第三章糖和苷類

湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院Wednesday,February1,2023王糾zhiziangel@163.com第三章糖和苷類化合物本章基本內(nèi)容

一、概述二、糖和苷的結(jié)構(gòu)與分類三、糖和苷的理化性質(zhì)四、糖和苷的提取與分離五、糖和苷的檢識六、苷結(jié)構(gòu)的研究2苷的提取與分離苷的檢識苷的結(jié)構(gòu)研究

第三講3掌握：苷的分類提取及其常用分離方法熟悉：苷的結(jié)構(gòu)研究方法。了解：苷的檢識方法41、提?。核?、苷的提取分離5苷的種類不同，性質(zhì)不同，提取分離方法也不同苷：極性隨著糖基的增多而增大。糖基增多，苷元所占比例相應(yīng)變小，親水性增大。苷元：一般可溶于低極性有機溶劑。6

原生苷：先要設(shè)法抑制或破壞酶的活性,常用的方法是采用甲醇、乙醇或沸水提取,或在藥材中拌入CaCO3,

在提取過程中要盡量避免與酸或堿接觸，以防苷類被酸或堿水解次生苷：可利用發(fā)酵、酶解、酸堿水解等方法處理藥材，選擇性部分水解以提高目標(biāo)物產(chǎn)量。提取前將藥材粗粉加適量水拌勻，加熱至35℃左右保持24～48小時，再用有機溶劑（醇、苯、氯仿、石油醚）進行提取7提取苷元時，先用適當(dāng)方法徹底水解苷類（酶解或酸水解），再用乙酸乙酯、氯仿、石油醚等極性小的有機溶劑提出苷元；也可先提取總苷，再水解成苷元例如：大豆苷元（葛根）提取苷應(yīng)注意問題1)破壞酶的活性:2)注意酸堿條件防止苷水解3)根據(jù)需要采取不同方法提取苷苷元——酸水解原生苷——防止水解次生苷——酶解880℃以上加熱60％以上醇提取加入CaCO3后沸水煮苷類的提取和分離流程(系統(tǒng)溶劑提取法)9水沉水層先用水飽和經(jīng)初步提取得到的苷類通常極性較大，且多為非結(jié)晶性物質(zhì)，同時不同程度地混有其他物質(zhì)，分離困難，一般需先除去雜質(zhì)，再進一步分離純化。

除雜：可用溶劑沉淀法，也可用大孔樹脂吸附法來富集、純化總苷。2、分離10粗提物溶于少量甲醇或水，加丙酮或乙醚使較純的苷類沉淀析出粗提物溶于水,上大孔樹脂柱,先用水洗去無機鹽、糖、多肽等雜質(zhì),再用逐步增加濃度的稀醇洗脫苷類分離：綜合應(yīng)用各種色譜法硅膠：多用氯仿-甲醇系統(tǒng)洗脫。

（常用，適用大多數(shù)苷）反相硅膠：水-甲醇或水-乙腈系統(tǒng)。（皂苷、某些親水性苷）凝膠：SephadexLH-20、SephadexG系列。水-醇系統(tǒng)洗脫。（適于分子量不同的苷類，如蒽醌、二蒽酮類）大孔樹脂、活性炭、纖維素、聚酰胺、離子交換樹脂等大孔樹脂法、溶劑法等通?？沙羝渌s質(zhì)，獲得總苷；柱色譜法可得到單體化合物11物理吸附：

分子間力，無選擇性，可逆。

硅膠、氧化鋁、活性炭化學(xué)吸附：化學(xué)鍵，選擇性較強，常不可逆。

硅膠——生物堿堿性氧化鋁——黃酮、蒽醌等半化學(xué)吸附：氫鍵，選擇性較弱，多可逆

聚酰胺根據(jù)物質(zhì)吸附性差異進行分離12物理吸附的基本規(guī)律：極性相似者易于吸附非極性吸附劑：活性炭對非極性成分吸附強溶劑極性吸附劑對溶質(zhì)的吸附力溶質(zhì)可被極性弱的溶劑洗脫極性吸附劑：硅膠、氧化鋁對極性物質(zhì)親和力強溶劑極性吸附劑對溶質(zhì)的吸附力溶質(zhì)可被極性強的溶劑洗脫13

一般物質(zhì)：官能團的種類、數(shù)目、位置、碳鏈長短

R-COOH﹥Ar-OH﹥R-OH﹥R-NH-﹥R-CO-NH-﹥R-CHO﹥R-CO-R﹥R-COO-R﹥R-O-R﹥R-X﹥R-H溶劑：介電常數(shù)ε，極性

