【課件】2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞融合植物組織培養(yǎng)溫故而知新

運(yùn)用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)，可以跨越不同種植物之間生殖隔離的屏障，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育出新的作物類型。

那么，有沒有技術(shù)能讓不同種動(dòng)物的體細(xì)胞進(jìn)行雜交，培育出集不同細(xì)胞優(yōu)勢(shì)于一身的動(dòng)物細(xì)胞呢？動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)二、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體（一）動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：2.原理：3.融合方法：4.意義：使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。細(xì)胞膜的流動(dòng)性PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等。（化學(xué)法、

物理法、

生物法

）突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。已成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段，特別是雜交瘤技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。與誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合的方法一樣：P37動(dòng)物細(xì)胞融合特有雜交細(xì)胞：具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息相關(guān)信息：P48

滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)。滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)質(zhì)及完成的標(biāo)志：細(xì)胞核的融合二、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體（二）單克隆抗體及其應(yīng)用1.早期獲得抗體的方法：

向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后從動(dòng)物血清中分離所需抗體。選擇性必修1P68抗原不純抗體不純?nèi)秉c(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，特異性差。為解決這一難題，科學(xué)家進(jìn)行了多年的研究和探索。2.科學(xué)家發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物感染病原體后，體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞，這些細(xì)胞能分泌抗體，抗體識(shí)別并特異性結(jié)合病原體，從而抑制病原體的增殖等。動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類超過(guò)百萬(wàn)種，但每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。因此，要想獲得大量單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群。

遺憾的是，在體外培養(yǎng)條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增殖的。如何解決這一難題？1975年，英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家科勒在前人工作的基礎(chǔ)上，充分發(fā)揮想象力，設(shè)計(jì)了一個(gè)極富創(chuàng)造性的實(shí)驗(yàn)方案：一種B淋巴細(xì)胞（只產(chǎn)生一種特定抗體）能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體米爾斯坦科勒由于發(fā)明了單克隆抗體的制備技術(shù)，米爾斯坦和科勒于1984年獲得了諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)大量增殖單克隆抗體單克隆抗體：由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)克?。o(wú)限增殖），形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。注射特定的抗原多種B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合（1）未融合的細(xì)胞（2）多種雜交細(xì)胞：①B-B細(xì)胞、②瘤-瘤細(xì)胞、③雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合（二）單克隆抗體及其應(yīng)用3.制備單克隆抗體的過(guò)程：P48~49圖2-16*不是為了得到抗體！第一次篩選：獲得雜交瘤細(xì)胞原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性（1）未融合的細(xì)胞（2）多種雜交細(xì)胞（3種）雜交瘤細(xì)胞抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞（能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞）用特定的選擇培養(yǎng)基第一次篩選克隆化培養(yǎng)、抗體檢測(cè)第二次篩選（可進(jìn)行多次）注射到小鼠腹腔內(nèi)體外培養(yǎng)獲取單克隆抗體從小鼠腹水中從細(xì)胞培養(yǎng)液中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)?雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):第二次篩選：獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備原理細(xì)胞增殖（二）單克隆抗體及其應(yīng)用3.制備單克隆抗體的過(guò)程：動(dòng)物細(xì)胞融合（原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性）

*不是為了得到抗體！第一次篩選：獲得雜交瘤細(xì)胞

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（原理：細(xì)胞增殖）第二次篩選：獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):優(yōu)點(diǎn)：能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備未融合的親本細(xì)胞兩兩融合的細(xì)胞融合的具有同種核的細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞B-B細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞只考慮兩兩融合，誘導(dǎo)融合之后，一定會(huì)得到所需雜交瘤細(xì)胞嗎？思考1（二）單克隆抗體及其應(yīng)用3.制備單克隆抗體的過(guò)程不一定第二次篩選的目的是獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞,那么如何篩選？思考2用96孔板培養(yǎng)和篩選雜交瘤細(xì)胞，（每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞），進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選就可獲得。思考3選擇抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞，抗體檢測(cè)原理是什么？抗原和抗體能夠特異性結(jié)合(分子水平的鑒定）陽(yáng)性孔在單克隆抗體制備過(guò)程中，兩次篩選的目的和方法是不相同的。將雜交瘤細(xì)胞群稀釋，約每孔1個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)（克隆化培養(yǎng)）一段時(shí)間后，檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔多孔細(xì)胞培養(yǎng)板抗體檢測(cè)板分泌抗體能跟特定抗原結(jié)合的細(xì)胞即為所需雜交瘤細(xì)胞補(bǔ)充內(nèi)容：抗體檢測(cè)方法（抗原-抗體雜交法）單克隆抗體篩選二雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)篩選一骨髓瘤細(xì)胞

誘導(dǎo)融合分泌特異抗體的雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞群提取已免疫的B淋巴細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)小結(jié)：?jiǎn)慰寺】贵w的制備既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備注射抗原現(xiàn)學(xué)現(xiàn)用：請(qǐng)用箭頭把以下部分步驟的字母按正確順序連接起來(lái)BAECGDHF4.單克隆抗體的應(yīng)用抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用，即通過(guò)特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞；藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞。ADC的抗體和藥物各具有什么作用？討論14.單克隆抗體的應(yīng)用可以用放射性同位素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療。一些作用于細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過(guò)阻斷腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路來(lái)抑制其生長(zhǎng)，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進(jìn)行治療。除了細(xì)胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？討論24.單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應(yīng)，因此檢測(cè)的特異性和靈敏度大大提高；生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)、冷凍保存和復(fù)蘇利用，有利于控制產(chǎn)品的質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)診斷試劑盒。ADC能夠協(xié)同發(fā)揮抗體特異性識(shí)別的靶向作用和細(xì)胞毒素對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，因此它在臨床上具有靶點(diǎn)清楚、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應(yīng)用上各具有什么優(yōu)勢(shì)？討論34.單克隆抗體的應(yīng)用（1）、廣泛用作診斷試劑抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體4.