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2023/2/1Copyright?Jiangyong轉(zhuǎn)基因西紅柿請(qǐng)您欣賞2023/2/1Copyright?Jiangyong抗蟲(chóng)害作物2023/2/1Copyright?Jiangyong2023/2/1Copyright?Jiangyong番木瓜優(yōu)良抗病品種2023/2/1Copyright?Jiangyong金大米2023/2/1Copyright?Jiangyong地雷探測(cè)草擬南芥2023/2/1Copyright?Jiangyong不會(huì)引起過(guò)敏的大豆2023/2/1Copyright?Jiangyong轉(zhuǎn)基因芥菜可減輕土壤污染2023/2/1Copyright?Jiangyong彩色玉米2023/2/1Copyright?Jiangyong巨型鮭魚(yú)2023/2/1Copyright?Jiangyong熒光魚(yú)2023/2/1Copyright?Jiangyong超級(jí)奶牛2023/2/1Copyright?Jiangyong培育出人耳的小鼠2023/2/1Copyright?Jiangyong轉(zhuǎn)基因豬2023/2/1Copyright?Jiangyong基因工程1944年確認(rèn)了遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)是DNA。1953年JWatson和FCricK提出了DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型,1958年MMesselson和FWStahl證實(shí)了DNA半保留復(fù)制的機(jī)制,揭示了生物界遺傳性狀能世代遺傳的分子奧秘。重要的里程碑:雙螺旋結(jié)構(gòu)的確立
1962年WSzybalski和ESzybalski
用人類(lèi)DNA去轉(zhuǎn)化人類(lèi)細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)Ca2+有刺激DNA轉(zhuǎn)移入細(xì)胞的作用,是人工轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)給其它細(xì)胞的第1次嘗試。
1965年,Jacobf基因操縱子.1968年,NirenbergM,遺傳密碼.1967年Nirenberg提出遺傳工程可用于人類(lèi)的基因治療。
60年代分子生物學(xué)作為一門(mén)獨(dú)立學(xué)科正式出現(xiàn)70年代初Graessmann和Dicumako莫定了用顯微注射法轉(zhuǎn)移基因。
1972年Grahant等對(duì)磷酸鈣介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)移過(guò)程進(jìn)行了詳細(xì)的研究,使這技術(shù)能被普遍接受和應(yīng)用。
1972年,P.Berg:構(gòu)建第一個(gè)DNA重組分子
2種病毒DNA的重組
1973年,S.S.Cohen:第一個(gè)基因克隆實(shí)驗(yàn)基因工程的開(kāi)始
1977年,基因工程產(chǎn)品的出現(xiàn)
H.W.Boyer,第一個(gè)基因工程產(chǎn)品(SS)
somatostatin
生長(zhǎng)素釋放抑素70年代出現(xiàn)基因工程并有初步成果基因重組技術(shù)80年代的代表性研究領(lǐng)域基因工程產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)應(yīng)用定點(diǎn)突變的研究與應(yīng)用癌基因的發(fā)現(xiàn)
DNA-蛋白質(zhì)分子相互辨認(rèn)
PCR技術(shù)的出現(xiàn)人類(lèi)基因組計(jì)劃開(kāi)始醞釀90年代基因診斷技術(shù)漸趨成熟基因治療合法化人類(lèi)基因計(jì)劃的啟動(dòng)分子生物學(xué)各分支學(xué)科的建立與發(fā)展從20世紀(jì)50年代起,分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究成果共獲得40項(xiàng)諾貝爾醫(yī)學(xué)-生理科學(xué)獎(jiǎng),說(shuō)明分子生物學(xué)在生命科學(xué)研究中的重要性
根據(jù)桑格法開(kāi)發(fā)的DNA自動(dòng)定序機(jī)使一周(24小時(shí)運(yùn)轉(zhuǎn))解讀100萬(wàn)甚至幾百萬(wàn)個(gè)堿基成為可能。它為“人類(lèi)基因組計(jì)劃”立下了汗馬功勞
2023/2/1Copyright?Jiangyong理論基礎(chǔ)DNA是遺傳物質(zhì)的證明DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則的確立遺傳密碼的破譯工程技術(shù)基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)工具酶的發(fā)現(xiàn)DNA合成和測(cè)序技術(shù)的發(fā)現(xiàn)DNA體外重組的實(shí)現(xiàn)重組DNA表達(dá)實(shí)驗(yàn)的成功第一例轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的問(wèn)世PCR技術(shù)的發(fā)明基因工程:就是重組DNA技術(shù),指在體外將不同來(lái)源的DNA進(jìn)行剪切和重組,形成雜合DNA或稱(chēng)嵌合DNA分子,然后將其導(dǎo)入特定的宿主細(xì)胞,得到大量擴(kuò)增和表達(dá),使宿主細(xì)胞獲得新的遺傳特性,產(chǎn)生新的基因產(chǎn)物。