五）SS瓊脂

有較強(qiáng)的抑菌力，用于志賀菌和沙門(mén)菌的分離。

因選擇性過(guò)強(qiáng)，使用時(shí)最好加一種弱選擇平板以配對(duì)互補(bǔ)。

（六）堿性瓊脂或TCBS瓊脂

用于從糞便中分離霍亂弧菌及其他弧菌。

（七）血液增菌培養(yǎng)基

用于從血液、骨髓中分離常見(jiàn)病原菌。

（八）營(yíng)養(yǎng)肉湯

用于標(biāo)本及各類細(xì)菌的增菌。

【例題】液體培養(yǎng)基主要用于

A.鑒別菌種

B.觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能力

C.觀察細(xì)菌的菌落形態(tài)

D.增菌

E.抑制雜菌生長(zhǎng)[答疑編號(hào)502383080101]

【正確答案】D

【例題】下列培養(yǎng)基與其分類的組合中不正確的是

A.蛋白胨水－基礎(chǔ)培養(yǎng)基

B.克氏雙糖鐵瓊脂－鑒別培養(yǎng)基

C.膽鹽肉湯管－營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基

D.SS培養(yǎng)基－選擇培養(yǎng)基

E.高滲培養(yǎng)基－特殊培養(yǎng)基[答疑編號(hào)502383080102]

【正確答案】C

【例題】用于培養(yǎng)腸道致病菌的強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基是

A.中國(guó)籃平板

B.SS平板

C.雙糖鐵培養(yǎng)基

D.乳糖發(fā)酵管

E.巧克力平板[答疑編號(hào)502383080103]

【正確答案】B

【例題】有關(guān)血瓊脂平板，敘述錯(cuò)誤的是

A.常用血液為羊血

B.血液滅菌后才能加入培養(yǎng)基中

C.血液含量一般為10%左右

D.瓊脂含量為2%～3%

E.屬于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基[答疑編號(hào)502383080104]

【正確答案】B

【例題】從有正常菌群存在的部位所采取的標(biāo)本應(yīng)接種在哪種培養(yǎng)基中分離培養(yǎng)病原菌

A.基礎(chǔ)培養(yǎng)基

B.營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基

C.增菌培養(yǎng)基

D.選擇鑒別培養(yǎng)基

E.特殊培養(yǎng)基[答疑編號(hào)502383080105]

【正確答案】D

本章小結(jié)：

一、培養(yǎng)基的成分

二、培養(yǎng)基的種類及應(yīng)用

三、分離培養(yǎng)基的選擇細(xì)菌的培養(yǎng)與分離技術(shù)●考點(diǎn)

▽基本條件

▽細(xì)菌的接種與分離技術(shù)

▽細(xì)菌培養(yǎng)的方法

▽細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象

▽細(xì)菌L型的檢查

【內(nèi)容講解】

細(xì)菌培養(yǎng)是將細(xì)菌接種到培養(yǎng)基內(nèi)，并在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境內(nèi)，使細(xì)菌生長(zhǎng)和繁殖。

分離培養(yǎng)是指從標(biāo)本中培養(yǎng)出細(xì)菌或者從混有多種細(xì)菌的標(biāo)本中將各個(gè)菌種分別同時(shí)培養(yǎng)出來(lái)。

一、基本條件

（一）細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室

（二）無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室

（三）基本設(shè)備和器具

（一）細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室

標(biāo)本接種、培養(yǎng)、分離、鑒定及藥敏試驗(yàn)等工作都要在此完成。

1.細(xì)菌室必須安裝嚴(yán)密的門(mén)窗，以防室內(nèi)環(huán)境受到外界的污染。且室內(nèi)禁用風(fēng)扇，避免細(xì)菌的播散。

2.細(xì)菌室必須安裝供空氣消毒的紫外線燈，置于操作臺(tái)上面lm處，每天開(kāi)始工作前照射20min。對(duì)其消毒效果要定期檢查，及時(shí)更換失效的燈管。

