微生物學(xué)教學(xué)課件：第六章 微生物的生長及其控制

第一節(jié)：.測(cè)定微生物生長繁殖的方法第二節(jié)：微生物的生長規(guī)律第三節(jié)：環(huán)境因素對(duì)微生物生長的影響第四節(jié)：微生物培養(yǎng)法概論第五節(jié)：有害微生物的控制第七章微生物的生長及其控制微生物的生長表現(xiàn)在微生物個(gè)體的生長與群體生長兩個(gè)水平上。作為單細(xì)胞微生物來講，單個(gè)微生物個(gè)體的生長表現(xiàn)為細(xì)胞基本成分的協(xié)調(diào)合成和原生質(zhì)總量的不斷增加，即為微生物個(gè)體細(xì)胞的生長。細(xì)胞生長到一定程度，就分裂成2個(gè)子細(xì)胞從而引起單細(xì)胞微生物個(gè)體數(shù)目的增加，即為單細(xì)胞微生物的繁殖。隨著群體中微生物個(gè)體細(xì)胞的進(jìn)一步生長、繁殖，導(dǎo)致了微生物群體的生長。群體的生長可用其重量、體積、個(gè)體濃度或密度等作指標(biāo)來測(cè)定。

群體生長＝個(gè)體生長＋個(gè)體繁殖除了特定的目的外，在微生物的研究和應(yīng)用中，只有群體的生長才有意義，因此，在微生物學(xué)中所指的生長一般均指群體生長。第一節(jié)測(cè)定微生物生長繁殖的方法一、測(cè)生長量稱重法：用于測(cè)定含菌量高、顆粒性雜質(zhì)少的絲狀和單細(xì)胞微生物樣品。比濁法：用于單細(xì)胞微生物和孢子的測(cè)定，常用于觀察和控制培養(yǎng)過程中的微生物數(shù)量消長情況，簡便快捷、難區(qū)分死活細(xì)胞，雜質(zhì)的影響較大（圖）。生理指標(biāo)法：據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)條件選用與微生物生長量相平行的生理指標(biāo)，如含氮量、含碳量、含磷量、DNA、RNA、ATP、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、耗氧、粘度、產(chǎn)熱等指標(biāo)。TurbidityTurbidity液體稀釋培養(yǎng)計(jì)數(shù)法（最大或然數(shù)法）：適于測(cè)定混雜微生物群中具有特殊生理特性的類群，如能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群，氨化細(xì)菌群，硝化細(xì)菌群等。濃縮法：適用于檢測(cè)微生物數(shù)量很少的水和空氣等樣品。測(cè)定時(shí)讓定量的水或空氣通過特殊的微生物收集裝置（如微孔濾膜等），富集其中的微生物，將濾膜貼于平板上培養(yǎng)計(jì)數(shù)或?qū)⑹占奈⑸锵疵摵蟀瓷戏ㄓ?jì)數(shù)。二、計(jì)繁殖數(shù)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：用于單細(xì)胞微生物和孢子的測(cè)定，簡便快捷、容易操作；難區(qū)分死活細(xì)胞及形態(tài)與微生物類似的雜質(zhì)，測(cè)定值偏大。平板菌落計(jì)數(shù)法：用于單細(xì)胞微生物和孢子的測(cè)定，麻煩、費(fèi)工、費(fèi)時(shí)，但為目前主要、常用的活菌計(jì)數(shù)法。第二節(jié)微生物的生長規(guī)律一、微生物的個(gè)體生長和同步生長使培養(yǎng)物中所有的微生物細(xì)胞都處于相同生長階段的培養(yǎng)方法稱同步培養(yǎng)法。通過同步培養(yǎng)的手段而使細(xì)胞群體中各個(gè)個(gè)體處于分裂步調(diào)一致的生長狀態(tài)，稱同步生長。獲得同步生長的方法有：（1）環(huán)境條件誘導(dǎo)法：氯霉素抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成；細(xì)菌芽孢誘導(dǎo)發(fā)芽；藻類細(xì)胞的光照、黑暗控制；用EDTA或離子載體處理酵母菌；短期熱休克（40℃）。（2）機(jī)械篩選法：用過濾法；密度梯度離心法或膜洗脫法收集同步生長的細(xì)胞。二、單細(xì)胞微生物的典型生長曲線當(dāng)把少量純種單細(xì)胞微生物接種到一恒定容積的液體培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)，每隔一定時(shí)間取樣測(cè)定培養(yǎng)液中細(xì)胞數(shù)目，如以細(xì)胞數(shù)目的對(duì)數(shù)值作縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間作橫坐標(biāo)，可以畫出一條由延滯期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期組成的曲線，即為微生物的生長曲線。1、

