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DB130865.020.20DB1308B05承 德 市 地 方 標 準DB1308/T316—2022香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程2022-10-31發(fā)布 2022-11-01實施承德市市場監(jiān)督管理局 發(fā)布DB1308/T316DB1308/T316—2022前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本文件起草單位:平泉市希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司。I香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)的前期準備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。本文件適用于香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)過程管理。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。本文件沒有規(guī)范性引用文件。術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。前期準備培養(yǎng)基小米谷粒、0.5%食品級甘油、葡萄糖粉、食品級酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。儀器設(shè)備高壓滅菌鍋、超凈工作臺、液體發(fā)酵罐、生化培養(yǎng)箱、搖床、pH酸度計、比重計、打漿機、液體0.950750mlPDA操作流程谷粒選擇→谷粒浸泡→濾水→添加石膏→裝瓶→滅菌→接菌→菌絲培養(yǎng)→搖瓶→后續(xù)養(yǎng)菌→低溫處理→谷粒菌種懸浮液制備→懸浮液過濾→轉(zhuǎn)罐擴大培養(yǎng)→檢驗→備用。操作方法谷粒選擇選擇帶皮小米谷粒,籽粒飽滿、無雜質(zhì)、直徑為0.1cm~0.15cm,破碎率控制在2%以內(nèi)。谷粒浸泡使用塑料桶或箱作為容器,將谷粒倒入容器中,加水浸泡,水與谷粒的體積比為2:1。環(huán)境溫度20℃1415101024h濾水浸泡完成后濾水,將谷粒置于50目篩子上進行濾水;以篩底沒有水滴滴下,且手抓谷粒不粘手為宜。添加石膏按照谷粒干重的1%比例添加石膏,攪拌均勻。裝瓶750ml1.3kg~1.4kg。使用無棉蓋體扣蓋封口,作為培養(yǎng)基。滅菌裝瓶后的培養(yǎng)基在4h121℃時保持4h,確保滅菌徹底。接菌2520mm×200mm的斜面試管PDA培養(yǎng)基母種轉(zhuǎn)接4瓶培養(yǎng)基。菌絲培養(yǎng)接菌完成后,在培養(yǎng)溫度為22℃,空氣相對濕度為60%,二氧化碳濃度不超過0.2%的條件下進行培養(yǎng)。搖瓶當菌絲長到培養(yǎng)基1/4后續(xù)養(yǎng)菌待培養(yǎng)基中長滿菌絲后,繼續(xù)培養(yǎng)10d~12d,令菌絲長入培養(yǎng)基內(nèi)部,充分分解谷粒培養(yǎng)基,使谷粒充分軟化,培養(yǎng)成為谷粒原種。該階段的管理要加強通風換氣,二氧化碳濃度不要高于0.15%。低溫處理將長好菌絲的谷粒菌種在4℃環(huán)境下放置6h。谷粒菌種懸浮液制備在無菌的條件下,使用打漿機對低溫處理的谷粒菌種進行充分破碎,在破碎過程中加入溫度為4℃的0.5%的無菌甘油溶液,使破碎后的谷粒菌種變成懸浮漿液,其中谷粒菌種與甘油溶液的體積比為1:1。打漿機對谷粒菌種進行破碎時采用間歇模式,每旋轉(zhuǎn)30s停頓10s,以旋轉(zhuǎn)10次為限,防止打漿過程中溫度升高。2懸浮液過濾三角瓶消毒,安裝消毒后的50目篩片,打漿結(jié)束后倒入三角瓶中過濾。轉(zhuǎn)罐擴大培養(yǎng)在無菌條件下,將過濾后的谷粒菌種懸浮液轉(zhuǎn)入到盛裝培養(yǎng)液的液體發(fā)酵罐中進行液體發(fā)酵培養(yǎng),懸浮漿液與培養(yǎng)液的體積比為1:1200。發(fā)酵罐培養(yǎng)液成分按質(zhì)量配比為:玉米粉2%、豆粕粉2%、葡萄糖1.5%、酵母粉0.5%和94%的無菌水。發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)條件為溫度25℃,罐內(nèi)壓力0.01兆帕,培養(yǎng)6d。檢驗取樣在擴大培養(yǎng)即將結(jié)束時檢驗一次即可,即在培養(yǎng)6d取樣檢驗。感官檢查看旋5min不沉淀,表明菌種生長力強;反之,如果菌絲極易沉淀,說明菌絲已老化或死亡。嗅理化試驗菌絲干重量取液體菌種10ml,用水分測試儀烘干至含水量18%,然后稱量,菌絲干重≥2g為合格。液體粘稠度將液體菌種置于量筒中,使用比重計進行粘稠度測量,比重超過1.2為合格。pH將液體菌種取出后,使用pH值酸度計進行精準
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