3.室內(nèi)應(yīng)備有消毒劑，用于試驗(yàn)中發(fā)生菌液灑濺時(shí)的及時(shí)消毒處理。同時(shí)還應(yīng)備有供工作人員浸手用的盛有消毒劑的水盆、肥皂及自來(lái)水源等。

4.室內(nèi)操作臺(tái)須每日用消毒劑擦洗，地面至少一周用消毒劑擦洗l次。

5.對(duì)接收的標(biāo)本、無(wú)菌器具、用過(guò)的物品等應(yīng)明顯分開(kāi)并放在指定位置。同時(shí)要對(duì)用過(guò)的物品及時(shí)進(jìn)行滅菌處理。

6.細(xì)菌室根據(jù)當(dāng)?shù)氐臍鉁靥攸c(diǎn)，安裝空調(diào)機(jī)，以適合細(xì)菌實(shí)驗(yàn)工作。同時(shí)室內(nèi)應(yīng)設(shè)置必要的消防設(shè)備。

（二）無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室

無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室是細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用于無(wú)菌操作的小室，其內(nèi)部裝飾、消毒條件要求更嚴(yán)格。

1.無(wú)菌室應(yīng)完全封閉，人員出入應(yīng)有兩道門(mén)，其間應(yīng)隔有緩沖區(qū)。

2.用前應(yīng)以紫外線消毒30min，定期用乳酸或甲醛熏蒸，徹底消毒。

3.在無(wú)菌室中一般僅限于分裝無(wú)菌的培養(yǎng)基及傳染性強(qiáng)的細(xì)菌的接種，不進(jìn)行有菌標(biāo)本的分離及其他操作。

4.無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)僅限操作人員進(jìn)入，而且進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)著隔離衣和專用鞋，操作時(shí)戴口罩，隨時(shí)保證室內(nèi)的無(wú)菌狀態(tài)。

5.條件有限的實(shí)驗(yàn)室，可用超凈工作臺(tái)代替無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相應(yīng)的操作。超凈工作臺(tái)應(yīng)選擇垂直氣流通風(fēng)方式。

6.無(wú)菌室應(yīng)配備空調(diào)設(shè)備，保證不因室溫而影響工作。

（三）基本設(shè)備和器具

溫箱、C02培養(yǎng)箱、厭氧培養(yǎng)設(shè)備；

顯微鏡；

高壓蒸氣滅菌器、干烤箱；

冰箱和冷藏柜；

接種器具，包括接種環(huán)和接種針；

pH計(jì)；火焰燈或酒精燈；平皿、試管、吸管等玻璃器皿，以及離心機(jī)、天平等。

二、細(xì)菌的接種與分離技術(shù)

選擇好合適的培養(yǎng)基，根據(jù)待檢標(biāo)本的來(lái)源、培養(yǎng)目的及所使用培養(yǎng)基的性狀，采用不同的接種方法。接種分離法用途平板劃線分離法連續(xù)劃線分離法主要用于雜菌不多的標(biāo)本。分區(qū)劃線分離法適用于雜菌量較多的標(biāo)本。斜面接種法要用于單個(gè)菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。液體接種法（避免氣溶膠的產(chǎn)生）多用于一些液體生化試驗(yàn)管的接種。穿刺接種法此法主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖管的接種。傾注平板法測(cè)定牛乳、飲水和尿液等標(biāo)本細(xì)菌數(shù)時(shí)常用此方法。涂布接種法常用于紙片法藥物敏感性測(cè)定，也可用于被檢標(biāo)本中的細(xì)菌計(jì)數(shù)。

三、細(xì)菌培養(yǎng)的方法

（一）需氧培養(yǎng)法

（二）二氧化碳培養(yǎng)法

（三）厭氧培養(yǎng)法

（一）需氧培養(yǎng)法

臨床細(xì)菌室最常用的培養(yǎng)方法，適于一般需氧和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。