環(huán)己烷（1.88）苯（2.29）無水乙醚（4.47）氯仿（5.20）乙酸乙酯（6.11）乙醇（26.0）甲醇（31.2）水（81.0）極性及強弱判斷

14活性炭吸附法結(jié)晶、重結(jié)晶中脫色、脫臭從大量稀水液中濃縮微量物質(zhì)1）簡單吸附法用于物質(zhì)的濃縮與精制15硅膠吸附柱色譜氧化鋁吸附柱色譜

A．吸附劑：30～60倍，有時100～200倍

B．裝柱：徑高比（d/h）1:15～1:20

干法裝柱/濕法裝柱

C．上樣：干法上樣/濕法上樣

D．洗脫：等度/梯度（洗脫劑極性遞增）

E．托尾：化學(xué)吸附：硅膠—堿性成分洗脫劑中加入堿氧化鋁—酸性成分洗脫劑中加入酸

F．洗脫系統(tǒng)的選擇：TLCRf=0.2～0.32）吸附柱色譜法16高分子聚合物不溶于常見有機溶劑對堿穩(wěn)定對酸特別是無機酸穩(wěn)定性差可溶于濃鹽酸、冰乙酸、甲酸中性質(zhì)3）聚酰胺柱色譜

17分子間氫鍵——半化學(xué)吸附吸附原理18化合物在含水溶劑中大致有以下規(guī)律：形成氫鍵的基團數(shù)目：越多，越強。形成氫鍵的基團所處的位置：處于易形成分子內(nèi)氫鍵者，減弱。分子中芳香化程度：高，增強。影響吸附力的因素1920各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力水甲醇乙醇?xì)溲趸c水溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液影響吸附力強弱的因素化合物在不同溶劑中的吸附力，隨溶劑極性增強而增強水中最強———常以水裝柱、樣品以水溶解上樣含水醇中次之醇中最弱———常以濃度漸高的含水醇梯度洗脫

EtOH-H2O最常用

弱強21醌類、黃酮類等酚性的制備和分離。脫鞣處理生物堿、萜類、甾類、糖類、氨基酸等極性與非極性化合物的分離也有用途應(yīng)用22高分子聚合物白色球形顆粒多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不溶于酸、堿、有機溶劑吸附原理：分子間力、氫鍵分子篩性質(zhì)原理4）大孔吸附樹脂

23樹脂的性質(zhì)：非極性樹脂易吸附非極性化合物極性樹脂易吸附極性化合物溶劑的性質(zhì)：物質(zhì)在溶劑中的溶解度大，樹脂對此物質(zhì)的吸附力就小影響吸附力強弱的因素24水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。最常用：乙醇—水廣泛應(yīng)用于化合物的分離與富集工作中如：苷類、糖類的分離生物堿的精制多糖、黃酮、三萜類化合物的分離。洗脫劑應(yīng)用25根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離透析法超濾法超速離心凝膠濾過法gelfiltration：凝膠滲透色譜gelpermeationchromtography

分子篩濾過molecularsievefiltration26凝膠三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的分子篩作用按分子量由大到小的順序分離原理凝膠濾過法gelfiltration：葡聚糖凝膠SephadexG：葡聚糖+交聯(lián)劑（環(huán)氧氯丙烷）分子篩水中應(yīng)用分離水溶性成份商品型號按交聯(lián)度分類，以10倍吸水量（ml/g）表示羥丙基葡聚糖凝膠SephadexLH-20:

SephadexG-25羥丙基化所得分子篩和反相色譜相結(jié)合水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿中使用水溶性、脂溶性成分都可分凝膠的種類、性質(zhì)及應(yīng)用28根據(jù)物質(zhì)離解程度不同分離進行分離——離子交換法離子交換樹脂為固定相，水，含水溶劑裝柱含水流動相通過樹脂可交換離子與樹脂上的交換基團交換，吸附到樹脂上中性及無交換離子的成分流出將吸附到柱上的成分洗脫下來離子交換原理29球形顆粒，不溶于水，可在水中溶脹離子交換樹脂的性質(zhì)離子交換樹脂的結(jié)構(gòu)母核離子交換基團30離子交換樹脂的種類陽離子交換樹脂：強酸性（-SO3-H+）弱酸性（-COO-H+）陰離子交換樹脂：強堿性（-N+（CH3）3Cl-）弱堿性（-NH2，-NH-，-N=）31離子交換樹脂的應(yīng)用不同電荷離子的分離如水提液中酸性、堿性、兩性化合物的分離相同電荷但解離程度不同離子的分離如堿性不同的生物堿的分離32水提液中酸性、堿性、兩性化合物的分離33