延滯期

少數(shù)單細(xì)胞微生物接種到新鮮培養(yǎng)液中后，因代謝系統(tǒng)適應(yīng)新環(huán)境的需要，細(xì)胞數(shù)目沒有增加的一段時(shí)期稱延滯期。延滯期的特點(diǎn)：（1）生長速度常數(shù)為零（2）細(xì)胞形態(tài)變大或增長（3）細(xì)胞內(nèi)RNA尤其是rRNA含量增高，原生質(zhì)呈嗜堿性（4）合成代謝十分旺盛，（5）對(duì)外界不良環(huán)境如溫度、NaCl濃度和抗生素等理化因素抵抗力差影響延滯期的因素：（1）

接種齡：以對(duì)數(shù)期菌接種，子代培養(yǎng)物的延滯期就短（2）

接種量：一般接種量大，延滯期短（3）

培養(yǎng)基成分：接種到營養(yǎng)豐富的天然培養(yǎng)基中的微生物要比接種到營養(yǎng)單調(diào)的培養(yǎng)基中的延滯期短。2、指數(shù)期微生物的生理修復(fù)或調(diào)整完成，細(xì)胞進(jìn)入快速分裂階段，細(xì)胞數(shù)目的增加以幾何級(jí)數(shù)進(jìn)行，此期稱對(duì)數(shù)期。指數(shù)期的特點(diǎn)：（1）生長速率常數(shù)最大；（2）細(xì)胞進(jìn)行平衡生長，菌體內(nèi)各種成分最為均勻；（3）酶系活躍，代謝旺盛。指數(shù)期的微生物因其整個(gè)群體的生理特性較一致、細(xì)胞成分平衡發(fā)展和生長速率恒定，故可作為代謝、生理等研究的良好材料，是增殖噬菌體的最適宿主菌齡，也是發(fā)酵生產(chǎn)中用作“種子”的最佳種齡。

指數(shù)期微生物繁殖代數(shù)（n）的計(jì)算X2=X1·2nN=3.322(lgX2-lgX1)代時(shí)G=1/R生長速度常數(shù)（R）=n/t1-t2影響指數(shù)期微生物代時(shí)長短的因素：（1）菌種：不同菌種由于其自身的特性代時(shí)差別極大。（2）營養(yǎng)成分：同一種微生物，在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上生長時(shí)，其代時(shí)較短，反之則長。（3）營養(yǎng)物濃度：營養(yǎng)物濃度即可影響微生物的生長速率，又可影響它的生長總量。凡處于較低濃度范圍內(nèi)可影響生長速率和菌體產(chǎn)量的某營養(yǎng)物，稱生長限制因子。（4）培養(yǎng)溫度：溫度對(duì)微生物的生長速率有明顯的影響。3、

