Agilent定量分析講義

第七章定量基礎(chǔ)

BBBBB=基線BVBV=峰谷點B

PBP=基線滲透BHHH=水平基線(基線漂移）各種積分事件校正（定量） 校正即是利用某個峰的峰高或峰面積來確定其對應(yīng)組分的濃度或含量 當(dāng)檢測器靈敏度針對不同的組分而變化；及檢測器對同一組分不同含量響應(yīng)值發(fā)生變化時須做校正校正方法*面積百分比法AREA%

*峰高百分比法HEIGHT%

歸一化法NORM%

外標(biāo)法ESTD

內(nèi)標(biāo)法ISTD*不是校正方法面積百分比法AREA% AREA(pk)AREA%= x100%AREA(pk) 假定檢測器響應(yīng)都相同所有組分都流出所有組分都被檢測到優(yōu)點

缺點無需做校正 以上所有的假定簡單、快速的定量過程 需測量所有的組分進樣量不要求嚴(yán)格 所有的面積都必須準(zhǔn)確校正因子絕對響應(yīng)時間RF=含量/面積校正檢測器響應(yīng)與組分的含量及其它組分的存在無關(guān)含量 100 100200面積 3000 2500 4000歸一化法(NORM) RF(pk)xAREA(pk) NORM%= x100%[RF(pk)xAREA(pk)] 假定所有組分都流出所有組分都被檢測到優(yōu)點

缺點簡單、快速的定量過程 所有組分峰都要流出進樣量不要求嚴(yán)格 需測量所有的組分 必須校正所有的峰

外標(biāo)法（ESTD） 含量＝面積(pk)xRF(pk) 優(yōu)點 校正檢測器的響應(yīng) 只對欲分析的組分峰做校正 無需所有峰都能被檢測到 缺點 進樣量必須準(zhǔn)確 儀器必須有良好的穩(wěn)定性 需定期做再校正外標(biāo)法校正過程首先準(zhǔn)備一個混合標(biāo)樣，其中感興趣組分的濃度須準(zhǔn)確知道運行標(biāo)準(zhǔn)樣品建立校正表運行待測樣品并使用校正表分析它需要時進行再校正單級校正對每一峰只做一次校正單級校正中做了如下假設(shè)： 響應(yīng)因子不會因為某峰對應(yīng)物質(zhì)的含量 變化而發(fā)生變化 響應(yīng)曲線須通過原點含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值

A或HA(istd)或H(istd)多級校正對每一峰需做至少兩次校正可以補償檢測器對不同含量的樣品組分而給出 非線性響應(yīng)。響應(yīng)曲線可以不通過原點定量分析多級校正過程首先準(zhǔn)備一個混合標(biāo)樣，其濃度應(yīng)高于欲分析物 的濃度將濃標(biāo)樣等梯度稀釋，其中最低濃度低于待測物的濃度運行每一級稀釋好的標(biāo)樣在每一級上進行校正運行待測樣品并使用校正表分析它需要時進行再校正線性擬合（最小二乘法）含量響應(yīng)值(A或H)點到點校正曲線含量響應(yīng)值(A或H)非線性擬合含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值(A或H)內(nèi)標(biāo)法（ISTD）

RF(pk)面積(pk)含量＝

RF(ISTD)面積(ISTD)優(yōu)點進樣量不嚴(yán)格要求.內(nèi)標(biāo)的加入消除了由于進樣量、儀器不穩(wěn)定等因素帶來的系統(tǒng)誤差。只對欲分析的組分峰做校正缺點必須加一個組分進到樣品，易增加面積測量誤差。*內(nèi)標(biāo)含量=*內(nèi)標(biāo)含量面積(pk)面積(ISTD)RF’選擇內(nèi)標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)樣品中不存在化學(xué)性質(zhì)與樣品相似與樣品有相同的濃度范圍不會與樣品發(fā)生反應(yīng)在感興趣組分附近流出*可得到分離良好的、干凈利落的峰色譜性質(zhì)穩(wěn)定可迅速容易得到定量方法總結(jié) 優(yōu)點 缺點AREA% 無需校正 檢測器的響應(yīng)必須一致 進樣量不嚴(yán)格要求 所有組分峰都須流出 所有組分峰都須被檢測到 所有面積都須準(zhǔn)確NORM% 進樣量不嚴(yán)格要求 所有組分峰都須流出 所有組分峰都須測定 必須校正所有的峰ESTD 校正檢測器的響應(yīng) 進樣量必須準(zhǔn)確 只對感興趣峰做校正 儀器需有很好穩(wěn)定性 無需所有峰都流出 無需所有峰都被檢測到

ISTD 進樣量不嚴(yán)格要求 必須在所有樣品中加入 只對感興趣峰做校正 一個組分 校正檢測器的響應(yīng) 樣品和標(biāo)樣的準(zhǔn)備工作 更加復(fù)雜本章將學(xué)到:如何設(shè)置并調(diào)試定量數(shù)據(jù)如何編輯定量結(jié)果如何產(chǎn)生定量報告定量數(shù)據(jù)分析步驟3:查找限定離子步驟2:保留時間窗口內(nèi)查找目標(biāo)離子步驟1:在信號窗口內(nèi)查找峰積分化學(xué)工作站定量概念分析標(biāo)準(zhǔn)物分析未知物建立標(biāo)準(zhǔn)曲線由曲線計算含量ResponseAmountStd1UnknownUnknownamtUnknownresponseStd2定量過程連同校正表下載方法文件.下載第一個標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)文件選擇

Calibrate/SetUpQuantitation.設(shè)置定量數(shù)據(jù)資料選擇Calibrate/SetUpQuantitation...定量數(shù)據(jù)資料表參考峰窗口：用于內(nèi)標(biāo)非參考縫窗口：用于其它化合物相關(guān)窗口：允許目標(biāo)離子與限定離子的保留時間之差默認值+/-：峰起點與終點須在此范圍內(nèi)濃度單位內(nèi)標(biāo)濃度是否用RTE積分單擊"InsertAbove"輸入化合物輸入化合物(續(xù))內(nèi)標(biāo)指令用于:增加新級別級別再校正刪除級別更新校正表10。00010。000再校正分別選擇對濃度和保留時間是否再校正分別對濃度和保留時選擇再校正的方式（取代或平均）選擇再校正的級別選擇Recalibrate化合物信息-第1頁化合物信息-第2頁化合物信息-第3頁校正曲線校正曲線自動定量數(shù)據(jù)庫定量報告選項“MultiView”窗口結(jié)果演示交叉定量1.選擇Method/EditMethod...2.選定"QuantReport"3.選定報告格式和目的地4.保存方法!!自動生成定量報告使用Qedit手動再積分當(dāng)前數(shù)據(jù)聲明顯示在所有報告中!修改數(shù)據(jù)狀態(tài)使用下列工具:TraceModeQuantLocateaPeak/LocateallCompoundsEasyID如果peaks/限定離子找不到,檢查:1.積分2.數(shù)據(jù)文件中的質(zhì)量數(shù)3.時間范圍4.信號相關(guān)窗口如果出現(xiàn)奇怪的校準(zhǔn)曲線,檢查:1.數(shù)量2.積分事件3.響應(yīng)定量數(shù)據(jù)庫故障排除查找峰/查找所有化合物修正保留時間校正離子比率設(shè)置信號萃取窗口EasyID點擊Quantitate/TraceModeQuant對痕量樣品進行處理，列出所有相關(guān)化合物和內(nèi)標(biāo)的定量過程詳細資料TraceModeQuant當(dāng)每個化合物的變化相一致時