置于35℃溫箱中孵育18～24h。

（二）二氧化碳培養(yǎng)法

有些細(xì)菌初次分離培養(yǎng)時(shí)須置5%～l0%C02環(huán)境才能生長(zhǎng)良好。

1.二氧化碳培養(yǎng)箱：是一臺(tái)特制的培養(yǎng)箱，既能調(diào)節(jié)CO2的含量，又能調(diào)節(jié)所需的溫度。CO2從鋼瓶通過(guò)培養(yǎng)箱的CO2運(yùn)送管進(jìn)入培養(yǎng)箱內(nèi)，調(diào)節(jié)好所需CO2濃度自動(dòng)控制器后，將接種好的培養(yǎng)基直接放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。適于大型實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。

2.燭缸法：將已接種好的培養(yǎng)基置干燥器內(nèi)，并放入點(diǎn)燃的蠟燭。干燥器蓋的邊緣涂上凡士林，蓋上蓋子，燭光經(jīng)幾分鐘后自行熄滅，此時(shí)干燥器內(nèi)CO2含量約占5%～10%，然后將干燥器放入35℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間一般為18～24h，少數(shù)菌種需培養(yǎng)3～7d或更長(zhǎng)。

3.化學(xué)法：按每升容積加入碳酸氫鈉0.4g和濃鹽酸0.35ml的比例，分別置于容器內(nèi)。

（三）厭氧培養(yǎng)法

適用于專性厭氧菌和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。

常用的厭氧培養(yǎng)法有：

①皰肉培養(yǎng)基法；②焦性沒(méi)食子酸法；③厭氧罐法；④氣袋法；⑤厭氧手套箱法。

四、細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象

（一）細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象

（二）細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象

（三）細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象

（一）細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象

1.觀察菌落

2.血瓊脂上的溶血

3.氣味

4.色素

1.觀察菌落

菌落特征包括大小、形狀、突起、邊緣、顏色、表面、透明度和粘度等。

根據(jù)細(xì)菌菌落表面特征不同，可將菌落分為三型：

（1）光滑型（S型）菌落

（2）粗糙型（R型）菌落

（3）粘液型（M型）菌落

2.血瓊脂上的溶血

α溶血：又叫草綠色溶血，菌落周圍血培養(yǎng)基變?yōu)榫G色環(huán)狀。

β溶血：又稱完全溶血，菌落周圍形成一個(gè)完全清晰透明的環(huán)。

γ溶血：即不溶血，菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化；紅細(xì)胞沒(méi)有溶解或無(wú)缺損。

雙環(huán)：上層溶血環(huán)，內(nèi)層為β溶血，外層為α溶血。如產(chǎn)氣莢膜梭菌。

3.氣味

通過(guò)某些細(xì)菌在平皿培養(yǎng)基上代謝活動(dòng)產(chǎn)生的氣味，有助于細(xì)菌的鑒定。

如銅綠假單胞菌（生姜?dú)馕叮⒆冃螚U菌（巧克力燒焦氣味）、厭氧梭菌（腐敗的惡臭味）、放線菌（泥土味）等。

（二）細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象

渾濁生長(zhǎng)：大多數(shù)細(xì)菌。

沉淀生長(zhǎng)：少數(shù)鏈狀排列的細(xì)菌如鏈球菌、炭疽芽胞桿菌。

菌膜生長(zhǎng)（表面生長(zhǎng)）：專性需氧菌如枯草芽胞桿菌、結(jié)核分枝桿菌和銅綠假單胞菌。

（三）細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象

半固體培養(yǎng)基用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力。

▽有鞭毛的細(xì)菌除了在穿刺接種的穿刺線上生長(zhǎng)外，在穿刺線的兩側(cè)均可見(jiàn)羽毛狀或云霧狀渾濁生長(zhǎng)，為動(dòng)力陽(yáng)性。

