NEB產(chǎn)品知識(shí)和市場(chǎng)培訓(xùn)教材

NEB產(chǎn)品知識(shí)和市場(chǎng)培訓(xùn)

2001年8月市場(chǎng)與技術(shù)支持部第一部分NEB廠家背景回顧美國(guó)總部：Beverly,MA1975~2001支柱產(chǎn)品——工具酶先進(jìn)的基因克隆和高表達(dá)體系的構(gòu)建技術(shù)120種自主開發(fā)的酶60多種酶是由NEB首先篩選到并進(jìn)入商品化生產(chǎn)二十五年的生產(chǎn)歷史國(guó)際化的生產(chǎn)和營(yíng)銷網(wǎng)絡(luò)在全世界35個(gè)國(guó)家和地區(qū)有分銷商美國(guó)、英國(guó)、德國(guó)、加拿大四個(gè)生產(chǎn)基地專業(yè)水準(zhǔn)的廠商發(fā)酵中心——生產(chǎn)部酶制備和DNA重組技術(shù)中心——研發(fā)部分子生物學(xué)和寄生蟲學(xué)研究中心——基礎(chǔ)研究院第二部分NEB產(chǎn)品講解核酸工具酶DNA限制性內(nèi)切酶DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶Vent系列的PCR聚合酶DNA/RNA修飾酶單位的定義

在50l反應(yīng)體系中，1小時(shí)內(nèi)，完全消化1g的DNA所 需要的酶量為1Unit

包裝與規(guī)格常用酶大多數(shù)為10U/l

緩沖液4種不同顏色標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液和特定緩沖液

稀釋液

分為A、B、C三種，依表詢

儲(chǔ)藏條件在不被稀釋的情況下，可長(zhǎng)期存放在零下20度長(zhǎng)達(dá)20之久DNA限制性內(nèi)切酶嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗(yàn)：非特異性的內(nèi)切酶活性檢測(cè)核酸酶污染檢測(cè)外切酶污染檢測(cè)藍(lán)白斑篩選檢測(cè)DNA限制性內(nèi)切酶針對(duì)于常用在克隆實(shí)驗(yàn)中的酶檢驗(yàn)過量酶切對(duì)DNA末端的完整性是否有破壞NEB自主克隆的酶基因從重組菌株中提純的酶隨酶另附一管BSA酶識(shí)別位點(diǎn)被dam或dcm甲基化后不能被切動(dòng)酶是否耐熱經(jīng)過藍(lán)白斑法檢測(cè)目錄書中出現(xiàn)的標(biāo)志符號(hào)的含義最佳的工具酶反應(yīng)溫度酶所對(duì)應(yīng)的緩沖液編號(hào)DNA限制性內(nèi)切酶Homing核酸內(nèi)切酶識(shí)別12-40堿基的長(zhǎng)的、對(duì)稱識(shí)別位點(diǎn)的稀有內(nèi)切酶

