選修一知識點概括

無菌技術(shù)措施的選擇原則(1)考慮效果：滅菌的效果比消毒要好(2)考慮操作對象的承受能力：接無菌技術(shù)措施的選擇原則

種環(huán)或接種針等金屬用具一般用灼燒滅菌；培養(yǎng)皿等玻璃器皿用干熱滅菌；培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌。操作者雙手一般用酒精擦拭，即化學(xué)消毒。牛奶用巴氏消毒法。酒精消毒液中酒精濃度對效果的影響：70%的酒精殺菌效果最好。原因是濃度過高，菌體表面蛋白質(zhì)變性過快而凝固成一層保護(hù)膜，酒精不能滲入其中；濃度過低，殺菌能力減弱1．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基

(1)流程：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。(2)應(yīng)注意的問題①全程要求無菌操作，無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還能有效避免操作者自身被微生物感染。②熔化瓊脂時，要不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。熔化后應(yīng)調(diào)節(jié)pH后再分裝，裝入錐形瓶的量以不超過錐形瓶容積的一半為宜。③培養(yǎng)基用高壓滅菌鍋滅菌后，需冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。操作時使錐形瓶的瓶口通過火焰灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。④平板冷凝后皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高。因此需將平板倒置，這樣既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。⑤在倒平板的過程中，不能將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。2．純化大腸桿菌的方法

(1)平板劃線法：①平板劃線操作及培養(yǎng)結(jié)果：接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，將聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表面。：②每次劃線前后都要進(jìn)行灼燒接種環(huán)的目的灼燒時間目的第一次殺死接種環(huán)上原有的微生物，防止外來微生物干擾每次劃線前殺死上次劃線后殘留在接種環(huán)上的菌種，使下次劃線的菌種直接來自上次劃線末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少，達(dá)到分離菌體的目的接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免污染環(huán)境或感染操作者(2)稀釋涂布平板法：①主要操作環(huán)節(jié)：系列稀釋和涂布平板③稀釋涂布平板法操作比較復(fù)雜，且各個細(xì)節(jié)均需保證無菌操作，應(yīng)特別注意：a．酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要適宜。b．吸管頭不要接觸其他任何物體。c．吸管要在酒精燈火焰周圍使用。d．涂布器末端浸在盛有酒精的燒杯中，取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃，注意防火備注：1．單細(xì)胞菌落的獲得

(1)利用平板劃線法接種時，單細(xì)胞菌落從后劃線的區(qū)域挑取。(2)利用稀釋涂布平板法接種時，只有合適的稀釋度才能得到單細(xì)胞菌落。2．兩種接種方法的異同：兩種方法都能將微生物分散接種到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單細(xì)胞菌落，達(dá)到分離的目的；稀釋涂布平板法還能對微生物計數(shù)。課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)

一、篩選菌株的思路及統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法1．篩選菌株的思路(1)自然界中目的菌株的篩選①依據(jù)：根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。②實例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的TaqDNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細(xì)菌中提取出來的。(2)實驗室中目的菌株的篩選①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物的生長。②方法：利用選擇培養(yǎng)基分離二、實際設(shè)計及操作提示

1．實驗設(shè)計3．菌種鑒定

(1)原理：分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)。(2)方法：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。③注意事項

a．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置三個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)，并取平均值。b．統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。原因是當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。c．設(shè)置對照：主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。(2)其他方法：利用顯微鏡直接計數(shù)。直接計數(shù)法與間接計數(shù)法的比較直接計數(shù)法間接計數(shù)法主要用具顯微鏡、細(xì)菌計數(shù)板培養(yǎng)基計數(shù)依據(jù)菌株本身培養(yǎng)基上菌落數(shù)優(yōu)點計數(shù)方便、操作簡單計數(shù)的是活菌缺點死菌、活菌都計算在內(nèi)操作較復(fù)雜，且有一定誤差計算公式每毫升原液含菌株數(shù)＝400×10000×每小格平均菌株數(shù)×稀釋倍數(shù)每毫升原液含菌株數(shù)＝×稀釋倍數(shù)1．實驗設(shè)計原則

(1)設(shè)立重復(fù)組：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時，要至少涂布三個平板作重復(fù)組，增強(qiáng)實驗結(jié)果的說服力與準(zhǔn)確性。