穩(wěn)定期新生的細(xì)胞數(shù)目與死亡的相等，總菌數(shù)達(dá)到最大值，活菌數(shù)保持穩(wěn)定，此期稱穩(wěn)定期。穩(wěn)定期特點(diǎn)：（1）細(xì)胞開始貯存糖原、異染粒等營養(yǎng)貯藏物；（2）多數(shù)芽孢菌在這時(shí)開始形成芽孢；（3）有的微生物在穩(wěn)定期時(shí)還開始合成抗生素等次生代謝產(chǎn)物。穩(wěn)定期到來的原因有：（1）營養(yǎng)物尤其是生長限制因子的耗盡；（2）營養(yǎng)比例的失調(diào)；（3）酸、醇、毒素等有害代謝產(chǎn)物的積累；（4）pH、氧化還原勢(shì)等物化條件越來越不適宜。4、衰亡期微生物的個(gè)體死亡速度超過新生速度，整個(gè)群體呈負(fù)生長狀態(tài)此階段被稱為死亡期。死亡期的特點(diǎn)：（1）菌體細(xì)胞會(huì)發(fā)生膨大或不規(guī)則的退化形態(tài)（2）細(xì)胞發(fā)生自溶（3）有的微生物在這期會(huì)進(jìn)一步合成或釋放抗生素等次生代謝產(chǎn)物（4）芽孢菌常在此時(shí)釋放芽孢（5）G+菌染色反應(yīng)會(huì)轉(zhuǎn)變成G-染色反應(yīng)三、微生物的連續(xù)培養(yǎng)在一個(gè)恒定容積的流動(dòng)系統(tǒng)中培養(yǎng)微生物，當(dāng)進(jìn)入穩(wěn)定期后，一方面以一定速率不斷地加入新的培養(yǎng)基，另一方面又以相同的速率流出培養(yǎng)物，以使培養(yǎng)系統(tǒng)中的細(xì)胞數(shù)量和營養(yǎng)狀態(tài)保持恒定，即處于穩(wěn)態(tài)，這種培養(yǎng)方式稱連續(xù)培養(yǎng)。1、連續(xù)培養(yǎng)器的類型按控制方式分內(nèi)控制（控制菌體密度）：恒濁器

外控制（控制培養(yǎng)液流速及R）：恒化器按培養(yǎng)器串連級(jí)數(shù)分單級(jí)連續(xù)培養(yǎng)器連續(xù)培養(yǎng)器多級(jí)連續(xù)培養(yǎng)器按細(xì)胞狀態(tài)分一般連續(xù)培養(yǎng)器

固定化細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)器按用途分實(shí)驗(yàn)室科研用：連續(xù)培養(yǎng)器

發(fā)酵生產(chǎn)用：大型連續(xù)發(fā)酵罐2、恒濁器

恒濁器是根據(jù)培養(yǎng)器內(nèi)微生物的生長密度，并借光電控制系統(tǒng)來控制培養(yǎng)液流速，以取得菌體密度高、生長速度恒定的微生物細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)器。在這一系統(tǒng)中，當(dāng)培養(yǎng)基的流速低于微生物生長速度時(shí)，菌體密度增高，這時(shí)通過光電控制系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，可促使培養(yǎng)液流速加快，反之亦然，并以此來達(dá)到恒密度的目的。3、恒化器使培養(yǎng)液的流速保持不變，并使微生物始終在低于其最高生長速度的條件下進(jìn)行生長和繁殖的連續(xù)培養(yǎng)裝置。恒化器是一種通過控制某一營養(yǎng)物的濃度，使其始終成為生長限制因子的條件下達(dá)到的，因而可稱為外控式的連續(xù)培養(yǎng)裝置。連續(xù)培養(yǎng)如用于生產(chǎn)實(shí)踐，就稱為連續(xù)發(fā)酵。連續(xù)發(fā)酵與單批發(fā)酵相比的優(yōu)點(diǎn)：（1）高效，它簡化了裝料、滅菌、出料、清洗發(fā)酵罐等許多單元操作，從而減少了非生產(chǎn)時(shí)間和提高了設(shè)備的利用率；（2）自控，即便于利用各種傳感器和儀表進(jìn)行自動(dòng)控制；（3）產(chǎn)品質(zhì)量較穩(wěn)定；（4）節(jié)約了大量動(dòng)力、人力、水和蒸氣，且使水、氣、電的負(fù)荷均衡合理。連續(xù)發(fā)酵與單批發(fā)酵相比的缺點(diǎn)：（1）菌種易退化（2）易污染雜菌（3）營養(yǎng)物的利用率一般低于單批培養(yǎng)。第三節(jié)環(huán)境因素對(duì)微生物生長的影響一、溫度

溫度是影響微生物生長的一個(gè)重要因子。低溫可使酶活性降低質(zhì)膜處于凝固狀態(tài)，不能正常運(yùn)輸營養(yǎng)物，生長不能進(jìn)行。溫度升高，胞內(nèi)酶反應(yīng)速度加快，生長速率加快。當(dāng)超過某一溫度時(shí)，蛋白質(zhì)、核酸和細(xì)胞其它成分發(fā)生不可逆的變性。所以每種微生物都有3種基本溫度即生長溫度3基點(diǎn)：最低生長溫度、最適生長溫度和最高生長溫度。（圖）根據(jù)微生物的生長溫度范圍可將其分為嗜冷菌、兼性嗜冷菌、嗜溫菌、嗜熱菌和超嗜熱菌5類二、氧按照微生物與氧的關(guān)系，可將其分為以下幾類：

