食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定

食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽

的測(cè)定一、方法適用范圍及原理亞硝酸鹽采用鹽酸萘乙二胺分光光度法測(cè)定，方法的檢出限為1mg/kg,定量限為3mg/kg。硝酸鹽采用鎘柱還原法測(cè)定，方法的檢出限為10mg/kg，定量限為30mg/kg。

方法原理試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。采用鎘柱將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，測(cè)得亞硝酸鹽總量，由此總量減去亞硝酸鹽含量，即得試樣中硝酸鹽含量。二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備（一）試劑配制（二）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制（三）主要儀器（四）鎘柱（一）試劑配制試驗(yàn)用水應(yīng)為蒸餾水、純凈水或去離子水，不能用自來(lái)水。購(gòu)買試劑時(shí)要注意試劑名稱和分子式是否與標(biāo)準(zhǔn)方法一致。例如：亞鐵氰化鉀[K4Fe(CN)6.3H2O]、乙酸鋅[Zn(CH3COO)2.2H2O]、硼酸鈉[Na2B4O7.10H2O]、對(duì)氨基苯磺酸[C6H7NO3S]、鹽酸萘乙二胺[C12H14N2.2HCL]

氨緩沖溶液：量取30mL鹽酸，加100mL水，混勻后加65mL氨水，再加水稀釋至1000mL，混勻。調(diào)節(jié)pH至9.6～9.7（用PH計(jì)）。氨緩沖液的稀釋液：量取50mL氨緩沖溶液，加水稀釋至500mL，混勻。（二）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制購(gòu)買固體標(biāo)準(zhǔn)的，應(yīng)注意亞硝酸鈉（NaNO2）、硝酸鈉（NaNO3）均應(yīng)為優(yōu)級(jí)純（GR），稱量前，必須在硅膠干燥器中干燥24小時(shí)以上。購(gòu)買液體標(biāo)準(zhǔn)溶液的，應(yīng)注意其標(biāo)示的濃度是以N計(jì)、以NO2-計(jì)、以NO3-計(jì)，最后結(jié)果均應(yīng)換算成以NaNO2計(jì)。亞硝酸鈉、硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（200μg/mL，以NaNO2計(jì)）應(yīng)置棕色瓶中5℃以下冷藏保存，有效期6個(gè)月。亞硝酸鈉、硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.0μg/mL、以NaNO2計(jì)）、必須臨用前現(xiàn)配。

