標(biāo)準(zhǔn)解讀
GB/T 18654.13-2008 是一項(xiàng)中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),全稱為《養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn) 第13部分:同工酶電泳分析》。該標(biāo)準(zhǔn)主要規(guī)定了利用同工酶電泳技術(shù)對(duì)養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)的方法、步驟和要求,以確保魚(yú)類種質(zhì)資源的優(yōu)良性狀得以保持和改善,促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。下面是對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容的具體說(shuō)明:
標(biāo)準(zhǔn)適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)適用于養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)的同工酶電泳分析,通過(guò)這種方法可以鑒定魚(yú)類品種的純度、遺傳多樣性及種群間的遺傳關(guān)系,為魚(yú)類種質(zhì)資源的評(píng)估、選育及保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。
同工酶電泳基本原理
同工酶是指催化相同化學(xué)反應(yīng)但分子結(jié)構(gòu)有所差異的一組酶。同工酶電泳是一種生物化學(xué)技術(shù),通過(guò)電場(chǎng)作用下蛋白質(zhì)(此處指同工酶)在凝膠介質(zhì)中的分離,來(lái)分析其多態(tài)性。不同基因型的個(gè)體,其同工酶譜帶表現(xiàn)會(huì)有所差異,據(jù)此可進(jìn)行遺傳差異分析。
檢驗(yàn)材料與樣品制備
- 樣品選擇:應(yīng)從目標(biāo)魚(yú)類的不同群體中隨機(jī)選取健康、無(wú)疾病的個(gè)體作為檢測(cè)對(duì)象。
- 組織采集:通常采集肌肉、肝臟、鰓等組織,具體依魚(yú)種及實(shí)驗(yàn)需求而定。
- 樣品保存與處理:采樣后需迅速冷凍或冷藏,以防止酶活性變化,隨后根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行提取和制備。
電泳條件與操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了電泳緩沖液的配制、凝膠的制備、樣品加載、電泳條件(如電壓、電流、時(shí)間)以及染色與脫色等具體操作步驟,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。
結(jié)果分析與判定
- 譜帶觀察:電泳結(jié)束后,通過(guò)特定染色方法使同工酶條帶顯色,然后對(duì)比分析各條帶的位置、數(shù)量和強(qiáng)度。
- 數(shù)據(jù)記錄與比較:記錄各樣品的同工酶圖譜,通過(guò)比對(duì)不同樣品間譜帶的異同,評(píng)估遺傳相似性或差異。
- 判定標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)譜帶特征,可判定魚(yú)類的遺傳純度、雜交程度或種群間的親緣關(guān)系。
質(zhì)量控制與注意事項(xiàng)
標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量控制措施,包括實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制、試劑與儀器校準(zhǔn)、操作規(guī)范性等,確保檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。同時(shí)提醒操作人員注意個(gè)人防護(hù),遵守生物安全原則。
文檔與報(bào)告
要求詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程、所用材料、操作步驟及觀察結(jié)果,并按照標(biāo)準(zhǔn)格式編制檢驗(yàn)報(bào)告,以便于信息交流和后續(xù)研究。
該標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)規(guī)范同工酶電泳分析方法,為養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)的科學(xué)管理和遺傳改良提供了重要的技術(shù)支持和質(zhì)量保障。
如需獲取更多詳盡信息,請(qǐng)直接參考下方經(jīng)官方授權(quán)發(fā)布的權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)文檔。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2008-06-27 頒布
- 2008-10-01 實(shí)施
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GB/T 18654.13-2008養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn)第13部分:同工酶電泳分析-免費(fèi)下載試讀頁(yè)文檔簡(jiǎn)介
犐犆犛65.150
犅50
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
犌犅/犜18654.13—2008
養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn)
第13部分:同工酶電泳分析
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20080627發(fā)布20081001實(shí)施
中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局
發(fā)布
中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
書(shū)
犌犅/犜18654.13—2008
前言
GB/T18654《養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn)》分為下列部分:
———第1部分:檢驗(yàn)規(guī)則;
———第2部分:抽樣方法;
———第3部分:性狀測(cè)定;
———第4部分:年齡與生長(zhǎng)的測(cè)定;
———第5部分:食性分析;
———第6部分:繁殖性能的測(cè)定;
———第7部分:生態(tài)特性分析;
———第8部分:耗氧率與臨界窒息點(diǎn)的測(cè)定;
———第9部分:含肉率測(cè)定;
———第10部分:肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定;
———第11部分:肌肉中主要氨基酸含量的測(cè)定;
———第12部分:染色體組型分析;
———第13部分:同工酶電泳分析;
———第14部分:DNA含量的測(cè)定;
———第15部分:RAPD分析;
……
本部分為GB/T18654的第13部分。
本部分的附錄A為規(guī)范性附錄。
本部分由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。
本部分由全國(guó)水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)淡水養(yǎng)殖分技術(shù)委員會(huì)歸口。
本部分起草單位:上海水產(chǎn)大學(xué)、中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所。
本部分主要起草人:李思發(fā)、趙金良、徐忠法、蔡完其、鄒曙明。
Ⅰ
書(shū)
犌犅/犜18654.13—2008
養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn)
第13部分:同工酶電泳分析
1范圍
GB/T18654的本部分規(guī)定了魚(yú)類同工酶聚丙烯酰胺凝膠水平電泳分析的試劑與材料、儀器和設(shè)
備、抽樣、分析步驟和結(jié)果判定。
本部分適用于魚(yú)類同工酶電泳分析。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過(guò)GB/T18654的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文
件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分,然而,鼓勵(lì)根據(jù)本部分達(dá)成
協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本
部分。
GB/T18654.1—2002養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn)第1部分:檢驗(yàn)規(guī)則
GB/T18654.2養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn)第2部分:抽樣方法
3原理
同工酶為該酶基因產(chǎn)物的表現(xiàn)型,根據(jù)其所帶電荷的不同和分子大小、形狀的不同,在電場(chǎng)和凝膠
中出現(xiàn)各同工酶組分不同的遷移率,經(jīng)催化、染色、掃描,根據(jù)酶帶遷移距離、數(shù)目及吸收強(qiáng)度進(jìn)行分析
比較,判定魚(yú)類物種、種群的遺傳特性。
4試劑和材料
除非另有說(shuō)明,在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當(dāng)純度的水。
4.1丙烯酰胺(Arc)。
4.2犖′,犖′亞甲基雙丙烯酰胺或甲叉雙丙烯酰胺(Bis)。
4.3四甲基乙二胺(TEMED)。
4.4過(guò)硫酸胺。
4.5三羥甲基氨基甲烷(Tris)。
4.6檸檬酸。
4.7乙二胺四乙酸(EDTA)。
4.8硼酸。
4.9L組氨酸。
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