微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制及質(zhì)量保證-副本

臨床微生物實(shí)驗(yàn)室

質(zhì)量控制及質(zhì)量保證2/4/20231微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

為保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，臨床細(xì)菌室室內(nèi)質(zhì)控需要：

對人員進(jìn)行評估建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)、選擇和適的質(zhì)控物對標(biāo)本質(zhì)量進(jìn)行評價(jià)對試劑、培養(yǎng)基、儀器設(shè)備進(jìn)行監(jiān)測對檢測過程進(jìn)行監(jiān)控對檢測結(jié)果和結(jié)果的臨床應(yīng)用進(jìn)行評估2/4/20232臨床微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制環(huán)節(jié)標(biāo)本合格判定培養(yǎng)基、試劑儀器設(shè)備結(jié)果報(bào)告標(biāo)本留取運(yùn)送分析前分析后分析中人員2/4/20233人員具備相關(guān)教育背景，每年接受專業(yè)技術(shù)及知識培訓(xùn)，熟悉微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程、消毒滅菌及生物安全知識。..包括新員工培訓(xùn)、老員工的再培訓(xùn)以及員工工作能力評估人員能力人員培訓(xùn)人員資質(zhì)包括其對諸如分析前、中、后特定階段的專業(yè)經(jīng)驗(yàn)和熟練試驗(yàn)技術(shù)。并直接參與質(zhì)控工作2/4/20234分析前質(zhì)量控制2/4/20235分析前質(zhì)量控制建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（SOP)

制定自檢測申請、標(biāo)本采集開始到發(fā)出檢測結(jié)果報(bào)告止的全過程的操作和管理程序微生物檢驗(yàn)標(biāo)本質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室應(yīng)給標(biāo)本采集者提供標(biāo)本采集和運(yùn)送的指導(dǎo)手冊實(shí)驗(yàn)室應(yīng)持續(xù)監(jiān)測標(biāo)本采集和運(yùn)送過程實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對標(biāo)本質(zhì)和量進(jìn)行評估不合格標(biāo)本拒收2/4/20236標(biāo)本采集和運(yùn)送標(biāo)本采集和運(yùn)送是細(xì)菌培養(yǎng)成功的最最重要的環(huán)節(jié)但由于標(biāo)本的采集和運(yùn)送常有護(hù)士或醫(yī)生或病人自己完成,所以也是最不容易控制的環(huán)節(jié)，造成的后果是:標(biāo)本污染、陽性率低2/4/20237標(biāo)本收集基本原則1）在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本2）采樣時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作3）采樣后立即送檢4）棉拭子標(biāo)本宜用運(yùn)送培養(yǎng)基5）標(biāo)本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑。6）送檢標(biāo)本應(yīng)注明來源和檢驗(yàn)?zāi)康?/4/20238

標(biāo)本收集和運(yùn)送的質(zhì)量控制

向臨床提供標(biāo)本采集說明(sop)不同部位標(biāo)本的采集方法采集最佳時(shí)間、次數(shù)標(biāo)本采集量正確時(shí)間、部位、方法等

對收集和運(yùn)送標(biāo)本的容器控制

無菌、無防腐劑、足夠大、安全嚴(yán)密、不易破碎、選擇合適的運(yùn)送培養(yǎng)基

2/4/20239

標(biāo)本收集和運(yùn)送的質(zhì)量控制正確的運(yùn)送方式

標(biāo)本因冷藏及pH改變或在氧氣中暴露，可能減少很多種細(xì)菌的存活時(shí)間

腦膜炎球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血桿菌，肺炎鏈球菌，沙門菌，志賀氏菌，霍亂弧菌，空腸彎曲菌及厭養(yǎng)菌定量評價(jià)細(xì)菌數(shù)量的培養(yǎng)（尿標(biāo)本）（運(yùn)送時(shí)間）需進(jìn)行微生物學(xué)檢測的所有標(biāo)本，應(yīng)在收集后2小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室2/4/202310標(biāo)本運(yùn)送貯存溫度血血培養(yǎng)瓶室溫或37膿、腦脊液、胸水、心包積液、腹水、滑液關(guān)節(jié)鼻竇分泌物短時(shí)間內(nèi)運(yùn)送：標(biāo)本在帶帽的注射器內(nèi)保證厭氧條件長時(shí)間內(nèi)運(yùn)送：使用運(yùn)送培養(yǎng)基室溫避免冷藏支氣管肺泡液、痰、其他分泌物、便等立刻送檢2-3小時(shí)冷藏眼、耳、鼻、尿道、生殖道、直腸、傷口拭子用運(yùn)送培養(yǎng)基>4小時(shí)室溫微生物檢驗(yàn)標(biāo)本的運(yùn)送及貯存條件2/4/202311

有可靠的標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)方法分類白細(xì)胞鱗狀上皮細(xì)胞門診或難以取材可培養(yǎng)6<25<25最好，適于培養(yǎng)5>25<104>2510-25不適于培養(yǎng)，重新留取標(biāo)本3>25>25210-25>251<10>252/4/202312