專性好氧菌:需氧,在正常大氣壓下通過呼吸產(chǎn)能。好氧菌兼性厭氧菌：以呼吸為主，兼營發(fā)酵產(chǎn)能以呼吸為主，兼營厭氧呼吸

微好氧菌：需在微量氧下生活厭氧菌耐氧菌：不需氧，只以發(fā)酵產(chǎn)能，氧無毒害

專性厭氧菌:氧有害或致死,以發(fā)酵或無氧呼吸產(chǎn)能不同需氧情況的微生物在半固體瓊脂柱中的生長模式圖及微生物所含的酶1、專性好氧菌：必須在較高分子氧（~0.2巴）的條件下才能生長，它們有完整的呼吸鏈，以O(shè)2為最終受氫體，有超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶，絕大多數(shù)細(xì)菌、放線菌都屬此類。2、兼性厭氧菌：以在有氧條件下的生長為主也可兼在厭氧條件下生長的微生物，細(xì)胞含SOD和過氧化氫酶。3、微好氧菌：通過呼吸鏈并以氧為最終氫受體而產(chǎn)能，只能在較低的氧分壓（0.01~0.03巴）下才能正常生長的微生物。4、耐氧菌：可在O2存在下進(jìn)行發(fā)酵性厭氧生活的厭氧菌。它們的生長不需要氧，但O2對(duì)它們也無害。細(xì)胞內(nèi)存在SOD和過氧化物酶。5、專性厭氧菌：專性厭氧菌具有以下特點(diǎn)：（1）分子氧對(duì)它們有毒，短期接觸也會(huì)抑制甚至死亡（2）在空氣或含10％CO2的空氣中，在固體或半固體培養(yǎng)基表面不能生長，但在其深層無氧處或在氧化還原勢(shì)低的環(huán)境下才能生長（3）通過發(fā)酵、無氧呼吸、循環(huán)光合磷酸化或甲烷發(fā)酵產(chǎn)能（4）細(xì)胞內(nèi)缺乏SOD和細(xì)胞色素氧化酶，大多數(shù)還缺乏過氧化氫酶。

TheEffectofOxygen(O2)onGrowth三、pH微生物在其生命活動(dòng)過程中，會(huì)改變外界環(huán)境的pH，這就是通常遇到的培養(yǎng)基的原始pH在微生物培養(yǎng)過程中會(huì)時(shí)時(shí)發(fā)生改變的原因，其中可能發(fā)生的反應(yīng)有以下幾種：

糖類---發(fā)酵，氧化有機(jī)酸；培養(yǎng)基內(nèi)有機(jī)物脂肪---水解有機(jī)酸中性成分蛋白質(zhì)---脫羧胺類無機(jī)鹽：(NH4)2SO4---NH4+離子選擇吸收

H2SO4NaNO3---NO3-離子選擇吸收

NaOH在微生物的培養(yǎng)過程中pH值的變化常對(duì)微生物本身及發(fā)酵生產(chǎn)有不利的影響，因此在微生物培養(yǎng)和發(fā)酵生產(chǎn)中可采取以下措施及時(shí)調(diào)整pH值：治標(biāo)過酸時(shí)：加NaOH、NaCO3等堿液中和過堿時(shí)：加H2SO4，HCl等酸液中和pH調(diào)節(jié)過酸時(shí)加適當(dāng)?shù)?加尿素,NaNO3,NH4OH或蛋白質(zhì)等治本提高通氣量過堿時(shí)加適當(dāng)碳源：加糖,乳酸,醋酸,檸檬酸或油脂等降低通氣量第四節(jié)一、實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)法1固體培養(yǎng)法（1）好氧菌的固體培養(yǎng)

