GB/T 27538-2011動(dòng)物流感檢測A型H1N1流感病毒中HA、NA的焦磷酸測序檢測方法

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T27538—2011

動(dòng)物流感檢測A型H1N1流感病毒中

HANA的焦磷酸測序檢測方法

、

Animalinfluenzadetection—MethodofpyrosequencingforHAandNAin

influenzavirusAH1N1

()

2011-11-21發(fā)布2012-03-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T27538—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國山東出入境檢驗(yàn)檢疫局中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人徐彪梁成珠凌宗帥張?zhí)柙乐厩鄹吆陚O濤方紹慶林祥梅韓雪清

:、、、、、、、、、、

朱來華張鶴曉單虎

、、。

Ⅰ

GB/T27538—2011

動(dòng)物流感檢測A型H1N1流感病毒中

HANA的焦磷酸測序檢測方法

、

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了焦磷酸測序技術(shù)用于型流感病毒及其墨西哥變異株中的和核酸

AH1N1HANA

序列檢測方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于型流感病毒通用及型流感病毒墨西哥變異株的核酸檢測

AH1N1AH1N1。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

出入境動(dòng)物檢疫采樣

GB/T18088

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB19489

動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法

NY/T541

基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

SN/T1193

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

三磷酸腺苷

ATP:(adenosinetriphosphate)

脫氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

磷酸鹽緩沖生理鹽水

PBS:(phosphatebelancedsolution)

焦磷酸測序

Pyrosequencing:

反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

RT-PCR:(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

Taq酶Taq聚合酶

:DNA

4原理

焦磷酸測序是通過測序引物和擴(kuò)增單鏈模板雜交與聚合酶硫酸化酶熒

PCRDNA,DNA、ATP、

光素酶三磷酸腺苷雙磷酸酶和底物熒光素孵育逐一加入四種

、(APS)、,dNTPs(dATP,dTTP,dCTP,

如與模板配對此與引物的末端形成共價(jià)鍵釋放焦磷酸基團(tuán)硫酸化酶在

dGTP),,dNTP,(PPi);ATP

存在的情況下催化焦磷酸形成驅(qū)動(dòng)熒光素酶介導(dǎo)的熒光素向氧化熒光素轉(zhuǎn)化氧化熒

APSATP,ATP,

光素發(fā)出與量成正比的可見光信號(hào)光信號(hào)由電荷耦合檢測器收集并由軟件轉(zhuǎn)化為峰

ATP;(CCD)。

每個(gè)光信號(hào)的峰高與反應(yīng)中摻入的核苷酸數(shù)目成正比和未摻入的由三磷酸腺苷雙磷酸