牛津杯和打孔法抑菌試驗(yàn)

牛津杯法和打孔法抑菌試驗(yàn)

擴(kuò)散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。由于擴(kuò)散法操作簡(jiǎn)單，成本低，已經(jīng)被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室和基層單位所采用稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測(cè)試細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長(zhǎng)情況，判斷其最低抑菌濃度（MIC）。擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)，是指對(duì)敏感性不能預(yù)測(cè)的分離菌株進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)試抗菌藥在體外對(duì)病原微生物有無抑制作用，以指導(dǎo)選擇治療藥物和了解區(qū)域內(nèi)常見病原菌耐藥性變遷，有助于經(jīng)驗(yàn)性治療選藥藥敏試驗(yàn)方法主要有兩種，即擴(kuò)散法和稀釋法。其中擴(kuò)散法屬手工測(cè)試方法，通過測(cè)試藥物紙片或者牛津杯在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小，判斷細(xì)菌對(duì)該種藥物是否敏感。稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測(cè)試細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長(zhǎng)情況，判斷其最低抑菌濃度（MIC）。由于擴(kuò)散法操作簡(jiǎn)單，成本低，已經(jīng)被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室和基層單位所采用。擴(kuò)散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。

一、實(shí)驗(yàn)原理將培養(yǎng)基平板置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一方面試驗(yàn)菌（指示菌）開始生長(zhǎng)繁殖；另一方面抗生素呈球面擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度，離杯越近，抗生素濃度越大，離杯越遠(yuǎn)抗生素濃度越小。在牛津杯周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌的生長(zhǎng)被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度（藥敏實(shí)驗(yàn)）或藥物對(duì)指示細(xì)菌的抑菌程度（抑菌試驗(yàn)）。一、實(shí)驗(yàn)原理抗生素濃度越高，抑菌圈越大。在抑菌圈的邊緣處，瓊脂培養(yǎng)基中所含抑菌物質(zhì)的濃度即為該菌懸液中對(duì)該種指示菌的最低抑菌濃度（MIC）。抑菌圈直徑與藥物對(duì)測(cè)試菌的最低抑菌濃度呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

二、實(shí)驗(yàn)材料培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基菌種：大腸桿菌（E.coli)

金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)

枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis)藥品：阿莫西林、黃芪多糖、其他：牛津杯、培養(yǎng)皿、酒精棉、酒精燈、涂布器、移液槍、1mL、200uL槍頭、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、接種環(huán)“牛津杯”是放被測(cè)抗生素的不銹鋼小管，小管內(nèi)徑為6mm，外徑為8mm，高10mm的圓筒形管子，管子的重量盡可能相等。牛津杯三、實(shí)驗(yàn)操作1.倒平板：將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到完全融化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿約20ml，凝固。2.標(biāo)記：菌種、牛津杯擺放位置、藥物及其濃度3.制備菌懸液：用生理鹽水洗下試管內(nèi)的菌苔并稀釋。4.菌液涂布：吸取1mL菌液入平板表面，用涂布器涂布將菌液涂布均勻5.擺放牛津杯：在培養(yǎng)基表面垂直擺放牛津杯，輕輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無空隙。6.加入待檢藥液：在杯中加入不同稀釋度的藥液或待檢樣品。7.孵育：加滿后在37℃培養(yǎng)16~18h。8.結(jié)果報(bào)告：用毫米尺量取抑菌圈直徑，參考表的標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果，按敏感（S）、中介（I）、耐藥（R）報(bào)

以牛津杯周圍沒有肉眼可見生長(zhǎng)物區(qū)域?yàn)橐志Γ鶕?jù)抑菌圈直徑大小判斷細(xì)菌對(duì)抗菌藥的敏感性。藥敏試驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑（毫米）＞20極敏感15-20高敏感10-14中敏感＜10低敏感

0不敏感注意事項(xiàng)在超凈工作臺(tái)中或酒精燈旁操作平板倒好，一定要平牛津杯立直，才能保證杯內(nèi)抑菌物質(zhì)均勻的向四周擴(kuò)散牛津杯均勻擺放于培養(yǎng)基上，位置安排適中，防止出現(xiàn)抑制圈重疊，可在平皿中央擺一個(gè)，外周等距離擺5－6個(gè)。思考題青霉素、頭孢菌素類藥物的抗菌機(jī)制如何？藥敏試驗(yàn)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，簡(jiǎn)稱藥敏