ⅠⅡ

堿性Ⅰ＜Ⅱ＜

ⅢⅢⅡⅠ堿性不同的生物堿的分離34苷的檢識:苷由糖和苷元組成，含有糖基是苷類的共性。因此，其共性檢識的方法是檢識分子中是否含有糖，這和糖類的檢識類似。其苷元部分的檢識將在相應(yīng)的章節(jié)中介紹。糖的檢識:主要是利用糖的還原性和糖的脫水反應(yīng)所生成沉淀、產(chǎn)生的顏色變化等現(xiàn)象來進行理化檢識，色譜檢識則利用薄層色譜和紙色譜等方法進行。五、苷的檢識351、菲林反應(yīng)和多倫反應(yīng)：僅還原糖反應(yīng)陽性，非還原糖和苷類反應(yīng)陰性。2、Molish反應(yīng)注意：單糖、低聚糖、多糖、苷類，Molish反應(yīng)均為陽性丙酮、甲酸、乳酸、草酸、沒食子酸、苯三酚、α-萘酚和葡萄糖醛酸以及各種醛糖衍生物Molish反應(yīng)也為陽性排除檢識反應(yīng)過程中水解產(chǎn)生的游離糖的干擾排除游離糖的干擾（正丁醇萃取苷類）氨基糖反應(yīng)陰性，碳苷和糖醛酸苷有時呈陰性（一）理化檢識3637方法取樣品的提取液1ml，加5%α-萘酚乙醇液1～3滴，搖勻后沿試管壁緩緩加入濃硫酸，若在兩液面間有紫色環(huán)產(chǎn)生，說明樣品組成中含有糖或苷類。樣品提取液紫色環(huán)濃硫酸α-萘酚乙醇水提取液水液正丁醇液供試品呈陽性萃取正丁醇蒸干Molish反應(yīng)苷類單糖、低聚糖、多糖苷類38水提取液往往含有大量的單糖、低聚糖、多糖等，難以直接檢識苷類，可用正丁醇萃取，正丁醇萃取液蒸去溶劑后進行Molish反應(yīng)，如呈陽性則表明含有苷類。39樣品濾液菲林反應(yīng)多糖反應(yīng)液呈陽性Molish反應(yīng)過濾苷類乙醇溶解不溶物氧化亞銅沉淀游離糖因濃硫酸可將結(jié)合糖水解為游離糖，Molish反應(yīng)陽性僅能說明樣品中含有游離或結(jié)合的糖，卻不能判定是苷類還是游離糖或其他形式的糖樣品酸水解后放冷的反應(yīng)液出現(xiàn)沉淀，則存在苷類化合物。因為苷類在酸水中水解產(chǎn)生糖和苷元，苷元一般具有親脂性，水溶性差，易在水解液中析出沉淀。

多糖和低聚糖水解后產(chǎn)生單糖水溶性好，不會產(chǎn)生沉淀。403、水解反應(yīng)：1、薄層色譜

1)硅膠板

2)展開劑：正丁醇-冰醋酸-水（4：1：5上層），乙酸乙酯-正丁醇-水（4：5：1上層），氯仿-甲醇-水（65：35：10下層）等含水系統(tǒng)

3)顯色劑：硫酸、茴香醛硫酸、苯胺-鄰苯二甲酸等

4)硅膠用0.03mol/L硼酸溶液或無機鹽水溶液代替水涂布薄層，能增加糖在固定相中的溶解度，樣品承載量明顯增加。

（二）色譜檢識412、紙色譜

展開劑：正丁醇-冰醋酸-水(4：1：5上層，BAW)，正丁醇-乙醇-水(4：2：1)，水飽和的苯酚。

顯色劑：苯胺-鄰苯二甲酸、間苯二酚-鹽酸等。42問題：紙色譜中以BAW和正丁醇作展開劑，展開糖，誰的Rf值大？（一）物理常數(shù)測定：如熔點、比旋度、溶解度等。（二）分子量和分子式的測定經(jīng)典方法：元素分析，分子量測定。現(xiàn)代方法：質(zhì)譜法（MS，massspectrum）