主要用試管斜面、培養(yǎng)皿瓊脂平板及較大型的克氏扁瓶、茄子瓶等進(jìn)行平板培養(yǎng)。（2）厭氧菌的固體培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)厭氧菌需特殊的培養(yǎng)裝置或器皿，特殊的培養(yǎng)基中加入適當(dāng)?shù)倪€原劑甚至刃天青等氧化還原指示劑。厭氧菌的固體培養(yǎng)方法有多種如（a）高層瓊脂柱（b）厭氧培養(yǎng)皿（c）亨蓋特滾管技術(shù)（d）厭氧罐（箱、袋）（e）厭氧手套箱（1、2）微生物培養(yǎng)法概論2液體培養(yǎng)法（1）好氧菌的液體培養(yǎng)為保證好氧菌在液體培養(yǎng)中有充足的氧氣，可采取以下措施增加培養(yǎng)液與氧的接觸面積或提高氧的分壓來提高溶氧速率：（a）淺層液體靜止培養(yǎng)（b）在搖床上作搖瓶培養(yǎng)（c）在深層液體底部通人加壓空氣或氧氣（d）對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行機(jī)械攪拌等。實(shí)驗(yàn)室中常用的好氧培養(yǎng)法有：試管液體培養(yǎng)三角瓶淺層液體培養(yǎng)搖瓶培養(yǎng)臺(tái)式發(fā)酵罐（2）厭氧菌的液體培養(yǎng)AnaerobicJarAnaerobeChamberMicroaerophilicBacteriaA.CandleJar

16%O24%CO2二、生產(chǎn)實(shí)踐中培養(yǎng)微生物的方法1、固態(tài)培養(yǎng)法（1）好氧菌的曲法培養(yǎng)（2）厭氧菌的堆積培養(yǎng)法2、液體培養(yǎng)法（1）好氧菌的淺盤培養(yǎng)（2）好氧菌的深層液體通氣培養(yǎng)第五節(jié)有害微生物的控制在微生物學(xué)研究或生產(chǎn)實(shí)踐中，常常需要控制我們不需要的微生物的生長。任何殺死或抑制微生物生長的方法都可以達(dá)到控制微生物生長的目的，它們包括加熱、低溫、干燥、輻射、過濾等物理方法和消毒劑、防腐劑、化學(xué)治療劑等化學(xué)方法。一、控制有害微生物的措施滅菌——徹底殺滅一切微生物殺菌殺滅法溶菌控制有害菌的措施消毒——僅殺滅病原菌抑制法防腐——抑制霉腐微生物化療——抑制宿主體內(nèi)的病原菌滅菌、消毒、防腐、化療的比較比較項(xiàng)目滅菌消毒防腐化療處理因素強(qiáng)理、化因素理、化因素理、化因素化學(xué)治療劑處理對(duì)象任何物體內(nèi)外生物體表，酒、乳等有關(guān)病原菌有機(jī)質(zhì)物體內(nèi)外宿主體內(nèi)微生物類型一切微生物有關(guān)病原菌一切微生物有關(guān)病原菌對(duì)微生物作用徹底殺滅殺死或抑制抑制或殺死抑制或殺死實(shí)例加壓蒸氣滅菌70%酒精消毒，巴氏消毒法冷藏，干燥，糖漬，鹽腌，缺氧，化學(xué)防腐劑抗生素，磺胺藥，生物藥物素1、滅菌：采用強(qiáng)烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠(yuǎn)喪失其生長繁殖能力的措施，稱為滅菌。2、消毒：采用物理、化學(xué)方法殺滅病原微生物稱消毒。3、防腐：利用某種理化因素完全抑制霉腐微生物的生長繁殖。防腐的方法很多，原理各異，例如低溫、缺氧、干燥、高滲、高酸度、高醇度、加防腐劑。4、化療：利用具有高度選擇毒力（對(duì)病原菌有高度毒力而對(duì)宿主無顯著毒性）的化學(xué)物質(zhì)來抑制宿主體內(nèi)病原微生物的生長繁殖，以達(dá)到治療該宿主傳染病的一種措施。用于化學(xué)治療目的的化學(xué)物質(zhì)稱化學(xué)治療劑，包括磺胺類等化學(xué)合成藥物、抗生素、生物藥物素和中草藥中的有效成分等。二、高溫殺菌1、高溫滅菌或消毒的主要方法