▽無(wú)鞭毛的細(xì)菌只沿穿刺線呈明顯的線狀生長(zhǎng)，為動(dòng)力試驗(yàn)陰性。

五、細(xì)菌L型的檢查

表現(xiàn)為形態(tài)多形性、染色不確定性、可濾過(guò)性、滲透壓敏感性，生化反應(yīng)減弱特性以及對(duì)β-內(nèi)酰胺類和其他作用細(xì)胞壁抗生素的抵抗性。

1.標(biāo)本采集

應(yīng)盡量采集無(wú)雜菌污染的組織或體液標(biāo)本。

胸水、腹水及尿液標(biāo)本，應(yīng)加20%蔗糖無(wú)菌溶液，以保持高滲；血液標(biāo)本應(yīng)接種高滲肉湯增菌培養(yǎng)。

2.培養(yǎng)方法

（1）L型檢查程序：

將標(biāo)本接種到高滲肉湯增菌培養(yǎng)1～7天，然后轉(zhuǎn)種L型平板和血平板37℃培養(yǎng)2～7天。

典型菌落為“荷包蛋”樣，但從患者標(biāo)本中新分離的L型菌落常不典型，多呈顆粒型菌落，涂片染色為多形性。

（2）檢驗(yàn)報(bào)告：

①血平板無(wú)菌生長(zhǎng)，L型平板有菌落生長(zhǎng)，可報(bào)告檢出細(xì)菌L型；

②血平板中菌落細(xì)小，不易刮下。涂片檢查細(xì)菌呈多形性，細(xì)胞壁缺損，L型平板中有L型菌落，報(bào)告檢出L型；

③血平板及L型平板均有菌落生長(zhǎng)。涂片有原菌及L型兩種形態(tài)特征，可報(bào)告細(xì)菌型及L型同時(shí)存在，并分別作藥敏試驗(yàn)以供臨床用藥參考。

【例題】單個(gè)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)可形成

A.菌絲

B.菌落

C.菌團(tuán)

D.菌苔

E.菌膜[答疑編號(hào)502383090101]

【正確答案】B

【例題】尿液標(biāo)本作L型菌培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中加入20%蔗糖的原因是

A.提供高營(yíng)養(yǎng)

B.使尿中蛋白質(zhì)變性

C.稀釋尿液

D.保持高滲環(huán)境

E.中和尿液的酸度[答疑編號(hào)502383090102]

【正確答案】D

【例題】多用于含細(xì)菌量較多的標(biāo)本的接種方法是

A.分區(qū)劃線分離法

B.瓊脂斜面培養(yǎng)基接種法

C.半固體培養(yǎng)基接種法

D.液體培養(yǎng)基接種法

E.傾注平板法[答疑編號(hào)502383090103]

【正確答案】A

【例題】關(guān)于平板劃線分離培養(yǎng)法，敘述錯(cuò)誤的是

A.適用于臨床標(biāo)本的分離培養(yǎng)

B.目的是使標(biāo)本中的細(xì)菌各自形成單一菌落

C.常用劃線方式為平板分區(qū)劃線

D.接種細(xì)菌越多越好

E.接種時(shí)斜持平板（45°）[答疑編號(hào)502383090104]

【正確答案】D

【例題】下列細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室一般注意事項(xiàng)，錯(cuò)誤的是

A.穿著專用白大衣、帽

B.操作中不應(yīng)談話

C.養(yǎng)成在室內(nèi)手不觸及口、面、發(fā)的習(xí)慣

D.除接電話等緊急情況下，離室前必須消毒液洗手

E.室內(nèi)不準(zhǔn)跑動(dòng)，以免引起風(fēng)動(dòng)[答疑編號(hào)502383090105]

【正確答案】D

【例題】下列方法與檢查細(xì)菌動(dòng)力無(wú)關(guān)的是

A.壓滴法

B.鞭毛染色

C.半固體穿刺

D.革蘭染色

E.懸滴標(biāo)本鏡檢[答疑編號(hào)502383090106]

【正確答案】D

本章小結(jié)：

一、細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本條件

二、細(xì)菌的接種與分離技術(shù)