六、苷的結(jié)構(gòu)研究43確定分子量、分子式提供部分結(jié)構(gòu)信息

——丟失碎片的大小如15、17

——碎片的m/z及裂解方式（三）組成苷的苷元和糖的鑒定苷用稀酸或酶進行水解——單糖和苷元，再鑒定。1、苷元的結(jié)構(gòu)鑒定根據(jù)化學(xué)性質(zhì)判斷類型和母核結(jié)構(gòu)。（IR、UV）2、苷中組成糖的種類鑒定常采用PC、TLC、GC對糖進行鑒定，也可通過NMR進行鑒定。3、苷中糖的數(shù)目的測定44（五）糖和糖之間連接順序的確定45（六）苷鍵構(gòu)型的確定（α或β構(gòu)型）1、利用酶水解進行測定2、利用NMR確定苷鍵構(gòu)型3、利用klyne經(jīng)驗公式進行測定1、部分水解法2、利用NMR確定（四）苷分子中苷元和糖，糖和糖之間連接位置的確定1、苷元與糖分子之間連接位置的確定：13CNMR法（苷化位移）2、糖與糖之間連接位置的確定：乙酰解、甲醇解法、NMR法常用質(zhì)譜技術(shù)及特點電子轟擊質(zhì)譜（EI-MS，electronimpactionization）場解析質(zhì)譜（FD-MS，fielddesorptionionization）快速原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MS，fastatombombardment）電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS，electrosprayionization）化學(xué)電離質(zhì)譜（CI-MS）高分辨快原子轟擊質(zhì)譜（HR-FAB-MS）46樣品需加熱氣化，離化，得到M+難氣化、易熱解的成份測不到M+

如糖、苷、氨基酸、肽、蛋白、核酸、抗生素電子轟擊質(zhì)譜（EI-MS）場解析質(zhì)譜（FD-MS）試樣稀液涂于鎢絲上作陽極，對面加陰極，通高壓，使電離難氣化、易熱解的成份，可得到分子離子相關(guān)峰：[M＋H]+、[M＋Na]+、[M＋K]+

逐個脫去糖基的碎片峰：[M＋H-162]+、[M＋H-162-146]+苷元的碎片離子相對少47離子槍發(fā)射高能離子與另一中性粒子碰撞，交換電荷，

形成高速中性粒子，與樣品碰撞，使其電離難氣化、易熱解的成份，可得到分子離子相關(guān)峰：[M＋H]+、[M＋Na]+、[M＋K]+

逐個脫去糖基的碎片峰：[M＋H-162]+、[M＋H-162-146]+

可得到苷元的碎片快速原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MS）分子量及M-1、M-H2O等裂解碎片的精確質(zhì)量高分辨快原子轟擊質(zhì)譜（HR-FAB-MS）483、苷中糖的數(shù)目的測定經(jīng)典：利用PC或TLC法鑒定種類，再用光密度掃描測定單糖斑點含量，算出各糖的分子比，推測成苷的糖的數(shù)目。現(xiàn)代：利用質(zhì)譜（MS）測定苷和苷元的分子量—計算差值—求出糖數(shù)目。根據(jù)1H-NMR譜中端基碳質(zhì)子信號（δ4.3~6.0ppm）推算糖數(shù)目。

利用13C-NMR譜糖的端基碳信號（δ90~112ppm）或根據(jù)苷的總C信號與苷元C信號數(shù)目推算。1H—1HCOSY，1H—13CCOSY等二維譜推算糖數(shù)目。49原理：1H、13C等具有磁矩的原子在外加磁場中受電磁波照射，吸收一定能量電磁波，產(chǎn)生能級變化，引起核磁共振氫核磁共振（1H-NMR）碳核磁共振譜（13C-NMR）二維核磁共振譜（2D-NMR）核磁共振（nuclearmagneticresonance,NMR）50氫核磁共振（1H-NMR）

應(yīng)用：提供H的類型、數(shù)目、相鄰原子團的信息

四個參數(shù)：化學(xué)位移（）：1～10～20ppm——H的類型屏蔽效應(yīng)積分值/積分面積———同一環(huán)境下H的個數(shù)自旋偶合裂分的峰數(shù)———鄰位與其不等同的H的個數(shù)符合n+1律s,d,t,q偶合常數(shù)（J）