干熱滅菌法火焰灼燒法烘箱內(nèi)熱空氣滅菌法高溫滅菌巴氏消毒法常壓下煮沸消毒法濕熱滅菌法間歇滅菌法加壓下常規(guī)加壓滅菌法連續(xù)加壓滅菌法1、干熱滅菌法（1）烘箱內(nèi)熱空氣滅菌法：150-170℃下維持1-2小時(shí)，適用對(duì)象為金屬制品或清潔玻璃器皿等。（2）火焰灼燒法：火焰上灼燒，適用對(duì)象為接種環(huán)、接種針等工具或代病原菌的材料、動(dòng)物尸體等。2、濕熱滅菌法（1）巴氏消毒：巴氏消毒的處理方法有低溫維持法，即63℃處理30分鐘。高溫瞬時(shí)法，即72℃處理15秒。巴氏消毒主要用于牛奶、啤酒、果酒等不能進(jìn)行高溫滅菌的液體，達(dá)到殺死病原菌，而又保留它們的風(fēng)味的目的。（2）煮沸消毒法：是在100℃下煮沸幾分鐘，一般用于飲用水的消毒。（3）間歇滅菌法：將待滅菌的培養(yǎng)基放在80-100℃下蒸煮15-60min，以殺滅其中所有微生物營養(yǎng)體，然后放置室溫或37℃下保溫過夜，如此連續(xù)重復(fù)3天即可在較低的滅菌溫度下同樣達(dá)到徹底滅菌的良好效果。（4）常規(guī)加壓蒸氣滅菌法：在121℃（壓力為1kg/cm2或15磅/英寸2），時(shí)間維持15～20min?；?15℃（壓力為0.7kg/cm2或8磅/英寸2），時(shí)間維持35min。加壓蒸氣滅菌法適合于一切微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)療保健機(jī)械或發(fā)酵工廠中對(duì)培養(yǎng)基及多種器材或物料的滅菌。

2、濕熱滅菌法借助蒸汽釋放的熱使微生物細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、酶和核酸分子內(nèi)部的化學(xué)鍵，特別是氫鍵受到破壞，引起不可逆的變性，使微生物死亡。優(yōu)點(diǎn)：1）蒸汽來源容易，操作費(fèi)用低廉，本身無毒

2)蒸汽具有很強(qiáng)的穿透力，滅菌易于徹底

3）蒸汽均有很大的潛熱，冷凝后的水分有利于濕熱滅菌

4）蒸汽輸送可借助本身的壓強(qiáng)，調(diào)節(jié)方便，技術(shù)管理容易缺點(diǎn)：1)設(shè)備費(fèi)用高

2）不能用于怕受潮的物料滅菌（5）連續(xù)加壓蒸氣滅菌法（連消法）：讓培養(yǎng)基在管道的流動(dòng)過程中快速升溫、維持和冷卻，然后流入發(fā)酵罐。培養(yǎng)基一般加熱至135～140℃維持5～15s。此法僅用于大型發(fā)酵廠的大批培養(yǎng)基滅菌。利用溫度進(jìn)行殺菌的定量指標(biāo)有：熱死時(shí)間：指在某一溫度下，殺死某微生物的水懸浮液群體所需的最短時(shí)間。熱死溫度：指在一定時(shí)間內(nèi)（一般為10min），殺死某微生物的水懸浮液群體所需的最低溫度。（二）、連續(xù)滅菌：1、連續(xù)滅菌優(yōu)點(diǎn)：1）可以采用高溫短時(shí)滅菌；2）發(fā)酵罐利用率高；3）蒸汽負(fù)荷均衡；4）熱效率高；5）可采用自動(dòng)控制，降低勞動(dòng)強(qiáng)度；2、連續(xù)滅菌流程六、培養(yǎng)基與設(shè)備、管道滅菌條件1、滅菌鍋內(nèi)滅菌2、種子培養(yǎng)基實(shí)罐滅菌3、發(fā)酵培養(yǎng)基實(shí)罐滅菌4、發(fā)酵培養(yǎng)基連續(xù)滅菌5、消泡劑滅菌6、補(bǔ)料實(shí)罐滅菌7、尿素溶液滅菌2、影響加壓蒸氣滅菌效果的因素（1）滅菌物體含菌量的影響滅菌物品中的含菌量越高所需滅菌時(shí)間就越長；（2）滅菌鍋內(nèi)空氣排除程度的影響必須徹底排除滅菌鍋內(nèi)空氣；（3）滅菌pH的影響pH6.0~8.0時(shí),微生物較不易死亡，滅菌時(shí)間應(yīng)相應(yīng)長些，pH<6.0時(shí)，最易引起死亡，滅菌時(shí)間可相應(yīng)短些。（4）滅菌對(duì)象的體積大容量培養(yǎng)基滅菌時(shí)間應(yīng)長些。（5）加熱與散熱速度。芽孢數(shù)目和滅菌所需時(shí)間的關(guān)系芽孢數(shù)／mL在100℃下殺菌時(shí)間（分）10000000075000000500000002500000010000001000001916141286空氣排除度對(duì)滅菌溫度的影響壓力表讀數(shù)鍋內(nèi)溫度(℃)Kg/cm2磅/英寸2純蒸汽排除1/2空氣不排除空氣0.350.701.051.401.752.1051015202530109115121126130134941051121181241287290100109115121

