學(xué)生用色譜分析法1-2013春

色譜分析法－色譜分色譜法 和發(fā) 粗葉綠

三要素：三要素：固定相－流動(dòng)相 原理分離植物色素經(jīng)典的液相色譜40年代紙色譜50年代薄層色譜色譜法氣相色

氣液色按流動(dòng)形狀和材按分離過

液相色分配

的機(jī)

離子交換空間排阻構(gòu)和性質(zhì)的差異，與固色譜法1.1. 色譜流出曲 檢測器輸出信號基死時(shí)間tM不被固定相吸附或溶解的物質(zhì)如空氣或甲烷進(jìn)入色譜柱死體積 F0:柱出口處流動(dòng)相的體積流保留體積VR=tR·F調(diào)整保留時(shí)間組份在固定相中實(shí)際停留的tR′=tR–調(diào)整保留體積VR′VR–V0tR′·度度量色譜峰區(qū)域?qū)挾韧ǔＳ腥N2ln2ln峰底標(biāo)準(zhǔn)偏差

Y1/2=Yb=Yσ=

=2.35保留死時(shí)間死體積

定性的保留時(shí)間 調(diào)整保留時(shí)間t保留體積 調(diào)整保留體積V相對保留值（選擇因子RtRt=r11區(qū)域?qū)?/p>

1RV=1RV=2衡量柱效率和反映色譜操作條件的動(dòng)峰峰面 定量分析的基從色譜圖上可以得到哪些息色譜峰保留

色譜峰面積或峰 定量A=K區(qū)域?qū)挾认噜弮煞宓拈g 評價(jià)兩組分能否分但也有幾色譜出峰的 置如何確3.3.相對保留＝21＝t’R(2t’R(1)=V’R(221越大，tR相差越大，組分分離得越分配一定溫度下組分在兩相之間分配達(dá)到平衡時(shí)的K＝CS/Cs：組分在固定相中的濃度;Cm：組分在流動(dòng)相中的濃每次分配后在氣相中的濃度大，因此出峰時(shí)間早，而具有大分配比κ＝mS/mMκ=(tR-tM)/tM=tR’/＝21=κ2/κ1=K2KCsKCsCS，Cm分別為組分在固定相和流動(dòng)相的濃度；Vm為柱中流動(dòng)相11分離氣固色譜分離過程－組分與吸附劑吸附能力的差異(Page氣液色譜分離過程－組分在固定液中溶解能力的差異(Page22(page試樣在色譜柱中分離過程的基本理論包括二色譜過程的動(dòng)力學(xué)，研究各組分在色譜過程中因此，要從熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)兩方面來研究33載組HL 載組HL塔板開始組份都加在0 組份的分KCLCG，在每個(gè)(3(3假設(shè)n=5=101230123進(jìn) 123V 由塔板理論可導(dǎo)出norH與峰寬的n理論=16(tR/Yb)2=5.54(tR/Y1/2) H理論=L/n理從上兩式可以看出，色譜峰Y越小，n就越大，而H小，柱效能越高。因此，n和H是描述柱效能的指,en有效=16tR’Yb25.54tR’Y1/2H有效=L/n

通常填充色譜柱的而毛細(xì)管柱n=105-當(dāng)色譜柱長度一定時(shí)，塔板數(shù)n越大(塔板高度H越不同物質(zhì)在同譜柱上的分配系數(shù)不同，用有效塔板分配系數(shù)K相同時(shí)，無論該色譜柱的塔板數(shù)多大，都無法分離。塔板理論無法解釋同譜柱在不同的載氣流速下柱效不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，也無法影響柱效的因素及提高柱效的評價(jià)柱效能高低的塔板數(shù)44（1（1）1956第姆特(VanDeemter)公式H=A+B/u+概括了影H的動(dòng)力學(xué)影響H的三項(xiàng)因素A：渦流擴(kuò)散項(xiàng)：分子擴(kuò)散項(xiàng)傳質(zhì)阻力