———H核間的距離相隔鍵數(shù)：越少，J大，通常為3JH-H

二面角：越接近90°，J越??；越接近0°、180°，J越大

遠(yuǎn)程偶合(4JH-H)：鄰位偶合常數(shù)：與兩面角有關(guān)兩面角90度J=0Hz；兩面角0或180度J=6～8Hz；兩面角60度J=2～4Hz對于糖質(zhì)子當(dāng)2-H為直立鍵時，1位苷鍵的取向不同，1-H與2-H的兩面角不同，偶合常數(shù)亦不同：1-H和2-H鍵為雙直立鍵，φ=180，J=6～8Hz1-H為平伏鍵，2-H直立鍵，φ=60，J=2～4Hz

52

當(dāng)2-H為平伏鍵的情況下，1-H無論處于平伏鍵還是直立鍵，與2-H的兩面夾角均約60度，故不能用該法判斷苷鍵構(gòu)型。

六碳醛糖中C2構(gòu)型與葡萄糖不一致的D-甘露糖的苷鍵，就不能用端基質(zhì)子的偶合常數(shù)來判斷其構(gòu)型。β-D-甘露糖苷α-D-甘露糖苷53

Jac=1.6～2.0HzJbc=0～1.5Hz烯丙偶合芳環(huán)上的偶合Jab=6～10HzJac=1～3HzJad=0～1Hz54碳核磁共振譜（13C-NMR）最重要的參數(shù)：

化學(xué)位移：1～200ppm—C的類型13C的信號裂分

13C-NMR：異核偶合—1H-NMR：同核偶合偶合裂分峰數(shù)：—C的級別符合n+1律，s,d,t,q，有1JC-H

2JC-H

3JC-H55糖的1H-NMR特征

化學(xué)位移規(guī)律：甲基質(zhì)子：~1.0ppm

特點：比較容易辨認(rèn)用途：1、確定甲基五碳糖的個數(shù)2、確定糖的種類3、確定糖與糖、糖與苷元的連接位置56

端基質(zhì)子：4.3~6.0ppm；其余部位的質(zhì)子信號均在3.2-4.2左右

特點：比較容易辨認(rèn)用途：1、確定糖基的個數(shù)2、確定糖基的種類3、2D-NMR譜上糖信號的歸屬57

其余質(zhì)子信號：3.2~4.2ppm

特點:信號集中,難以解析

歸屬:往往需借助2D-NMR技術(shù)。5859端基質(zhì)子：4.3~6.0ppm；其余部位的質(zhì)子信號均在3.2-4.260甲基質(zhì)子：~1.0ppm端基質(zhì)子：4.3~6.0ppm；其余部位3.2-4.2糖上碳信號可分為幾類，大致范圍為：

CH3：18ppm甲基五碳糖的C6，一般有幾個信號(扣除苷元中的甲基)可表示有幾個甲基五碳糖存在。

CH2OH：62ppmC5或C6CHOH：70～85ppm糖氧環(huán)上的C2～C4-O-CH-O-：95～105ppm端基C，在此范圍內(nèi)有幾個信號可視為有幾種糖存在于糖鏈的重復(fù)單位中。

糖上-OCH3:65ppm糖的13CNMR特征61糖C-1C-2C-3C-4C-5C-6β-D-葡萄糖96.775.176.770.676.861.7α-D-葡萄糖92.972.573.870.672.361.6β-D-半乳糖97.372.973.869.776.062.2α-D-半乳糖93.269.470.270.371.462.062部分單糖分子的碳譜數(shù)據(jù)

經(jīng)典方法：化學(xué)降解或酶解—產(chǎn)物現(xiàn)代方法：NMR法

2D-NMR譜中，HMBC（氫-碳遠(yuǎn)程相關(guān)）譜已成為確定苷元連接位置的主要方法。可以觀察到糖的端基質(zhì)子與苷元α-碳原子信號以及苷元α-碳原子上的質(zhì)子與糖的端基碳信號的相關(guān)峰。13C-NMR譜是確定苷元與糖連接位置的有效方法(利用苷化位移規(guī)律，將苷與苷元的碳譜相比較即可鑒別)