三、細(xì)菌培養(yǎng)的方法

四、細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象

五、細(xì)菌L型的檢查細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)●考點(diǎn)

碳水化合物的代謝試驗(yàn)

蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)

碳源和氮源利用試驗(yàn)

各種酶類試驗(yàn)

抑菌試驗(yàn)

復(fù)合生化試驗(yàn)

【內(nèi)容講解】

不同細(xì)菌具有各自獨(dú)特的酶系統(tǒng)，因而對(duì)底物的分解能力各異，其代謝的產(chǎn)物也不相同。這些代謝產(chǎn)物又各具有不同的生物化學(xué)特性，為此，可利用生物化學(xué)的方法測(cè)定這些代謝產(chǎn)物以鑒定細(xì)菌。

一、碳水化合物的代謝試驗(yàn)

原理：

由于細(xì)菌各自具有不同的酶系統(tǒng)，對(duì)糖的分解能力不同，有的能分解某些糖產(chǎn)生酸和氣體，有的雖能分解糖產(chǎn)生酸，但不產(chǎn)生氣體，有的則不分解糖。據(jù)此可對(duì)分解產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)從而鑒別細(xì)菌。

1.糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)

原理：由于各種細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖（醇、苷）類的酶，故分解糖類的能力不同，分解糖類后的終末產(chǎn)物亦不一致，有的產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，有的僅產(chǎn)酸，故可利用此特點(diǎn)以鑒別細(xì)菌。

培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入0.5%～1%的糖類（單糖、雙糖或多糖）、醇類（甘露醇、肌醇等）、苷類（水楊苷等）。

方法：接種，培養(yǎng)。

結(jié)果：

產(chǎn)酸：培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應(yīng)。

產(chǎn)氣：可使液體培養(yǎng)基中倒管內(nèi)或半固體培養(yǎng)基內(nèi)出現(xiàn)氣泡，固體培養(yǎng)基內(nèi)有裂隙等現(xiàn)象。

不分解：培養(yǎng)基中除有細(xì)菌生長(zhǎng)外，無(wú)任何其他變化。

應(yīng)用：是鑒定細(xì)菌最主要和最基本的試驗(yàn)，特別對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的鑒定尤為重要。

2.氧化-發(fā)酵試驗(yàn)（0/F試驗(yàn)）

原理：

氧化型：僅在有氧環(huán)境中分解葡萄糖

發(fā)酵型：在有氧或無(wú)氧環(huán)境中都能分解葡萄糖

產(chǎn)堿型：在有氧或無(wú)氧環(huán)境中都不能分解葡萄糖

培養(yǎng)基：HL（Hugh-Leifson）培養(yǎng)基

方法：將待檢菌同時(shí)穿刺接種兩支HL培養(yǎng)基，其中一支培養(yǎng)基滴加無(wú)菌的液體石蠟（或其他礦物油），高度不少于1cm。將培養(yǎng)基于35℃培養(yǎng)48h或更長(zhǎng)。

結(jié)果：開(kāi)管封閉管產(chǎn)堿型--氧化型+-發(fā)酵型++

3.β-半乳糖苷酶試驗(yàn)（ONPG試驗(yàn)）

原理：

鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）β-半乳糖苷酶鄰-硝基酚

（黃色）

試劑：0.75MONPG溶液

方法：從克氏雙糖鐵培養(yǎng)基上取菌，于0.25ml無(wú)菌生理鹽水中制成菌懸液，加入一滴甲苯并充分振搖，使酶釋放。將試管置37℃水浴5min，加入0.25mlONPG試劑，水浴20min～3h觀察結(jié)果。

結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽(yáng)性反應(yīng)，一般在20～30min內(nèi)顯色。

應(yīng)用：

迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽(yáng)性，而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性。

本實(shí)驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。

4.七葉苷水解試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：七葉苷培養(yǎng)基、膽汁七葉苷培養(yǎng)基。

