免疫學(xué)檢驗(yàn)第十三章凝集反應(yīng)

免疫學(xué)檢驗(yàn)第十三章凝集反應(yīng)第一頁，共四十頁，2022年，8月28日早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。--肥達(dá)試驗(yàn)至1903年，Landsteiner在特異性血凝現(xiàn)象的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型，并于1930年獲得了諾貝爾醫(yī)學(xué)獎。

--血型鑒定凝集反應(yīng)的發(fā)現(xiàn)第二頁，共四十頁，2022年，8月28日凝集反應(yīng)的定義凝集反應(yīng)：

顆粒性抗原（細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒（紅細(xì)胞、聚苯乙烯乳膠顆粒、炭粒）后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。第三頁，共四十頁，2022年，8月28日可見反應(yīng)形成第四頁，共四十頁，2022年，8月28日陰性？陽性？第五頁，共四十頁，2022年，8月28日凝集反應(yīng)的分型凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)抗球蛋白試驗(yàn)第六頁，共四十頁，2022年，8月28日第一節(jié)直接凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)：

顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。第七頁，共四十頁，2022年，8月28日凝集原(agglutinogen)：凝集反應(yīng)中的抗原。凝集素(agglutinin)：凝集參與反應(yīng)的抗體第八頁，共四十頁，2022年，8月28日（一）玻片凝集試驗(yàn)第九頁，共四十頁，2022年，8月28日方法評價:定性試驗(yàn)簡便和快速敏感度低應(yīng)用:菌種鑒定血清學(xué)分型血型鑒定第十頁，共四十頁，2022年，8月28日

在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。（二）試管凝集試驗(yàn)第十一頁，共四十頁，2022年，8月28日0.50.50.50.50.5棄掉0.5

試管凝集試驗(yàn)原理結(jié)果

1234567菌液第十二頁，共四十頁，2022年，8月28日

結(jié)果+很小的凝集顆?；鞚?無凝集現(xiàn)象與對照相同++小、部分凝集塊中等混濁+++大多凝集管底輕度混濁++++大的凝集塊清亮凝集程度沉淀上清第十三頁，共四十頁，2022年，8月28日管底沉淀凝集程度第十四頁，共四十頁，2022年，8月28日方法評價：半定量試驗(yàn)簡便、快速敏感度低可有假陽性臨床應(yīng)用：肥達(dá)試驗(yàn)外斐試驗(yàn)交叉配血試驗(yàn)第十五頁，共四十頁，2022年，8月28日第二節(jié)間接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng):

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象.第十六頁，共四十頁，2022年，8月28日載體可溶性抗原致敏致敏顆粒NS凝集顆粒

間接凝集試驗(yàn)示意圖第十七頁，共四十頁，2022年，8月28日常用載體紅細(xì)胞--間接血凝試驗(yàn)聚苯乙烯乳膠--膠乳凝集試驗(yàn)第十八頁，共四十頁，2022年，8月28日1、正向間接凝集試驗(yàn)2、反向間接凝集試驗(yàn)3、間接凝集抑制試驗(yàn)4、協(xié)同凝集試驗(yàn)間接凝集反應(yīng)的類型第十九頁，共四十頁，2022年，8月28日用抗原致敏載體--檢測抗體正向間接凝集試驗(yàn)第二十頁，共四十頁，2022年，8月28日反向間接凝集試驗(yàn)用抗體致敏載體----檢測抗原第二十一頁，共四十頁，2022年，8月28日間接凝集抑制試驗(yàn)用抗原致敏載體--檢測抗原第二十二頁，共四十頁，2022年，8月28日間接凝集抑制試驗(yàn)待測抗原已知抗體特異結(jié)合抗原抗體復(fù)合物NS＋致敏顆粒無凝集顆粒陽性第二十三頁，共四十頁，2022年，8月28日間接凝集抑制試驗(yàn)待測抗原已知抗體無結(jié)合抗原抗體分散NS＋致敏顆粒有凝集顆粒陰性第二十四頁，共四十頁，2022年，8月28日SPA:SPA-IgG

Fc;SPA抗體致敏------測抗原協(xié)同凝集試驗(yàn)第二十五頁，共四十頁，2022年，8月28日

原理圖IgGSPASPA-IgG

待測抗原SPA-IgG-待測抗原凝集顆?；旌霞尤氲诙?，共四十頁，2022年，8月28日間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用抗原的檢測

反向間接凝集試驗(yàn)可用于檢測病原體的可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質(zhì)成分。抗體的檢測

檢測細(xì)菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體。

第二十七頁，共四十頁，2022年，8月28日抗球蛋白試驗(yàn)又稱Coombs試驗(yàn)第三節(jié)

抗球蛋白試驗(yàn)第二十八頁，共四十頁，2022年，8月28日（一）直接Coombs試驗(yàn)不完全抗體檢測紅細(xì)胞上抗體第二十九頁，共四十頁，2022年，8月28日（二）間接Coombs試驗(yàn)檢測血清中的抗紅細(xì)胞抗體第三十頁，共四十頁，2022年，8月28日臨床應(yīng)用：在輸血上的應(yīng)用血型抗原抗體的檢查對新生兒溶血性貧血性疾病的診斷對溶血性貧血的研究對細(xì)菌或立克次體的不完全抗體檢查第三十一頁，共四十頁，2022年，8月28日

冷凝集試驗(yàn)原理抗原決定簇隱含，不能與抗體結(jié)合混合暴露的抗原決定簇與抗體結(jié)合混合37℃4℃37℃第三十二頁，共四十頁，2022年，8月28日膠乳凝集試驗(yàn)--類風(fēng)濕因子檢測第三十三頁，共四十頁，2022年，8月28日抗自身變性IgG抗體，屬于IgM類，主要存在于血清中。約90%類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者的RF呈陽性。某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進(jìn)行性全身性硬化癥、干燥綜合征、SLE等患者都有較高的陽性率；一些其他疾病如血管炎、肝病、慢性感染也可出現(xiàn)RF。類風(fēng)濕因子RF第三十四頁，共四十頁，2022年，8月28日其病因及發(fā)病機(jī)制仍不完全明了,機(jī)體出現(xiàn)免疫系統(tǒng)紊亂,進(jìn)而引起關(guān)節(jié)滑膜、軟骨組織慢性炎癥和破壞的自身免疫性疾病。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎RA第三十五頁，共四十頁，2022年，8月28日RF可與IgG的Fc段結(jié)合。將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，此致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時，即可發(fā)生肉眼可見的凝集。乳膠凝集試驗(yàn)第三十六頁，共四十頁，2022年，8月28日類風(fēng)濕膠乳診斷試劑RF陰性對照RF陽性對照反應(yīng)板攪拌棒主要的試劑和器材第三十七頁，共四十頁，2022年，8月28日取陽性血清、陰性血清各1滴于反應(yīng)板上，然后分別加類風(fēng)濕膠乳診斷試劑1滴。用攪拌棒充分混勻后，輕輕搖動反應(yīng)板2～3min，觀察結(jié)果。步驟第三十八頁，共四十頁，2022年，8月28日在室內(nèi)的光線下觀察，有清晰的凝集顆粒出現(xiàn)，且液體澄清者為RF陽性結(jié)果觀察和判斷第三十九頁，共四