（三）主要儀器

小型絞肉機(jī)、粉碎機(jī)、勻漿機(jī)。天平：感量為0.1mg和1mg。分光光度計(jì)：2cm比色皿。鎘柱

（四）鎘柱的制備投入足夠的鋅皮或鋅棒于500mL硫酸鎘溶液(200g/L)中，放置3h～4h。當(dāng)鎘全部被鋅置換后，用玻璃棒輕輕刮下，取出殘余鋅棒，使鎘沉底，傾去上層清液，以水用傾瀉法多次洗滌（10次以上）。移入組織搗碎機(jī)中，加500mL水，搗碎約2s，用水將金屬細(xì)粒洗至標(biāo)準(zhǔn)篩上，取20目～40目之間的部分（顆粒大小約同食用鹽）。（四四））鎘鎘柱柱的的裝裝填填先用用水水裝裝滿滿鎘鎘柱柱玻玻璃璃管管，，然然后后裝裝入入2cm高的的玻玻璃璃棉棉做做墊墊，，將將玻玻璃璃棉棉壓壓向向柱柱底底時(shí)時(shí)，，應(yīng)將將其其中中所所包包含含的的空空氣氣全全部部排排出出。。在輕輕輕輕敲敲擊擊下下加加入入海海綿綿狀狀鎘鎘至至8cm～10cm高，，上上面面再再用用1cm高的的玻玻璃璃棉棉覆覆蓋蓋，，上上置置一一貯貯液液漏漏斗斗。。當(dāng)鎘鎘柱柱填填裝裝好好后后，，先先用用25mL鹽酸酸(0.1mol/L)洗滌滌，，再再以以水水洗洗兩兩次次，，每每次次25mL。鎘柱柱不不用用時(shí)時(shí)，，必必須須用用水水封封蓋蓋，，隨隨時(shí)時(shí)都都要要保保持持水水平平面面在在鎘鎘層層之之上上，，不不得得使使鎘鎘層層夾夾有有氣氣泡泡。。如無(wú)無(wú)上上述述鎘鎘柱柱玻玻璃璃管管時(shí)時(shí)，，可可以以25mL酸式式滴滴定定管管代代替替。。三、、樣品品接接收收收樣樣人人應(yīng)應(yīng)認(rèn)認(rèn)真真檢檢查查樣樣品品的的包包裝裝和和狀狀態(tài)態(tài)，，若若發(fā)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)異異常常，，應(yīng)應(yīng)與與送送樣樣人人達(dá)達(dá)成成處處理理決決定定。。送樣樣量量不不能能少少于于規(guī)規(guī)定定數(shù)數(shù)量量，，至至少少不不能能少少于于測(cè)測(cè)試試用用量量的的三三倍倍。。樣品品應(yīng)應(yīng)編編號(hào)號(hào)登登記記，，加加施施唯唯一一性性標(biāo)標(biāo)識(shí)識(shí)，，保保證證不不同同檢檢測(cè)測(cè)狀狀態(tài)態(tài)和和傳傳遞遞過(guò)過(guò)程程中中樣樣品品不不被被混混淆淆。。四、樣品的制制備和保存（一）樣品的的制備（二）樣品的的保存（一）樣品的的制備已粉碎的樣品品（鹽菜末等等），應(yīng)使用圓錐四分分法（堆成圓圓錐體——壓成扁平圓形形——?jiǎng)潈蓷l交叉直直線分成四等等份——取對(duì)角部分））進(jìn)行縮分。。未粉碎的樣品品（腌咸菜、、腌蘿卜條等等），應(yīng)間隔一定的的距離取多份份小塊四分法法進(jìn)行縮分。。已切成片或塊塊的禽肉類樣樣品（排骨、、雞爪等），，先室溫解凍凍，四分法法縮分。整塊的禽肉類樣品（（臘肉、烤鴨鴨等）在不同同部位切取小小片或截取小小段四分法縮縮分。（一）樣品的的制備將縮分后的樣樣品四分法分分成二份，一一份作留樣備備用（>100g），另一份切切細(xì)后用搗碎碎機(jī)搗碎混勻勻供分析(>50g)。當(dāng)送樣量不能能滿足留樣要要求時(shí)，全部部粉碎混勻，，在保證分析析樣用量后，，全部用作留留樣。樣品應(yīng)冷藏儲(chǔ)儲(chǔ)運(yùn)，在送達(dá)達(dá)實(shí)驗(yàn)室后要要盡快測(cè)定。。蔬菜類樣品應(yīng)應(yīng)用食品塑料料袋裝好，在在5℃以下冰箱冷藏藏保存。禽肉類樣品應(yīng)應(yīng)用食品塑料料袋裝好，在在-18℃以下的冰柜或或冰箱冷凍保保存。