對位紅檢測及標準

對位紅檢測及標準第一頁，共十三頁，2022年，8月28日任務：對位紅檢測及標準檢測方法一、液相色譜法高效液相色譜法凝膠凈化液相色譜法反相高效液相色潽法二、分光光度法--紫外可見分光光度計第二頁，共十三頁，2022年，8月28日1.對位紅的簡介對位紅亦稱對硝苯胺紅，常溫下呈固態(tài)，密度1.50g/cm3,熔點248-252℃。是一種常用的紅色顏料，屬于重氮系列化工合成染色劑，主要應用于機油，蠟，油彩，汽油等工業(yè)產品。對位紅的熔點即已達到250℃，明顯不能采用氣相色譜法來進行檢驗，因為樣品很難汽化。所以我們采用液相色譜法來對其進行檢測。第三頁，共十三頁，2022年，8月28日1.1高效液相色譜法優(yōu)點：操作簡單，靈敏可靠，結果令人滿意應用范圍：食品及調味品中對位紅、蘇丹紅的檢測對位紅檢測主要儀器與試劑：LC2010-AB型高效液相色譜儀(配有紫外可見光檢測器)(Shimazdu公司,日本)。甲醇(色譜純,美國TEDIA公司),正己烷(分析純,成都市科龍化工試劑廠),氯仿(分析純,重慶川東化工有限公司),丙酮(分析純,成都市科龍化工試劑廠),無水硫酸鈉(分析純,重慶北碚化學試劑廠),蘇丹紅(97.5%)、蘇丹紅(90.0%)、蘇丹紅!(97.0%)、蘇丹紅?(91.0%)、對位紅(95.5%)標準品(Dr.EhrenstorferGmbH公司,德國),層析用氧化鋁(中性,100~200目)(上海陸都化學試劑廠),1cm(內徑)&5cm(高)注射器管(上海金塔醫(yī)用器材有限公司)。標準溶液:精密稱取蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅!、蘇丹紅?、對位紅標準品各10.0mg(按其標稱含量折算),用丙酮溶解并定容至250mL,分別配成40mg/L的標準儲備溶液。取標準儲備溶液用丙酮配成0.16、0.32、0.64、1.28、2.56mg/L的標準系列溶液。第四頁，共十三頁，2022年，8月28日檢測操作步驟1、流動相的配制及預處理2、標準溶液配制3、樣品溶液配制4、液相色譜儀的開機5、液相色譜工作站設置6、走基線7、進樣8、數據采集9、標樣及試樣進樣第五頁，共十三頁，2022年，8月28日1.2凝膠凈化液相色譜法優(yōu)點：操作簡單，填充完凝膠柱后可重復使用，實際用量少于歐盟及國標方法，并且用淋洗液替代劇毒而又昂貴的乙腈進行提取，自制凝膠柱凈化富集避免了歐盟方法用乙腈直接萃取進樣對色譜柱壽命的影響及雜質峰的干擾，也避免了國標方法中采用氧化鋁柱凈化活度難以控制的麻煩，一次進樣可同時檢測食品中對位紅、蘇丹紅的含量應用范圍：食品及調味品中對位紅、蘇丹紅的檢測儀器及試劑：Agilent1100高效液相色譜儀(含二極管陣列檢測器、柱溫箱、自動進樣器)層析柱<1.6cm×50cm,填充Bio2BeadsS2X3凝膠。蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及對位紅標準品,純度均大于95%,配制時用少量三氯甲烷溶解,乙腈定容為0.5000g·L-1儲備液(按實際含量折算),使用時用乙腈稀釋至所需濃度。第六頁，共十三頁，2022年，8月28日色譜條件色譜柱ZorbaxSB2C18(4.6mm×250mm,5μm);流動相:乙腈(A)+酸性水溶液(用乙酸調至約pH4.0);洗脫程序:0～9minA90%;9～12min;A線性變化到100%,保持5min后回到初始比例;流速1.0mL·min-1;柱溫35℃;進樣量20μL;二極管陳列檢測器,程序可變波長見表1。第七頁，共十三頁，2022年，8月28日1.3反相高效液相色潽法簡介：在推薦參考方法的基礎上,對分離和色譜條件加以改進、優(yōu)化、選擇,用于幾種含對位紅食品采用擬定的方案進行分離檢測。結果:方法的檢出限為011μg/ml,標準曲線的線性相關系數(r)019999,在014-116μg/ml添加水平間,加標的回收率95%～105%,RSD019%～911%。改進的方法準確可靠,檢測效率高,具有實際應用意義。應用：測定食品中對位紅的殘留量第八頁，共十三頁，2022年，8月28日儀器、試劑及色譜條件儀器設備Waters2695型高效液相色譜儀。Waters、996型二極管陣列紫外檢測器。MilliQplus型超純水器,美國Millipore公司產品。超聲波清洗器。試劑對位紅標準品(95%,AcrosOrganics,USA);乙腈(分析純和色譜純)。色譜條件色譜柱,MERCKLichrocart250-4Lichrospher100RP-18,4×250mm,5μm;流動相:水+乙腈(5+95);流速:110ml/min;檢測波長:485nm;進樣量:10μl。第九頁，共十三頁，2022年，8月28日2.1.分光光度法--紫外可見分光光度計應用范圍：檢定物質

根據吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長雖ax和摩爾吸收系數是檢定物質的常用物理參數。這在藥物分析上就有著很廣泛的應用。在國內外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長和吸收系數載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。2.與標準物及標準圖譜對照

將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質，則兩者的光譜圖應完全一致。如果沒有標樣，也可以和現成的標準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。3.比較最大吸收波長吸收系數的一致性4.純度檢驗

5.推測化合物的分子結構

6.氫鍵強度的測定

實驗證明，不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。7.絡合物組成及穩(wěn)定常數的測定8.反應動力學研究9.在有機分析中的應用

第十頁，共十三頁，2022年，8月28日簡介在分光光度計中，將不同波長的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時，便可得到與眾不同波長相對應的吸收強度。如以波長（λ）為橫坐標，吸收強度（A）為縱坐標，就可繪出該物質的吸收光譜曲線。利用該曲線進行物質定性、定量的分析方法，稱為分光光度法，也稱為吸收光譜法。用紫外光源測定無色物質的方法，稱為紫外分光光度法。第十一頁，共十三頁，2022年，8月28日測定所需儀器：UV7504型紫外可見分光光度計，