A=顆粒平均直t1≠t1

不規(guī)則因表示填充填充物不對空A0,要使H？’B=2γ彎彎曲氣體擴(kuò)散時(shí)的路徑彎曲即擴(kuò)散受要要B一定柱Dg份分子量↑載氣分子量↑柱溫要u↑即停留時(shí)間短，若停留時(shí)間長，則色譜峰擴(kuò)張注意:λ與γ是有區(qū)別的,填充物均勻λ↓,而γCu項(xiàng)Cu項(xiàng)—組分在組分在氣相任一移動(dòng)速度由氣相傳質(zhì)阻力系數(shù)GL界 C=Cg+GL組組分在液相中任一移動(dòng)速度由液相傳CgCg0.01k(1kidpDgCC2kdfl3(1k)2il若使CldfDlHminHminA 小H=HA+HB+HC=A+B/u+塔板高度塔板高度H與流速的關(guān)系dHBCu2uoptBC解釋固定對選擇操作條件具有指5.5.（1）（1）n作為柱效能即反映物質(zhì)在柱中達(dá)到但不能直接反映難分離物質(zhì)對A、B的實(shí)際兩兩個(gè)組分怎樣才算達(dá)到圖中（a）兩色譜峰距離近并且峰形寬。兩峰嚴(yán)重，這圖中（b）雖然兩峰距離拉開圖中（c）分離最理想，說明RRtR(2)1(Y1Y2反映了色譜過程的反映了色譜過程的（2）RR定量地描述了混合物中相鄰兩組分的實(shí)際分離果=1大，分離程度98%R=1.5（3）色譜分離方程式（（3）色譜分離方程式（R、k、n三者關(guān)系分離度R的定義并沒有反映影響分離度的n(α對于難分離物質(zhì)對，由于它們的分配系數(shù)可合理地假設(shè)三者關(guān)系R4n(R4n(1)

4nn有效16R2( )HLnRR容量因子分離系數(shù)α（即相對保留值γ2,1）柱效能n函使kk/(1+kR↑太大a.延長分析時(shí)間K一般在2— k＞10分離度提高不明顯＜2淋洗時(shí)間會(huì)出使n↑則增加柱長使n↑,延長分析時(shí)間設(shè)法使H↓，才是增加R↑的最好C.C.使α（α–1）/α↑Rα＞2α接近1(α=1.01分離時(shí)間是α=1.1時(shí)的84倍α=1由由此可見提高α是提高分離度的一般通過改變固定相或流動(dòng)相的性質(zhì)和組或降低柱溫，可有效增大α性分析(P c峰高增加法：將純樣A加入待測組分中進(jìn)行色譜分析，若色2.利用文獻(xiàn)值定 aa采用相對保留值 t'i(Rt's(Rris值對照，若二者一致，則為同一物bb（）II=100{(lgXi－lgXZ)/(lgXZ+1－lgXZ)+X－保留值，可用調(diào)整保留時(shí)間，調(diào)整保留體積表示－被測物Z，Z＋1－具有Z和Z＋1個(gè)碳原子數(shù)的正構(gòu)乙酸正丁酯310.0mm，正庚烷174.0mm，正辛烷373.4求乙酸正丁酯的保IIx100[7lg310.0lg174.0]775.6lg373.4lg174.0與其它退后 來判斷哪些官能團(tuán)存與質(zhì)譜，紅外，核 等儀器聯(lián)利用檢測器的選擇性進(jìn)行熱導(dǎo)池檢測器：對有機(jī)物，無機(jī)物均由火焰光度檢測器：對含S，P量度）與檢測器的響應(yīng)信號（峰高或峰面積）mifi 由上式可見，定量分析22A實(shí)際＝1.065A＝h×（Y0.15＋Y0.85）/h×Y1/2定量校正因子mmfAfi iAifi絕對校正因子，不易（2）相fffsAi,s分別代表被測物和標(biāo)準(zhǔn)物測測定方法：準(zhǔn)確稱取被測組分mi和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合后進(jìn)樣得到色分別測量峰面積Ai和As根據(jù)公式計(jì)算f相相對校正因子只與試樣、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和檢測器類型有關(guān)，操作條件、柱溫、載氣流速、固定液性質(zhì)一般來說，熱導(dǎo)池檢測器標(biāo)準(zhǔn)物用苯，火焰離子檢測4.幾種常用的色譜定量分使用條件：樣品中方法：a從色譜圖上測出各個(gè)組分的峰面積或WWi＝mi/m×100％＝mi/＝f’A/(f’A+f’A+…f’A+…+f’A 內(nèi)標(biāo)使用條件：只需測定樣品中某幾個(gè)組分或試樣中所有組能全部出峰時(shí)可采方法：a準(zhǔn)確稱取試樣m，加入一定量ms純物物，然后進(jìn)行色譜b被測物和內(nèi)標(biāo)物在色譜圖上相應(yīng)的峰面積（或峰mimimsmi＝fi’Ai/f’As×sWWi＝mi/m×100％=fi’Ai/fs’As×ms/mfi’AiAsmsm×100（內(nèi)標(biāo)物內(nèi)標(biāo)外標(biāo)法（定量進(jìn)樣－標(biāo)準(zhǔn) 方法：a將待測組分純物質(zhì)配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，b項(xiàng) 方歸一項(xiàng) 方歸一計(jì)算公x% Ai AfAf