（二）樣品的的保存五、試驗(yàn)步驟驟（一）試樣前前處理。（二）試劑空空白制備。（三）標(biāo)準(zhǔn)曲曲線制備。（四）測(cè)定。。（一）試樣前前處理硼砂飽和液作作用：硼砂溶入水中中，即被水解解為等量的硼硼酸與硼酸二二氫鈉，起緩緩沖溶液作用用。溶液pH約為9.18，即堿性。在在堿性下處理理樣品有幾方方面作用：（1）是鋅鹽沉淀淀蛋白質(zhì)時(shí)，，要求在堿性性。（2）是堿性下處處理肉制品，，脂肪被皂化化，減少樣品品被脂肪包裹裹，使亞硝基基根更易提取取到水溶液中中。（3）是溶液在堿堿性下亞硝基基根以離子存存在，易溶且且穩(wěn)定，如溶溶液偏酸性，，則形成亞硝硝酸，在加熱熱下容易揮發(fā)發(fā)，也易分解解，造成損失失。（二）試劑空空白制備于50mL燒杯中，加12.5mL硼砂飽和液，，以70℃左右的水約300mL將試樣洗入500mL容量瓶中，于于沸水浴中加加熱15min，取出后冷卻卻至室溫。然然后一面轉(zhuǎn)動(dòng)動(dòng)，一面加入入5mL亞鐵氰化鉀溶溶液，搖勻，，再加入5mL乙酸鋅溶液。。加水至刻度度，搖勻，放放置0.5h，清液用濾紙紙過(guò)濾，棄去去初濾液30mL，濾液備用。。（三）標(biāo)準(zhǔn)曲曲線制備（1）曲線至少作作5個(gè)點(diǎn)（不包括括空白）。（2）線性范圍內(nèi)內(nèi)相關(guān)系數(shù)應(yīng)應(yīng)大于0.9990。（3）測(cè)試溶液中中被測(cè)組分濃濃度必須在校校準(zhǔn)曲線的線線性范圍內(nèi)。。（四）測(cè)定亞硝酸鹽測(cè)定定（1）鹽酸萘乙二胺胺溶液易變質(zhì)質(zhì)，最好臨用用時(shí)新配。（2）用2cm比色杯，以零零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)點(diǎn)，于波長(zhǎng)538nm處測(cè)吸光度。。（四）測(cè)定硝酸鹽的測(cè)定定（1）鎘柱還原效效率的測(cè)定（2）樣品濾液經(jīng)經(jīng)鎘柱還原（3）亞硝酸鈉總量量的測(cè)定（1）鎘柱還原效率率的測(cè)定先用25mL鹽酸(0.1mol/L)洗滌，再以水洗2次，每次25mL,流速控制在3mL/min～5mL/min(1-2滴/秒)。吸取20mL硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使使用液，加入入5mL氨緩沖液的稀稀釋液，混勻后注入入貯液漏斗，，使流經(jīng)鎘柱柱還原，以原原燒杯收集流流出液。當(dāng)貯液漏斗中中的樣液流完完后，再加5mL水置換柱內(nèi)留留存的樣液。。（1）鎘柱還原效率率的測(cè)定將全部收集液液如前再經(jīng)鎘柱還原原一次，第二次次流出液收集集于100mL容量瓶中，繼以水流經(jīng)鎘鎘柱洗滌三次次，每次20mL，洗液一并收集集于同一容量量瓶中，加水水至刻度，混混勻。得到還原后溶溶液為100mL。（1）鎘柱還原效率率的測(cè)定取10.0mL還原后的溶液液（相當(dāng)10μg亞硝酸鈉）于于50mL比色管中，加加入2mL對(duì)氨基苯磺酸酸溶液，混勻勻，靜置3min～5min后各加入1mL鹽酸萘乙二胺胺溶液，加水水至刻度，混混勻，靜置15min，用2cm比色杯，以空空白管調(diào)節(jié)零零點(diǎn)，于波長(zhǎng)長(zhǎng)538nm處測(cè)吸光度，，代入標(biāo)準(zhǔn)曲曲線計(jì)算含量量。