DNA瓊脂糖凝膠電泳制備全過(guò)程圖解課件

DNA瓊脂糖凝膠電泳1aDNA瓊脂糖凝膠電泳1a實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖為鏈狀多糖

→繩狀瓊脂糖束→大網(wǎng)孔型凝膠——分離、鑒定、純化DNA影響DNA遷移率的因素：DNA分子的大小、構(gòu)象，凝膠濃度，電壓，電泳緩沖液的組成緩沖液pH>DNAPi，DNA帶負(fù)電荷，遷移率與分子量對(duì)數(shù)成反比DNA分子構(gòu)象影響遷移率：共價(jià)閉環(huán)DNA>線狀DNA>開(kāi)環(huán)DNA2a實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖為鏈狀多糖→繩狀瓊脂糖束→大網(wǎng)孔型2a不同濃度瓊脂糖分離DNA分子的范圍瓊脂糖濃度（%）分離范圍（kb）0.35-600.61-200.70.8-100.90.5-71.20.4-61.50.2-42.00.1-33a不同濃度瓊脂糖分離DNA分子的范圍瓊脂糖濃度（%）瓊脂糖凝膠中DNA的觀察溴化乙錠（EB）—DNA：紫外光下紅色熒光4a瓊脂糖凝膠中DNA的觀察溴化乙錠（EB）—DNA：紫外光下主要實(shí)驗(yàn)器材電泳儀電泳槽緩沖液瓊脂糖凝膠槽梳子取液器溴酚藍(lán)5a主要實(shí)驗(yàn)器材電泳儀電泳槽緩沖液凝膠槽梳子取液器溴酚藍(lán)5a電泳槽結(jié)構(gòu)6a電泳槽結(jié)構(gòu)6a操作步驟瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻，EB凝膠板的制備：加梳子，倒膠樣品的制備：樣品+1/5體積溴酚藍(lán)加樣：加樣端為負(fù)極（黑）電泳：5V/cm觀察：紫外燈下觀察，照相7a操作步驟瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻，EB7a溶膠8a溶膠8a準(zhǔn)備膠槽9a準(zhǔn)備膠槽9a凝膠冷卻至50°C，加EB至終濃度0.5μg/ml10a凝膠冷卻至50°C，加EB至終濃度0.5μg/ml10a鋪膠11a鋪膠11a凝膠凝固后取出梳子12a凝膠凝固后取出梳子12a加緩沖液13a加緩沖液13a準(zhǔn)備樣品14a準(zhǔn)備樣品14a點(diǎn)樣15a點(diǎn)樣15a電泳16a電泳16a注意觀察溴酚藍(lán)染液的遷移17a注意觀察溴酚藍(lán)染液的遷移17a紫外燈下觀察電泳結(jié)果18a紫外燈下觀察電泳結(jié)果18a照相19a照相19aDNA瓊脂糖凝膠電泳20aDNA瓊脂糖凝膠電泳1a實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖為鏈狀多糖

→繩狀瓊脂糖束→大網(wǎng)孔型凝膠——分離、鑒定、純化DNA影響DNA遷移率的因素：DNA分子的大小、構(gòu)象，凝膠濃度，電壓，電泳緩沖液的組成緩沖液pH>DNAPi，DNA帶負(fù)電荷，遷移率與分子量對(duì)數(shù)成反比DNA分子構(gòu)象影響遷移率：共價(jià)閉環(huán)DNA>線狀DNA>開(kāi)環(huán)DNA21a實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖為鏈狀多糖→繩狀瓊脂糖束→大網(wǎng)孔型2a不同濃度瓊脂糖分離DNA分子的范圍瓊脂糖濃度（%）分離范圍（kb）0.35-600.61-200.70.8-100.90.5-71.20.4-61.50.2-42.00.1-322a不同濃度瓊脂糖分離DNA分子的范圍瓊脂糖濃度（%）瓊脂糖凝膠中DNA的觀察溴化乙錠（EB）—DNA：紫外光下紅色熒光23a瓊脂糖凝膠中DNA的觀察溴化乙錠（EB）—DNA：紫外光下主要實(shí)驗(yàn)器材電泳儀電泳槽緩沖液瓊脂糖凝膠槽梳子取液器溴酚藍(lán)24a主要實(shí)驗(yàn)器材電泳儀電泳槽緩沖液凝膠槽梳子取液器溴酚藍(lán)5a電泳槽結(jié)構(gòu)25a電泳槽結(jié)構(gòu)6a操作步驟瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻，EB凝膠板的制備：加梳子，倒膠樣品的制備：樣品+1/5體積溴酚藍(lán)加樣：加樣端為負(fù)極（黑）電泳：5V/cm觀察：紫外燈下觀察，照相26a操作步驟瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻，EB7a溶膠27a溶膠8a準(zhǔn)備膠槽28a準(zhǔn)備膠槽9a凝膠冷卻至50°C，加EB至終濃度0.5μg/ml29a凝膠冷卻至50°C，加EB至終濃度0.5μg/ml10a鋪膠30a鋪膠11a凝膠凝固后取出梳子31a凝膠凝固后取出梳子12a加緩沖液32a加緩沖液13a準(zhǔn)備樣品33a準(zhǔn)備