pH對(duì)滅菌時(shí)間的影響溫度(℃)芽孢數(shù)(個(gè)/mL)滅菌時(shí)間(分)pH6.1pH5.3pH5.0pH4.7pH4.5120115110100100001000010000100008257074072565720512351803133015031324150不同容量的液體在加壓滅菌鍋內(nèi)的滅菌時(shí)間容器(mL)在121℃～123℃下所需滅菌時(shí)間(分)三角瓶5020050010002000血清瓶900012～1412～1517～2220～2530～3550～55（1）高溫對(duì)培養(yǎng)基成分的有害影響

形成沉淀物有機(jī)物：如多肽類沉淀無機(jī)物：如磷酸鹽、碳酸鹽等沉淀

破壞營養(yǎng)，提高色澤褐變：產(chǎn)生氨基糖、焦糖或黑色素有害影響毒變

改變培養(yǎng)基的pH（一般為降低pH）

降低培養(yǎng)基濃度（氣溫低時(shí)會(huì)增加冷凝水）

3、高溫對(duì)培養(yǎng)基成分的有害影響及其防止（2）防止高溫對(duì)培養(yǎng)基產(chǎn)生有害影響的方法（a）采用特殊加熱滅菌法，如采用分別滅菌、低壓滅菌等。（b）過濾除菌法，對(duì)培養(yǎng)基中不耐熱的成分可采用此法。（c）其它方法，如加EDTA等螯合劑到培養(yǎng)基中可防止金屬離子發(fā)生沉淀三、化學(xué)方法的控制

表面消毒劑溶液狀態(tài)氣體狀態(tài)化學(xué)因素抗代謝藥物：磺胺類等；化學(xué)治療劑抗生素生物藥物素在評(píng)價(jià)表面消毒劑、化學(xué)殺菌劑、防腐劑、農(nóng)藥等藥效和毒性時(shí)，經(jīng)常采用以下3種指標(biāo)：最低抑制濃度（MIC）:是評(píng)定某化學(xué)藥物藥效強(qiáng)弱的指標(biāo)，指在一定條件下，某化學(xué)藥劑抑制特定微生物的最低濃度。半致死劑量（LD50）：是評(píng)定某藥物毒性強(qiáng)弱的指標(biāo)，指在一定條件下，某化學(xué)藥劑能殺死50％試驗(yàn)動(dòng)物時(shí)的劑量。最低致死劑量（MLD）：是評(píng)定某藥物毒性強(qiáng)弱的指標(biāo)，指在一定條件下，某化學(xué)藥物能引起試驗(yàn)動(dòng)物群體100％死亡率的最低劑量。

1、表面消毒劑表面消毒劑：對(duì)一切活細(xì)胞都有毒性，不能用作活細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)治療用的化學(xué)藥劑。石炭酸系數(shù)：在一定時(shí)間內(nèi)被試藥劑能殺死全部供試菌的最高稀釋度與達(dá)到同效的石炭酸的最高稀釋度的比率。

Antibioticsensitivitytesting2、抗代謝藥物的代表—磺胺類藥物抗代謝藥物：又稱代謝拮抗物或代謝類似物，是指一類在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與細(xì)胞內(nèi)必要代謝物的結(jié)構(gòu)相似，并可干擾正常代謝活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)。二氫蝶酸合成酶二氫葉酸合成酶二氫葉酸還原酶二氫蝶啶二氫蝶酸二氫葉酸四氫葉酸對(duì)氨基苯甲酸Glu