（1）鎘柱還原效率率的測(cè)定還原效率計(jì)算算：X=A×100/10X——還原效率，%A——由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)計(jì)算測(cè)得的亞亞硝酸鈉的含含量，單位為為微克（μg）10——測(cè)定用溶液中中亞硝酸鈉的的含量，單位位為微克（μg）（1）鎘柱還原效率率的測(cè)定還原效率大于于98%為符合要求。。若不符合要求求，則繼續(xù)用用25mL鹽酸(0.1mol/L)洗滌，再以水水洗兩次，每每次25mL。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，，隨時(shí)保持鎘鎘柱在水平面面以下，加液液時(shí)沿貯液漏漏斗管壁勻速速加入，避免免鎘柱內(nèi)產(chǎn)生生氣泡。多次洗滌后，，還原效率還還不符合要求求，應(yīng)該重新新制備裝填鎘鎘柱。（2）樣品濾液經(jīng)經(jīng)鎘柱還原先以以25mL氨緩緩沖沖液液的的稀稀釋釋液液沖洗洗鎘鎘柱柱，，流流速速控控制制在在3mL/min～5mL/min（約約1-2滴/秒））。。吸取取20mL濾液液于于50mL燒杯杯中中，，加5mL氨緩緩沖沖溶溶液液，混混合合后后注注入入貯貯液液漏漏斗斗，，使使流流經(jīng)經(jīng)鎘鎘柱柱還還原原，，以以原原燒燒杯杯收收集集流流出出液液。。當(dāng)貯貯液液漏漏斗斗中中的的樣樣液液流流完完后后，，再再加加5mL水置置換換柱柱內(nèi)內(nèi)留留存存的的樣樣液液。。隨時(shí)時(shí)都都要要保保持持水水平平面面在在鎘鎘層層之之上上，，不不得得使使鎘鎘層層夾夾有有氣氣泡泡。。將全全部部收收集集液液如如前前再再經(jīng)經(jīng)鎘鎘柱柱還還原原一一次次，，第第二二次次流流出出液液收收集集于于100mL容量量瓶瓶中中，，繼繼以以水水流流經(jīng)經(jīng)鎘鎘柱柱洗洗滌滌三次次，每每次次20mL，洗洗液液一一并并收收集集于于同同一一容容量量瓶瓶中中，，加加水水至至刻刻度度，，混混勻勻。。（3）亞硝硝酸酸鈉鈉總總量量的的測(cè)測(cè)定定吸取取20mL還原原后后的的樣樣液液于于50mL比色色管管中中，，分分別別加加入入2mL對(duì)氨氨基基苯苯磺磺酸酸溶溶液液，，混混勻勻，，靜靜置置3min～5min后各各加加入入1mL鹽酸酸萘萘乙乙二二胺胺溶溶液液，，加加水水至至刻刻度度，，混混勻勻，，靜靜置置15min，用用2cm比色色杯杯，，以以空空白白管管調(diào)調(diào)節(jié)節(jié)零零點(diǎn)點(diǎn)，，于于波波長(zhǎng)長(zhǎng)538nm處測(cè)測(cè)吸吸光光度度。。代代入入標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲曲線線計(jì)計(jì)算算。。六、、結(jié)結(jié)果果計(jì)計(jì)算算試劑劑空空白白不不為為零零時(shí)時(shí)應(yīng)應(yīng)扣扣除除。。樣品品溶溶液液有有顏顏色色時(shí)時(shí)，，應(yīng)應(yīng)先先不不加加顯顯色色劑劑測(cè)測(cè)定定吸吸光光度度，，再再?gòu)膹募蛹语@顯色色劑劑后后測(cè)測(cè)得得的的吸吸光光度度中中扣扣除除。。亞硝硝酸酸鹽鹽含含量量結(jié)結(jié)果果應(yīng)應(yīng)換換算算成成以以NaNO2計(jì)，，并并保保留留兩兩位位有有效效數(shù)數(shù)字字。。在重重復(fù)復(fù)性性條條件件下下獲獲得得的的兩兩次次獨(dú)獨(dú)立立測(cè)測(cè)定定結(jié)結(jié)果果的的絕絕對(duì)對(duì)差差值值不不得得超超過(guò)過(guò)算算術(shù)術(shù)平平均均值值的的10%。六、、結(jié)結(jié)果果計(jì)計(jì)算算硝酸酸鹽鹽含含量量的的計(jì)計(jì)算算（（以以NaNO3計(jì)）X2=(X-X1)××