方法：將待檢菌接種于七葉苷培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后觀察結(jié)果。

結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)楹谏珵殛?yáng)性，不變色者為陰性。

應(yīng)用：主要用于D群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別。

5.甲基紅試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基

方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2～4d，于培養(yǎng)基內(nèi)加入甲基紅試劑，立即觀察結(jié)果。

結(jié)果：呈現(xiàn)紅色為陽(yáng)性；橘紅色為弱陽(yáng)性；黃色為陰性。

應(yīng)用：

腸桿菌科：沙門(mén)菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬（+）

腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬（-）。

6.V-P試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基

方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，于35℃培養(yǎng)48h后加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）和乙液（40%KOH溶液），振搖。

結(jié)果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性；如無(wú)紅色出現(xiàn)且于35℃4h后仍如故者即為陰性。

應(yīng)用：本試驗(yàn)常與甲基紅試驗(yàn)一起使用，因?yàn)榍罢哧?yáng)性的細(xì)菌，后者通常為陰性。

二、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)

原理：不同種類的細(xì)菌分解蛋白質(zhì)的能力不同。細(xì)菌對(duì)蛋白質(zhì)的分解，一般先由胞外酶將復(fù)雜的蛋白質(zhì)分解為短肽（或氨基酸），滲入菌體內(nèi)，然后再由胞內(nèi)酶將肽類分解為氨基酸。

1.明膠液化試驗(yàn)

原理：

方法：將被檢菌穿刺接種于明膠培養(yǎng)基，于22℃培養(yǎng)7d，逐日觀察結(jié)果。若用35℃孵育，因明膠在此溫度下自行液化，故在觀察結(jié)果前，先置4℃冰箱內(nèi)30min，再看結(jié)果。

結(jié)果：培養(yǎng)基呈液化狀態(tài)為陽(yáng)性

應(yīng)用：

腸桿菌科細(xì)菌的鑒別：沙雷菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝桿菌等可液化明膠，而其他細(xì)菌很少液化明膠。

厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。

多數(shù)假單胞菌也能液化明膠。

2.吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基

方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，于35℃培養(yǎng)24～48h，沿試管壁慢慢加入吲哚試劑。

結(jié)果：于兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性，無(wú)色為陰性。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。

3.硫化氫試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：醋酸鉛培養(yǎng)基

方法：將待檢菌穿刺接種于醋酸鉛培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)24～48h觀察結(jié)果。

結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。如沙門(mén)菌屬、愛(ài)德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬細(xì)菌，絕大多數(shù)硫化氫陽(yáng)性，其他菌屬陰性。沙門(mén)菌屬中也有硫化氫陰性菌種。

4.尿素分解試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基

方法：將待檢菌接種于尿素培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。

結(jié)果：培養(yǎng)基呈堿性，使酚紅指示劑變紅為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細(xì)菌的鑒定。奇異變形桿菌和普通變形桿菌脲酶陽(yáng)性。另外雷氏普羅威登菌和摩根菌為陽(yáng)性，而斯氏和產(chǎn)堿普羅威登菌陰性。

5.苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基

方法：將被檢菌濃厚接種于苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于35℃培養(yǎng)18～24h，滴加10%三氯化鐵試劑3～4滴，自斜面上方流下。

結(jié)果：應(yīng)立即觀察結(jié)果，出現(xiàn)綠色為陽(yáng)性。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。

6.氨基酸脫羧酶試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：氨基酸脫羧酶培養(yǎng)基和氨基酸對(duì)照培養(yǎng)基

方法：將被檢菌分別接種于賴氨酸（或鳥(niǎo)氨酸或精氨酸）培養(yǎng)基和氨基酸對(duì)照培養(yǎng)基中，并加入無(wú)菌液體石蠟或礦物油，于35℃培養(yǎng)1～4d，每日觀察結(jié)果。

