GB/T 18638-2002流行性乙型腦炎診斷技術(shù)

IcS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18638—2002流行性乙型腦炎診斷技術(shù)DiagnostictechniquesforepidemicencephalitisB2002-02-19發(fā)布2002-05-01實施中華人民共和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

GB/T18638-2002流行性乙型腦炎又稱日本乙型腦炎(JapaneseBencephalitis),是由流行性乙型腦炎病毒引起的種蚊媒性人獸共患傳染病。成年動物和人常呈隱性感染，幼齡動物特別是馬感染后，可發(fā)生腦炎癥狀，好振母豬可引起流產(chǎn)、死胎及木乃伊胎，公豬塞丸腫大.兒童可發(fā)生嚴重的腦炎。多發(fā)生于7～9月份。我國許多省(市)都有本病發(fā)生，特別是六七十年代，發(fā)病率最高。對人畜的健康可造成嚴重的威脅。世界動物衛(wèi)生組織和日本的資料，都采用病毒分離鑒定、免疫熒光試驗、血凝抑制試驗、補體結(jié)合試驗、血清中和試驗等進行診斷，我國對本病的研究報道較多，而比較常用的診斷方法仍是本標準規(guī)定的病毒分離鑒定、血凝抑制試驗、補體結(jié)合試驗。病毒分離鑒定適用于流行性乙型腦炎新疫區(qū)的確定和病畜的確診。間接免疫熒光試驗適用于可疑流行性乙型腦炎病毒標本的快速檢測和病毒分離株的初步鑒定。補體結(jié)合試驗·由于補體結(jié)合抗體一般在病后2～3周出現(xiàn),5～6周達高峰,并可維持1年以上·故可適用于流行性乙型腦炎的較早期診斷和流行病學調(diào)查，是最常用的方法。根據(jù)當時的實際需要，可任選一種或兩種檢疫方法，以達到準確診斷的目的。本標準的實施,對提高乙型腦炎的診斷和疫情預測水平,及時采取防制措施，保證人畜健康，將起到重要的作用。本標準的附錄A、附錄B都是標準的附錄，本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術(shù)委員會歸口本標準起草單位：中國人民解放軍農(nóng)牧大學。本標準主要起草人：李佑民、宣華、李金中、劉振潤。

中華人民共和國國家標準GB/T18638-2002流行性乙型腦炎診斷技術(shù)DiagnostictechniquesforepidemicencephalitisB1范圍本標準規(guī)定了流行性乙型腦炎的病毒分離與鑒定、間接免疫熒光試驗、補體結(jié)合試驗、血凝抑制試驗等技術(shù)要求。本標準適用于口岸、產(chǎn)地及集散地、飼養(yǎng)單位(或個人)的豬、馬、驃、驢、牛、羊等的流行性乙型腦炎的診斷和檢疫。病毒的分離與鑒定2.1材料準備2.1.1器材:細胞培養(yǎng)瓶(或管)吸管.中試管,三角燒瓶.37℃水浴箱.37C恒溫箱.普通冰箱及低溫冰箱，離心機及離心管，研磨器械，普通光學顯微鏡.G5級玻璃濾器.孔徑0.45m的微孔濾膜.0.25mL注射器及針頭。2.1.2試劑：漢克氏（Hanks)液,0.5%水解乳蛋白Hanks液·2萬IU/mL青霉素液,2萬Pg/mL鏈霉素液.7%碳酸氫鈉液,1%胰蛋白酶液,1%酚紅(中性)液，伊格爾氏（Eagle)最低必要成分培養(yǎng)液（EMEM），小牛血清2.1.3小動物:小鼠(6g~8g）、乳鼠2.1.4雞旺細胞、綠猴腎傳代細胞(Vero）、倉鼠腎傳代細胞(BHK.）、白蚊伊蚊C6/36傳代細胞等2.2病毒分離2.2.1樣品的采取和運送2.2.1.1在流行的早期和發(fā)病的早期(即病毒血癥階段)無菌采取病畜的血液或腦脊髓液2.2.1.2應(yīng)在病畜死亡后3h內(nèi)(越早越好)采取腦組織(選大腦皮質(zhì)、腦干、中腦、海馬回及橋腦)數(shù)小塊放于滅菌玻璃瓶。2.2.1.3豬應(yīng)采取流產(chǎn)死胎的腦組織，置冰箱內(nèi)立即送檢2.2.1.4不能立即檢查者.應(yīng)放－25℃～－30C冰箱·或加50%甘油生理鹽水,4C保存送檢2.2.2樣品的處理2.2.2.1血液應(yīng)分離出血清或血漿。2.2.2.2腦脊髓液可直接應(yīng)用。2.2.2.3腦組織應(yīng)研磨成棚狀，加人0.5%水解乳蛋白Hanks液(或堿性肉湯或10%脫脂奶生理鹽水）,制成10%懸液,3000r/min離心30min,吸取上清液，加人青霉素500TU/mL和鏈霉素500g/mL,在4C處理3h～4h(無污染者可不加青、鏈霉素處理),即得接種樣品。2.2.2.4懷疑有污染的樣品，也可用0.45m微孔濾膜過濾法處理。2.2.3動物分離法2.2.3.1取6g～8g小鼠10只(或3～5日齡乳鼠一窩）.用左手固定.在耳與眼之間用碘酒消毒。右