標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 18089-2000 藍(lán)舌病微量血清中和試驗(yàn)及病毒分離和鑒定方法》是一項(xiàng)由中國(guó)發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),旨在為藍(lán)舌病的診斷和研究提供一套統(tǒng)一、規(guī)范的檢測(cè)手段。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了如何通過(guò)微量血清中和試驗(yàn)以及病毒的分離與鑒定技術(shù)來(lái)識(shí)別和分析藍(lán)舌病病毒。
微量血清中和試驗(yàn)部分
這一部分介紹了如何利用微量血清中和試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)動(dòng)物血清中對(duì)藍(lán)舌病病毒的中和抗體。具體步驟包括:
- 樣本準(zhǔn)備:收集并處理實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(如牛、羊)的血液,分離出血清作為檢測(cè)樣本。
- 病毒株選擇:標(biāo)準(zhǔn)指定了用于試驗(yàn)的藍(lán)舌病病毒標(biāo)準(zhǔn)株,確保測(cè)試的一致性和可比性。
- 試驗(yàn)設(shè)置:在微孔板或類似裝置中,將稀釋后的血清樣本與固定量的病毒混合,使兩者在體外條件下反應(yīng)一段時(shí)間,以模擬體內(nèi)抗體與病毒的相互作用。
- 細(xì)胞培養(yǎng):將上述混合物轉(zhuǎn)移到敏感細(xì)胞系上進(jìn)行培養(yǎng),觀察細(xì)胞是否受到病毒感染的跡象。
- 結(jié)果判定:通過(guò)比較病毒對(duì)照組和不同血清稀釋度下的細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE),確定血清中的中和抗體水平,進(jìn)而判斷動(dòng)物是否曾暴露于藍(lán)舌病病毒或接種過(guò)疫苗。
病毒分離和鑒定方法部分
這部分內(nèi)容闡述了從疑似感染動(dòng)物體內(nèi)或環(huán)境樣本中分離藍(lán)舌病病毒,并對(duì)其進(jìn)行鑒定的過(guò)程:
- 樣本采集:從可能攜帶病毒的組織、血液或其他生物材料中采集樣本。
- 病毒培養(yǎng):將樣本接種到適宜的細(xì)胞系中,在控制條件下培養(yǎng),觀察病毒引起的細(xì)胞病變效應(yīng)。
- 病毒鑒定:利用免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)等技術(shù),結(jié)合病毒的生物學(xué)特性和基因序列分析,確認(rèn)分離病毒為藍(lán)舌病病毒。
- 病毒株特性描述:記錄病毒的生長(zhǎng)特性、形態(tài)學(xué)特征及遺傳信息,為病毒的進(jìn)一步研究和流行病學(xué)調(diào)查提供依據(jù)。
該標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)上述詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作流程和技術(shù)要求,確保了藍(lán)舌病診斷的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果的一致性,對(duì)于疫情防控、疫苗效果評(píng)估及疾病監(jiān)測(cè)具有重要意義。
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- 2000-04-26 頒布
- 2000-10-01 實(shí)施
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GB/T 18089-2000藍(lán)舌病微量血清中和試驗(yàn)及病毒分離和鑒定方法-免費(fèi)下載試讀頁(yè)文檔簡(jiǎn)介
TCS.65.020.30B41中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18089—2000藍(lán)舌病微量血清中和試驗(yàn)及病毒分離和鑒定方法Micro-serumneutralizationtest.virusisolationandidentificationforbluetongue2000-04-26發(fā)布2000-10-01實(shí)施國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布
GB/T18089-2000前藝藍(lán)舌病(BLU)是一種綿羊、牛、山羊等反臺(tái)動(dòng)物的嚴(yán)重傳染病,可通過(guò)檢測(cè)血清中抗體的存在,確定動(dòng)物是否感染本病。按國(guó)際上通常的方法,瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)用于藍(lán)舌病的定性,血清中和試驗(yàn)用于藍(lán)舌病的定型。本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)國(guó)際常用的方法和我國(guó)多年的實(shí)踐.采用雞胚靜脈接種是最為敏感、實(shí)用的病毒分離方法藍(lán)舌病病毒分離物可通過(guò)免疫熒光試驗(yàn)進(jìn)行定性鑒定;用病毒中和試驗(yàn)進(jìn)行定型鑒定。本標(biāo)準(zhǔn)是在參考美國(guó)、澳大利亞實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)規(guī)程和總結(jié)我國(guó)在這一領(lǐng)域多年研究和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上制定。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是標(biāo)準(zhǔn)的附錄本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中華人民共和國(guó)昆明出入境檢驗(yàn)檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:石世區(qū)、張曉丁、徐自忠、徐維加、周曉黎
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)藍(lán)舌病微量血清中和試驗(yàn)及病毒分離和鑒定方法GB/T18089--2000Micro-serumneutralizationtest,virusisolationandidentificationforbluetongue1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了藍(lán)舌病微量血清中和試驗(yàn)及病毒分離和鑒定方法.本標(biāo)準(zhǔn)適用于動(dòng)物感染藍(lán)舌病病毒后中和抗體的檢測(cè)及病毒分離和鑒定2引用標(biāo)準(zhǔn)下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文·通過(guò)在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí).所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)被修訂.使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性GB/T6682—1992分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法(eqvISO3696:1987)略語(yǔ)3.1(CPE致細(xì)胞病變作用。3.22TCID.a半數(shù)組織培養(yǎng)感染量、3.3BLP乳糖蛋白陳緩沖肉湯、3.4SPF無(wú)特定病原體原理A1血清中和試驗(yàn)原理特異性的血清中和抗體與病毒結(jié)合后,能使病毒失去對(duì)敏感細(xì)胞的感染能力,從而阻止病毒的繁殖。這一反應(yīng)不但表現(xiàn)為一種病毒只能被相應(yīng)的免疫血清所中和·而且還表現(xiàn)在中和一定量的病毒·必須有一定效價(jià)的免疫血清。中和試驗(yàn)以測(cè)定病毒的感染力為基礎(chǔ),必須選用對(duì)病毒敏感的細(xì)胞、動(dòng)物或雞胚為實(shí)驗(yàn)材料,中和抗體滴度的判定以比較病毒受免疫血清中和后的殘存感染力為依據(jù)。藍(lán)舌病病毒感染動(dòng)物后,7天左右出現(xiàn)中和抗體,中和抗體具有高度的型特異性,因此,可通過(guò)中和試驗(yàn)對(duì)藍(lán)舌病病毒進(jìn)行定型鑒定4.2病毒分離及鑒定原理動(dòng)物感染藍(lán)舌病病毒后4天左右出現(xiàn)病毒血癥,羊的病毒血癥持續(xù)4周左右,牛的病毒血癥持續(xù)8周左右,病毒主要存在于動(dòng)物的紅細(xì)胞內(nèi).并能從精液排毒。在動(dòng)物病毒血癥期,可從其血液、精液和臟器分離到病毒。用特異性熒光抗體做直接免疫熒光試驗(yàn)可對(duì)分離毒進(jìn)行
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