同裂酶的概念識(shí)別同一酶切位點(diǎn)的一組內(nèi)切酶

BSA的作用酶保護(hù)劑，在反應(yīng)中保證酶具有最佳的活性DNA限制性內(nèi)切酶小常識(shí)：NEB限制制性內(nèi)內(nèi)切酶酶的賣賣點(diǎn)：：種類非非常齊齊全，，（豐豐富的的稀有有酶））穩(wěn)定性性好，，存放放時(shí)間間長(zhǎng)價(jià)格在在進(jìn)口口酶類類里適適中質(zhì)量可可靠DNA限制性內(nèi)切酶DNA/RNA聚合酶DNA或RNA的探探針標(biāo)標(biāo)記3’末末端和和5’’末端端的補(bǔ)補(bǔ)平3’末末端的的堿基基置換換DNA測(cè)序序反應(yīng)應(yīng)、定定點(diǎn)突突變和和轉(zhuǎn)錄錄3’末末端突突出的的切平平特性性：：以單鏈鏈DNA或或RNA為為模板板，從從5’’端向向3’’端合合成新新鏈應(yīng)用用性能指指標(biāo)：：5’端端向3’端端的外外切活活性3’端端向5’端端的外外切活活性聚合速速度錯(cuò)配率率耐熱性性延伸能能力常用的的種類類：E.coliDNAPolymeraseIKlenowFragment（（3’’—5’exo-）T4DNAPolymeraseTerminalTransferaseM-MuLVReverseTranscriptase*M-MuLVReverseTranscriptase（RNaseH-）T7/Sp6RNAPolymeraseDNA/RNA聚合酶NEBVent系列聚合酶VentDNAPolymerase主要應(yīng)應(yīng)用：：常規(guī)規(guī)PCR擴(kuò)擴(kuò)增雙脫氧氧法測(cè)測(cè)序NEBVent系列聚合酶VentDNAPolymerase與常規(guī)規(guī)Taq酶酶的錯(cuò)錯(cuò)配率率比較較賣點(diǎn)：：高保真真耐熱性性非常常好DNA/RNA修飾酶DNA/RNAModifyingEnzyme連接酶酶………………………………………Ligase激酶……………………………………………Kinase堿性磷磷酸酶酶………………………………PhosphataseBeta瓊瓊脂糖糖酶……………………………Agarase甲基化化酶……………………………………Methylase核酸酶酶………………………………………Nuclease外切酶酶………………………………………Exonulease內(nèi)切酶酶………………………………………EndonuleaserecA重重組蛋蛋白酶酶………………………recAProteinDNA/RNA修飾酶重點(diǎn)產(chǎn)產(chǎn)品：：T4DNALigase單位定定義：：20000NEBUnit=300WeissUnit4000NEBUnit=60WeissUnitT4PolynucleotideKinase（（T4PNK））對(duì)DNA5’末末端進(jìn)進(jìn)行磷磷酸化化，用用于探探針標(biāo)標(biāo)記或或克隆隆AlkalinePhosphatase,CalfIntesinal（（CIP）去除DNA5‘和和3’’的磷磷酸基基團(tuán)，，用于于制備備5‘‘的置置換標(biāo)標(biāo)記記和載載體克克隆，，阻止止載體體的自自我連連接。。分子量標(biāo)準(zhǔn)DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)常用類類型：：整數(shù)數(shù)分子子量的的Marker1kbDNALadder2-logDNALadder100bpDNALadderNEW噬菌體體DNA和和質(zhì)粒粒DNA酶消化化型的的DNA分分子量量標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)非整數(shù)數(shù)型的的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)PGF分分子量量標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)DNA被包包埋在在凝膠膠中，，以注注射器器的形形式包包裝用于幾幾十kb至至上千千kb的DNA分離離時(shí)的的Marker脈沖電電泳分分離分子量量種類類：LowRangeMidRangeLambdaLadderYeastChromosomeRNA分分子量量標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)適用于于普通通凝膠膠或變變性膠膠條帶為為整數(shù)數(shù)的分分子量量RNA分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白分分子量量標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)普通型型………………2-212kDa（（精精確））預(yù)染型型………………6-175kDa（（估估計(jì)））HRP蛋白白Marker檢測(cè)測(cè)包6.5-165kDa（Biotin標(biāo)記記，BiotinAb）蛋白工具酶蛋白酶酶內(nèi)切糖糖苷酶酶外切糖糖苷酶酶蛋白激激酶和和抑制制劑蛋白磷磷酸化化酶和和抑制制劑FactorXaProtease探針標(biāo)記雜交檢測(cè)NEBlotKit隨機(jī)引引物法法探針針標(biāo)記記試劑劑盒下游應(yīng)應(yīng)用：：