色譜檢測技術(shù)

第8講色譜檢測技術(shù)施用于作物上的農(nóng)藥，其中一部分附著于作物上，一部分散落在土壤、大氣和水等環(huán)境中，環(huán)境殘存的農(nóng)藥中的一部分又會被植物吸收。殘留農(nóng)藥直接通過植物果實或水、大氣到達人、畜體內(nèi)，或通過環(huán)境、食物鏈最終傳遞給人、畜，嚴重危害人們的健康。

開展全面、系統(tǒng)的農(nóng)藥殘留監(jiān)測工作能夠及時掌握農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的狀況和規(guī)律，查找農(nóng)藥殘留形成的原因，從根本上消除安全隱患。農(nóng)藥殘留基本內(nèi)容一、色譜法概述二、色譜分離過程三、色譜圖四、色譜分類五、色譜圖存在問題、原因及解決方法六、色譜檢測技術(shù)的應用七、課堂小結(jié)八、作業(yè)一、色譜法概述色譜法是一種以吸附或分配平衡為基礎(chǔ)的分離方法，由于混合物中各組分之間的理、化性質(zhì)的差異導致吸附性能或分配系數(shù)的差異，它們以不同的組分分配到互不相溶的兩相中，當兩相相對運動時，各組分在兩相中反復多次重新分配，結(jié)果會使混合物得到分離。該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。

色譜分離過程主要是利用試樣中各組分在固定相和流動相間具有不同的溶解和解析能力；或不同的吸附和脫附能力；或其它親和性能的差異。

二、色譜分離過程

試樣中各組分經(jīng)色譜柱分離后，按先后次序經(jīng)過檢測器時，檢測器就將流動相中各組分濃度變化轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳碾娦盘枺捎涗泝x所記錄下的信號——時間曲線或信號——流動相體積曲線，稱為色譜流出曲線，或色譜圖。三、色譜圖一張色譜圖雙黃連黃芩苷：保留時間12.048min四、色譜分類

1、按兩相狀態(tài)分為液相色譜和氣相色譜：

液相色譜被分離的物質(zhì)處于液態(tài)混合物中，固定相可以是液體、固體、帶有化學鍵和基團的固體等。

高效液相色譜儀由高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)等五大部分組成。四、色譜分類

氣相色譜法被分離的物質(zhì)處于氣態(tài)混合物中，固定相可以是液體、固體、帶有化學鍵合基團的固體等。

氣相色譜儀的組成包括：氣路系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)---填充柱和毛細管柱、溫度控制系統(tǒng)（色譜爐與濕控電路）、檢測與數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。四、色譜分類

四、色譜分類

紙色譜法柱色譜法薄層色譜法123四、色譜分類

2、按固定相的幾何形式分類①柱色譜法是將固定相裝在一金屬或玻璃柱中或是將固定相附著在毛細管內(nèi)壁上做成色譜柱，試樣從柱頭到柱尾沿一個方向移動而進行分離的色譜法。四、色譜分類

②紙色譜法是利用濾紙作固定液的載體，把試樣點在濾紙上，然后用溶劑展開，各組分在濾紙的不同位置以斑點形式顯現(xiàn)，根據(jù)濾紙上斑點位置及大小進行定性和定量分析。四、色譜分類

③薄層色譜法是將適當粒度的吸附劑作為固定相涂布在平板上形成薄層，然后用與紙色譜法類似的方法操作以達到分離目的。四、色譜分類

五、高效液相色譜圖存在問題、原因及解決方法液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。1、峰拖尾原因1、流動相PH選擇不當2、干擾峰3、樣品與填料表面殘留硅羥基發(fā)生反應解決方法調(diào)整PH值。a、使用更長的色譜柱。b、改變流動相或更換色譜柱。a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑b、更換色譜柱1、峰拖尾2、峰前延原因1、樣品過載2、樣品溶劑選擇不恰當3、柱溫低解決方法降低樣品含量。使用流動相作為樣品溶劑。升高柱溫2、峰前延3、峰分叉原因1、保護柱或分析柱污染2、樣品溶劑不溶于流動相解決方法1、取下保護柱再進行分析。2、改變樣品溶劑。3、峰分叉4、保留時間波動原因色譜柱沒有平衡流動相組分變化溫控不當解決方法在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱防止變化（蒸發(fā)、反應等）