63（四）苷元和糖，糖和糖之間連接位置的確定1、苷元與糖分子之間連接位置的確定苷化位移

概念：糖與苷元成苷后，苷元的α-C、β-C和糖的端基碳的化學(xué)位移值均發(fā)生了改變，這種改變稱苷化位移。

作用：推測糖與苷元、糖與糖的連接位置以及碳?xì)湫盘柕臍w屬。

64醇羥基苷化引起α-碳原子向低場位移（4-10ppm），β-碳原子向高場位移（0.9-4.6ppm）；如：伯醇65酚羥基、羧基苷化引起α-碳原子均向高場位移，β-碳原子向低場位移，此外對位碳原子也向低場移動。（酚羥基苷化引起端基碳向低場位移、羧基使端基碳向高場位移）。如三萜類化合物—齊墩果酸：66（1）化學(xué)方法:將全甲基化苷進行甲醇解，鑒定（與對照品共色譜），未全甲醚化的單糖，游離羥基所在位置即糖與糖之間的連接位置。2、糖與糖之間連接位置的確定67以緩和酸水解和酶水解法最為常用。緩和酸水解多使用低濃度的無機強酸或中強度的有機酸(如草酸)進行水解，可使苷中的部分糖水解脫去。例如：

681）部分水解法結(jié)果分析：由于在水解產(chǎn)物中檢出木糖，因此可以確定木糖連接在末端。開裂一部分苷鍵，保留另一部分苷鍵，分析水解產(chǎn)物中得到的乙?；途厶牵部梢源_定糖的連接順序。692）乙酰解法用乙酐-ZnCI2乙酰解后，TLC檢出了單糖、四糖和三糖的乙酰化物，并與標(biāo)準(zhǔn)品對照進行鑒定，由此可推出苷分子中糖的連接方式。70甲基化的單糖，根據(jù)單糖的甲基化位置判斷糖的連接位置。全甲基化甲醇解糖的端基半縮醛羥基甲基化713）先甲基化，再甲醇解將糖鏈全甲基化，然后水解苷鍵，用GC鑒定所獲得的甲基化單糖，其中游離-OH的部位就是連結(jié)位置,全甲基化的單糖即為末端糖。此外，目前常使用13C-NMR方法，主要是通過歸屬各碳信號，以確定產(chǎn)生苷化位移的碳。苷化位移--要判斷苷中兩個糖的連接位置，可將該糖的碳譜數(shù)據(jù)與單糖比較，若內(nèi)端糖的某碳原子向低場位移（4-7ppm)，而其鄰碳又向高場位移（1-4ppm），那么該碳原子為連接糖的位置。2D-NMR譜中，HMBC（氫-碳遠(yuǎn)程相關(guān)）已成為確定苷元的連接位置的主要方法。73（2）波譜解析——NMR法EI-MS譜：全乙?；⒓谆蛉谆杳鸦苌奶腔x子峰。FD-MS譜或FAB-MS譜：各種不同解離程度的糖基碎片離子峰。如人參皂苷Rb2的FD-MS譜中[(M+Na)+-132]表明末端有阿拉伯糖。

[(M+Na)+-162]表明末端有葡萄糖。[(M+Na)+-294]表明葡萄糖-阿拉伯糖鏈。

74（3）MS法（五）糖和糖之間連接順序的確定經(jīng)典方法：化學(xué)降解或酶解—產(chǎn)物現(xiàn)代方法：NMR法

糖與糖相連，內(nèi)側(cè)糖連接糖的碳原子移向低場（δ4～7ppm），相鄰碳原子移向高場（δ-1～-4ppm）75苷緩和酸水解、酶解乙酰解全甲基化甲醇解部分苷鍵斷裂的裂解產(chǎn)物推斷分析一般不同的水解酶可水解不同類型的苷鍵，如麥芽糖酶能水解α-苷鍵，苦杏仁酶可水解β-苷鍵。

76（六）苷鍵構(gòu)型的確定（α或β構(gòu)型）1、利用酶水解進行測定2、利用NMR確定苷鍵構(gòu)型H-2為a鍵的糖葡萄糖、木糖、半乳糖等H-1為a鍵時：H-1和H-2為aa偶合，Jaa=6～9HzH-1為e鍵時：H-1和H-2為ae偶合，Jae=2～3Hz771H-NMR法是目前常用的比較準(zhǔn)確的方法。78ａ-D-葡萄糖苷ａ-L-鼠李糖苷J(rèn)1ˊ2=Jae=2～3HzJ1ˊ2=Jae=2Hz

β-D-葡萄糖苷β-L-鼠李糖苷

J1ˊ2=Jaa=6～9HzJ1ˊ2=Jae=2Hz78H-2為e鍵的糖鼠李糖、甘露糖等H-1為e鍵時：H-1和H-2為ee偶合，Jee=2～3HzH-1為a鍵時：H-1和H-2為ea偶合，Jea=2～