文庫(kù)篩篩選Southern/Northern原位雜雜交賣點(diǎn)點(diǎn)：：標(biāo)記的的dNTP參入入率高高模板用用量在在25ng到2ug半小時(shí)時(shí)即可可完成成標(biāo)記記反應(yīng)應(yīng)可用于于多種種類型型的標(biāo)標(biāo)記dNTP（（同位位素或或非同同位素素標(biāo)記記）NEBlotPhototopeKit隨機(jī)引引物法法生物素素探針標(biāo)標(biāo)記試試劑盒盒用于化化學(xué)發(fā)發(fā)光檢檢測(cè)與Phptotope-StarChemiluminescentDetectionKit配配合使使用生物素素標(biāo)記記的探探針穩(wěn)穩(wěn)定，，可長(zhǎng)長(zhǎng)時(shí)間間存放放雜交后后可洗洗脫下下來，，進(jìn)行行反復(fù)復(fù)雜交交Phptotope-StarChemiluminescentDetectionKit賣點(diǎn)點(diǎn)：：靈敏度度同位位素檢檢測(cè)法法相當(dāng)當(dāng)曝光時(shí)時(shí)間短短，只只需10-70分鐘鐘信號(hào)穩(wěn)穩(wěn)定，，可通通過改改變曝曝光時(shí)時(shí)間來來摸索索最佳佳的信信號(hào)強(qiáng)強(qiáng)度第三部部分NEB蛋蛋白白表達(dá)達(dá)產(chǎn)品品介紹紹pMAL蛋蛋白白融合合表達(dá)達(dá)與純化化系統(tǒng)統(tǒng)賣點(diǎn)點(diǎn)：生產(chǎn)級(jí)級(jí)別的的應(yīng)用用高水平平表達(dá)達(dá)量－－1升培培養(yǎng)上上清可可達(dá)到到100mg的的蛋白白產(chǎn)量量與MBP融融合表表達(dá)可可以增增加蛋蛋白的的溶解解性IMPACT蛋蛋白表表達(dá)與純化化系統(tǒng)統(tǒng)賣點(diǎn)點(diǎn)：應(yīng)用了了蛋白白內(nèi)含含肽自自我剪剪切技技術(shù)無需蛋蛋白酶酶去除除標(biāo)簽簽，只只需一一次過過柱純純化過過程Intein可可接在在蛋白白的C端或或N端端IMPACT-CNSystemIMPACT-TWINSystem賣點(diǎn)點(diǎn)：應(yīng)用了了蛋白白內(nèi)含含肽自自我剪剪切技技術(shù)，，將兩兩個(gè)Intein接接在目目的蛋蛋白的的兩端端。無需蛋蛋白酶酶去除除標(biāo)簽簽，只只需一一次過過柱純純化過過程Intein行行使剪剪切功功能后后，可可在目目的蛋蛋白兩兩端產(chǎn)產(chǎn)生帶帶S的的氨基基和羧羧基，，可環(huán)環(huán)化，，可標(biāo)標(biāo)記第三部部分NEB英文文目錄錄附錄錄的內(nèi)內(nèi)容介介紹NEBcutterV1.0內(nèi)容一一分分子生生物學(xué)學(xué)數(shù)據(jù)據(jù)庫(kù)索索引REBASE限限制性性內(nèi)切切酶數(shù)數(shù)據(jù)庫(kù)庫(kù)3100種種限制制性酶酶的相相關(guān)信信息酶的基基因序序列、、甲基基化敏敏感位位點(diǎn)、、結(jié)構(gòu)構(gòu)………5600篇篇參考考文獻(xiàn)獻(xiàn)InBase內(nèi)內(nèi)含肽肽數(shù)據(jù)據(jù)庫(kù)分子生生物學(xué)學(xué)數(shù)據(jù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)網(wǎng)址總總匯224個(gè)網(wǎng)網(wǎng)址可按功功能領(lǐng)領(lǐng)域分分類查查找內(nèi)容二二工工具酶酶常用用查詢?cè)儽硪悦缸R(shí)識(shí)別序序列分分類的的索引引同裂酶酶索引引限制性性內(nèi)切切酶的的發(fā)展展歷史史和知知識(shí)背背景NEBuffer的的酶－－活活性性對(duì)照照表雙酶切切緩沖沖液選選擇表表酶－稀稀釋液液對(duì)照照查詢?cè)儽硐拗菩孕悦冈谠谝镂镅由焐旆磻?yīng)應(yīng)中的的活性性表限制性性核酸酸內(nèi)切切酶的的熱失失活對(duì)對(duì)照表表酶切反反應(yīng)酶酶用量量查詢?cè)儽硌a(bǔ)平反反應(yīng)新新酶識(shí)識(shí)別位位點(diǎn)查查詢表表相同粘粘端酶酶查詢?cè)儽硐拗菩孕悦缸R(shí)識(shí)別位位點(diǎn)中中甲基基化位位點(diǎn)查查詢表表內(nèi)容三三分分子生生物學(xué)學(xué)常用用工具具表常用E.coli菌菌株表表型及及基因因型查查詢表表常用遺遺傳標(biāo)標(biāo)記NEB菌株株描述述遺傳密密碼表表氨基酸酸化學(xué)學(xué)結(jié)構(gòu)構(gòu)常用單單位換換算常用載載體上上的酶酶識(shí)別別位點(diǎn)點(diǎn)出現(xiàn)現(xiàn)頻率率常用載載體的的酶切切圖譜譜內(nèi)容四四分分子子生物物學(xué)實(shí)實(shí)驗(yàn)Protocol瓊脂糖糖包埋埋的DNA的限限制性性酶消消化基因組組酶消消化的的選擇擇指導(dǎo)導(dǎo)甲基化化酶反反應(yīng)第五部部分NEB銷售統(tǒng)統(tǒng)計(jì)分分析單位：：萬美美金QIAGENClontechNEB分子生生物學(xué)學(xué)試劑劑產(chǎn)品品銷售售比例例統(tǒng)計(jì)2000.4~2001.32000.