結(jié)果：對(duì)照管應(yīng)呈黃色，測(cè)定管呈紫色（指示劑為溴甲酚紫）為陽(yáng)性，若測(cè)定管呈黃色為陰性。若對(duì)照管呈現(xiàn)紫色則試驗(yàn)無(wú)意義，不能作出判斷。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如沙門(mén)菌屬中除傷寒和雞沙門(mén)菌外，其余沙門(mén)菌的賴氨酸和鳥(niǎo)氨酸脫羧酶均為陽(yáng)性。志賀菌屬除宋內(nèi)和鮑氏志賀菌外，其他志賀菌均為陰性。

三、碳源和氮源利用試驗(yàn)

細(xì)菌對(duì)單一來(lái)源的碳源利用的鑒定試驗(yàn)。

1.枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：枸櫞酸鹽培養(yǎng)基

方法：將被檢菌接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)1～4d，每日觀察結(jié)果。

結(jié)果：由淡綠色變?yōu)樯钏{(lán)色為陽(yáng)性；不能利用枸櫞酸鹽作為碳源的細(xì)菌，在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，培養(yǎng)基則不變色，為陰性。

應(yīng)用：用于腸桿菌科中菌屬間的鑒定。在腸桿菌科中埃希菌屬、志賀菌屬、愛(ài)德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性，沙門(mén)菌屬、克雷伯菌屬通常為陽(yáng)性。

2.丙二酸鹽利用試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：丙二酸鹽培養(yǎng)基

方法：將被檢菌接種于培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)24～48h后觀察結(jié)果。

結(jié)果：培養(yǎng)基由淡綠色變?yōu)樯钏{(lán)色為陽(yáng)性，顏色無(wú)變化為陰性。

應(yīng)用：腸桿菌科中屬間及種的鑒別。克雷伯菌屬為陽(yáng)性，枸櫞酸桿菌屬、腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬中有些菌種也呈陽(yáng)性，其他菌屬均為陰性。

四、各種酶類試驗(yàn)

（一）呼吸酶類試驗(yàn)

1.氧化酶試驗(yàn)

原理：

試劑：1%鹽酸四甲基對(duì)苯二胺或1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺。

方法：

1）菌落法：直接滴加試劑于被檢菌菌落上。

2）濾紙法：取潔凈濾紙一小塊，沾取菌少許，然后加試劑。

3）試劑紙片法：將濾紙片浸泡于試劑中制成試劑紙片，取菌涂于試劑紙上。

結(jié)果：細(xì)菌在與試劑接觸10秒內(nèi)呈深紫色，為陽(yáng)性。為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，分別以銅綠假單胞菌和大腸埃希菌作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

2.過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)（觸酶試驗(yàn)）

原理：

試劑：3%過(guò)氧化氫溶液

方法：取槽置于潔凈的試管內(nèi)或玻片上，然后加3%過(guò)氧化氫數(shù)滴；或直接滴加3%過(guò)氧化氫于不含血液的細(xì)菌培養(yǎng)物中，立即觀察結(jié)果。

結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生者為陽(yáng)性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性。

應(yīng)用：故此試驗(yàn)常用于革蘭陽(yáng)性球菌的初步分群。

3.硝酸鹽還原試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：硝酸鹽培養(yǎng)基

試劑：甲液（對(duì)氨基苯磺酸）；乙液（α-萘胺）

方法：被檢菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，于35℃培養(yǎng)1～4d。將甲、乙液等量混合后（約0.1m1）加入培養(yǎng)基內(nèi)，立即觀察結(jié)果。

結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。

若加入試劑后無(wú)顏色反應(yīng)，可能是：

①硝酸鹽沒(méi)有被還原，試驗(yàn)陰性；

②硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導(dǎo)致假陰性結(jié)果，這時(shí)應(yīng)在試管內(nèi)加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色則表明試驗(yàn)確實(shí)為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表示試驗(yàn)為假陰性。

應(yīng)用：

腸桿菌科細(xì)菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；

銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌等假單胞菌可產(chǎn)生氮?dú)?；有些厭氧菌如韋榮球菌等試驗(yàn)也為陽(yáng)性。

4.脂酶試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：脂酶培養(yǎng)基（含維多利亞藍(lán)）