2023/2/1Copyright?Jiangyong已學(xué):基因工程的“專(zhuān)用工具”基因的剪刀——限制性核酸內(nèi)切酶基因的針線(xiàn)——DNA連接酶基因的運(yùn)輸工具——運(yùn)載體分子手術(shù)刀----限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)磷酸二酯鍵EcoRI、SmaI限制酶提醒①切割的化學(xué)鍵為磷酸二酯鍵。②在切割目的基因和運(yùn)載體時(shí)要求用同一種限制酶,目的是產(chǎn)生相同的黏性末端。③將一個(gè)基因從DNA分子上切割下來(lái),需要2個(gè)限制酶,同時(shí)產(chǎn)生4個(gè)黏性末端2023/2/1Copyright?Jiangyong限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)來(lái)源:主要從原核生物中分離化學(xué)本質(zhì):蛋白質(zhì)作用:能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列,并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)。特性:特異性。即限制酶識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列,切割特定位點(diǎn)切割后的DNA末端:黏性末端;平末端分子縫合針----DNA連接酶功能:將切下來(lái)的DNA片段拼接成新的DNA分子種類(lèi)T4DNA連接酶:既能“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端,也能“縫合”雙鏈DNA的平末端(效率低)E·coliDNA連接酶:只能將雙鏈片段互補(bǔ)的黏性末端連接常用載體質(zhì)粒λ噬菌體的衍生物動(dòng)植物病毒基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體(分子運(yùn)輸車(chē))2023/2/1Copyright?Jiangyong2023/2/1Copyright?Jiangyong(1)載體是基因運(yùn)輸工具,在基因操作過(guò)程中,使用載體有兩個(gè)目的:一是用它作為運(yùn)載工具,將目的基因送到宿主細(xì)胞中去;二是利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。
(2)種類(lèi):質(zhì)粒(既存在于原核生物細(xì)菌中,也存在于真核生物酵母菌中)、λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。(3)本質(zhì):DNA(其中質(zhì)粒為環(huán)狀DNA分子)(4)作為載體必須具備三個(gè)條件:①能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制。②有1個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn),以便與外源基因連接。
③具有某些標(biāo)記基因,以便進(jìn)行篩選。2023/2/1Copyright?Jiangyong2023/2/1Copyright?Jiangyong注意問(wèn)題(1)一般來(lái)說(shuō),天然載體往往不能同時(shí)具備載體必須具備的條件,所以在基因工程中需要根據(jù)不同的和需要,對(duì)載體進(jìn)行人工改建?,F(xiàn)在所使用的質(zhì)粒載體幾乎都是經(jīng)過(guò)改建的。2023/2/1Copyright?Jiangyong(2)作為載體必須具有多個(gè)限制酶切點(diǎn),而且每種酶的切點(diǎn)最好只有一個(gè)。因?yàn)槟撤N限制性?xún)?nèi)切酶只能識(shí)別單一切點(diǎn),若載體上有一個(gè)以上的酶切點(diǎn),則切割重組后可能丟失某些片段,若丟失的片段含復(fù)制起點(diǎn)區(qū),則進(jìn)入受體細(xì)胞后便不能自主復(fù)制。一個(gè)載體若只有某種限制酶的一個(gè)切點(diǎn),則酶切后既能把環(huán)打開(kāi)接納外源DNA片段,又不會(huì)丟失自己的片段。2023/2/1Copyright?Jiangyong(3)大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌等細(xì)菌中都有質(zhì)粒。它存在于細(xì)菌的細(xì)胞質(zhì)中,上面一般含幾個(gè)到幾百個(gè)基因,控制著細(xì)菌的抗藥性、固氮、抗生素合成等性狀。由于土壤農(nóng)桿菌很容易感染植物細(xì)胞,使細(xì)胞生有瘤狀物。所以科學(xué)家培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí),常常用土壤農(nóng)桿菌中的質(zhì)粒做載體。(4)注意與細(xì)胞膜上載體的區(qū)別,兩者的化學(xué)本質(zhì)和作用都不相同。操作在綠色紙上寫(xiě)上…GGCTCCCGGGAATTCATTTTG……CCGAGGGCCCTTAAGTAAAAC…在紅色紙上寫(xiě)上…TCCCGGGAATTCCCGGGAATTCTA……AGGGCCCTTAAGGGCCCTTAAGAT…如果用EcoRⅠ限制酶,情況?用什么酶連接?如果用SmaⅠ限制酶,情況?用什么酶連接?操作中涉及到的用具和材料分別綠色紙紅色紙剪刀透明膠條連接好的綠紅紙條歸納什么是基因工程?P1什么水平?原理?
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