調(diào)好柱溫4、保留時間波動六、色譜檢測技術(shù)的應用1、在中草藥分析中的應用測定前先提取分離有效成分，再測定

①提取凈化方法：溶劑提取、超聲、固相萃取柱（加壓使樣品進入柱再水、甲醇洗，收集醇液進樣）。②測定藥物：如復方甘草沖劑中的甘草酸和綠原酸。中藥規(guī)定的含量限度為多成分之和序號品名檢測成分測定方法含量限度（%）1人參人參皂苷Rg1和Re、的總量；Rb1HPLC≥0.30；0.22人參葉人參皂苷Rg1、Re的總量HPLC≥2.253兒茶兒茶素和表兒茶素的總量HPLC≥21.04三七人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的總量HPLC≥5.05木香木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯HPLC≥1.86木通齊墩果酸、常春藤皂苷元HPLC≥0.157瓦松槲皮素、山奈素HPLC≥0.028西紅花西紅花苷-I、西紅花苷-II≥10.09西洋參人參皂苷Rg1、Re、Rb1的總量HPLC≥2.010大黃蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的總量HPLC≥1.511防己粉防己堿、防己諾林HPLC≥1.612防風升麻甙和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量HPLC≥0.2413紅參人參皂苷Rg1和Re、的總量；Rb1HPLC≥0.25；0.2014吳茱萸吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總量HPLC≥0.1515補骨酯補骨酯素、異補骨酯素HPLC≥0.716苦參苦參堿、氧化苦參堿HPLC≥1.217金錢草槲皮素、山奈素HPLC≥0.1018胡黃連胡黃連苷-I、胡黃連苷-IIHPLC≥9.019厚樸厚樸酚與和厚樸酚的總量HPLC≥2.020厚樸花厚樸酚與和厚樸酚的總量HPLC≥0.2021牽牛子咖啡酸、咖啡酸乙酯HPLC≥0.2022香薷麝香草酚、香荊芥酚HPLC≥0.1623重樓重樓皂苷I、重樓皂苷IIHPLC≥0.8024穿心蓮穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量HPLC≥0.8025蟾酥華蟾蜍次素和脂蟾毒配基的總量HPLC≥6.0中藥規(guī)定的含量限度為多成分之和2、在制劑的測定和穩(wěn)定性的研究①片劑的測定：復方甘草片②注射劑的測定：林可霉素③糖漿劑：潑尼松④軟膏劑：氟氫松⑤其他：布洛芬緩釋膠囊、栓、乳膏，以及藥物制劑中的含量及雜質(zhì)限量的檢查六、色譜檢測技術(shù)的應用3、體內(nèi)藥物分析血中、尿、膽汁、乳汁、臟器大量事實證明，如無臨床藥理學和臨床藥學研究給新藥以確切的評價，要做到臨床安全、合理、有效地用藥將會遇到許多困難。因此，加強藥物在生物樣品內(nèi)作用機理的研究，以了解和闡明藥物藥物結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、劑型及生產(chǎn)工藝與藥物療效等關(guān)系，已成為評價藥品質(zhì)量的重要內(nèi)容和依據(jù)。六、色譜檢測技術(shù)的應用4、食品與飼料：①由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素,而普通的全氮測定法測飼料和食品中的蛋白質(zhì)含量時不能排除這類偽蛋白氮的干擾,某些不法廠商添加三聚氰胺主要是利用三聚氰胺的高含氮量來增加產(chǎn)品的表觀蛋白質(zhì)含量。六、色譜檢測技術(shù)的應用4、食品與飼料：②畜禽肉中土霉素、金霉素、四環(huán)素殘留檢查。③牛奶和飼料中抗生素殘留。六、色譜檢測技術(shù)的應用有機鹵化物苯系物AddYourTitle一氧化碳汽車尾氣中含有一氧化碳，工業(yè)鍋爐和家用煤爐燃燒不完全放出一氧化碳，都污染環(huán)境。室內(nèi)空氣中揮發(fā)性污染物,尤其是苯系物的污染嚴重威脅人們的健康，新裝修后苯、甲苯、二甲苯均嚴重超標,污染主要來源于裝修用膠粘劑、涂料及油漆等化學品。自來