方法：將被檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24h。

結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)樗{(lán)色為陽(yáng)性，陰性為粉紅色或無(wú)色。

應(yīng)用：主要用于厭氧菌的鑒別。

類桿菌屬中的中間類桿菌產(chǎn)生脂酶，其他類桿菌則陰性；

芽胞梭菌屬中產(chǎn)氣芽胞梭菌、肉毒梭菌和諾維梭菌為陽(yáng)性，而其他梭菌陰性。

5.卵磷脂酶試驗(yàn)

原理：

培養(yǎng)基：1%卵黃瓊脂平板

方法：將被檢菌劃線接種于卵黃瓊脂平板上，35℃培養(yǎng)3～6h。

結(jié)果：若3h后在菌落周圍形成乳白色混濁環(huán)，即為陽(yáng)性，6h后混濁環(huán)可擴(kuò)展至5～6mm。

應(yīng)用：主要用于厭氧菌的鑒定。

產(chǎn)氣莢膜梭菌、諾維梭菌產(chǎn)生此酶，其他梭菌為陰性。

6.DNA酶試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌產(chǎn)生DNA酶，可使長(zhǎng)鏈DNA水解成寡核苷酸鏈。因?yàn)殚L(zhǎng)鏈DNA可被酸沉淀，寡核苷酸鏈則溶于酸，所以當(dāng)在菌落平板上加入酸后，會(huì)在菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)。

培養(yǎng)基：0.2%DNA瓊脂平板。

方法：將被檢菌點(diǎn)種于上述平板上，于35℃培養(yǎng)18～24h，然后用1mol/L鹽酸覆蓋平板，觀察結(jié)果。

結(jié)果：在菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)為陽(yáng)性，無(wú)透明環(huán)為陰性。

應(yīng)用：在革蘭陽(yáng)性球菌中只有金黃色葡萄球菌產(chǎn)生DNA酶；

在腸桿菌科中沙雷菌和變形桿菌產(chǎn)生此酶。

7.凝固酶試驗(yàn)

原理：

方法：

1）玻片法：取兔血漿和鹽水各一滴，分別置于潔凈的玻片上，挑取被檢菌分別與血漿和鹽水混合。

2）試管法：取試管2支，各加0.5ml人或兔血漿，挑取被檢菌和陽(yáng)性對(duì)照菌分別加入血漿中并混勻，于37℃水浴3～4h。

結(jié)果：玻片法以血漿中有明顯的顆粒出現(xiàn)而鹽水中無(wú)自凝現(xiàn)象判為陽(yáng)性；試管法以血漿凝固判為陽(yáng)性。

應(yīng)用：作為鑒定葡萄球菌致病性的重要指標(biāo)，也是葡萄球菌鑒別時(shí)常用的一個(gè)試驗(yàn)。

8.CAMP試驗(yàn)

原理：B群鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進(jìn)葡萄球菌的β-溶血素溶解紅細(xì)胞的活性，因此在兩菌（B群鏈球菌和葡萄球菌）的交界處溶血力增加，出現(xiàn)矢形（半月形）的溶血區(qū)。

培養(yǎng)基：血瓊脂平板

方法：先以產(chǎn)β-溶血素的金黃色葡萄球菌劃一橫線接種于血瓊脂平板上，再將被檢菌與前一劃線作垂直劃線接種，兩線不能相交，相距0.5～1cm，于37℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。

結(jié)果：在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)為陽(yáng)性。

應(yīng)用：在鏈球菌中，只有B群鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性，故可作為特異性鑒定。

9.膽汁溶菌試驗(yàn)

原理：膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，可能是由于膽汁降低細(xì)胞膜表面的張力，使細(xì)胞膜破損或使菌體裂解；或者是由于膽汁加速了肺炎鏈球菌本身自溶過(guò)程，促使細(xì)菌發(fā)生自溶。

試劑：10%去氧膽酸鈉

方法：

1）平板法：取10%去氧膽酸鈉溶液一接種環(huán)，滴