有可靠的標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)方法2/4/202313不合格標(biāo)本拒收除非不能再采集的標(biāo)本，否則不予檢測；如果培養(yǎng)或檢測，要對結(jié)果進(jìn)行說明。2/4/202314樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)1）樣本上無病患標(biāo)簽或病患標(biāo)簽與檢驗(yàn)申請單不符；2）樣本以不當(dāng)?shù)臏囟?、運(yùn)送培養(yǎng)基及容器運(yùn)送；3）樣本量不足、已被防腐劑固定或運(yùn)送時(shí)間過長；4）樣本外漏、容器破損及明顯受污染的標(biāo)本；5）樣本的檢驗(yàn)項(xiàng)目申請不適合進(jìn)行；6）特殊的難以再次獲得標(biāo)本，與臨床醫(yī)師聯(lián)系后再做相應(yīng)處理2/4/202315分析中質(zhì)量控制2/4/202316分析中質(zhì)量控制培養(yǎng)基主要試劑自制生化鑒定試劑染色液細(xì)菌、酵母菌鑒定系統(tǒng)藥物敏感試驗(yàn)儀器設(shè)備對臨床微生物實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控的基本要求只能滿足分析中對主要培養(yǎng)基、試劑的質(zhì)控需要是試驗(yàn)室進(jìn)行相應(yīng)操作的應(yīng)做到或至少要做到2/4/202317培養(yǎng)基的質(zhì)量控制2/4/202318培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

購買有質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的商品培養(yǎng)基，保存制造商質(zhì)量控制性能合格的證明文件購買無質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的商品或自制培養(yǎng)基，每批號產(chǎn)品檢測相應(yīng)的性能，如無菌試驗(yàn)、生長試驗(yàn)、生長抑制試驗(yàn)等2/4/202319

最好使用標(biāo)準(zhǔn)菌ATCC美國典型菌株保藏中心

NCTC英國國家典型菌種保藏中心2/4/202320培養(yǎng)基質(zhì)量控制肉眼檢查培養(yǎng)基的顏色、均一性、厚度、氣泡等無菌試驗(yàn)<100塊隨機(jī)選取5%的量，>100塊則任意選取10塊平板或管裝培養(yǎng)基35℃，培養(yǎng)24小時(shí)，無菌生長為合格。生長試驗(yàn)生長抑制試驗(yàn)（必要時(shí)）2/4/202321常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗(yàn)孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果血瓊脂需氧或CO2，24小時(shí)化膿鏈球菌19615肺炎鏈球菌6035大腸埃希菌25922生長，?溶血生長，α溶血生長巧克力瓊脂需氧或CO2，48小時(shí)淋病奈瑟菌43069流感嗜血桿菌10211生長生長SS瓊脂需氧，24小時(shí)鼠傷寒沙門菌14028福氏志賀菌12022糞腸球菌29212大腸埃希菌25922生長生長部分生長或抑制部分生長或抑制2/4/202322常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗(yàn)孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果麥康凱瓊脂

需氧，24小時(shí)大腸埃希菌25922福氏志賀菌12022金黃色葡萄球菌25923分解乳糖，菌落紅色不分解乳糖，菌落無色透明不生長中國藍(lán)瓊脂需氧，24小時(shí)大腸埃希菌25922福氏志賀菌12022金黃色葡萄球菌25923分解乳糖，菌落藍(lán)色不分解乳糖，菌落無色不生長

營養(yǎng)瓊脂需氧，24小時(shí)金黃色葡萄球菌25923生長沙保羅瓊脂需氧，24小時(shí)大腸埃希菌25922白色假絲酵母菌生長不生長2/4/202323常用生化反應(yīng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

生化管陽性質(zhì)控菌株陰性質(zhì)控菌株陽性質(zhì)控結(jié)果靛基質(zhì)大腸埃希菌肺炎克雷伯菌加入吲哚試劑后兩者液面接觸處由無色變?yōu)榧t色枸櫞酸鹽培養(yǎng)基弗勞地枸櫞酸桿菌大腸埃希菌培養(yǎng)基由淡綠色變?yōu)樯钏{(lán)色硝酸鹽培養(yǎng)基大腸埃希菌鮑曼不動桿菌將甲液和乙液等量加入后培養(yǎng)基由淡灰色變?yōu)榧t色

V-P培養(yǎng)基肺炎克雷伯菌大腸埃希菌將甲液和乙液按3：1加入后培養(yǎng)基由無色變?yōu)榧t色質(zhì)控要求：每批試劑使用前應(yīng)使用相應(yīng)陰性和陽性反應(yīng)（標(biāo)準(zhǔn)）菌株做質(zhì)控2/4/202324試劑質(zhì)量控制具體要求：每批次或使用當(dāng)天用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)菌株作陰、陽性對照控。氧化酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)過氧化氫酶試驗(yàn)β-內(nèi)酰胺酶2/4/202325

過氧化氫酶（H2O2）陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對照：糞腸球菌ATCC29212區(qū)別鏈球菌屬/葡萄球菌屬，少見G-菌、G+菌2/4/202326血漿凝固酶試驗(yàn)

陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對照：表皮葡萄球菌ATCC12228區(qū)別金黃色葡萄球菌/凝固酶陰性葡萄球菌2/4/202327氧化酶陽性對照：綠膿假單胞菌ATCC27853陰性對照：大腸桿菌ATCC25922氧化酶試驗(yàn)G-菌區(qū)別，腸桿菌科/非發(fā)酵菌/弧菌科/少見G-菌等2/4/202328β內(nèi)酰胺酶陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對照：流感嗜血桿菌ATCC29247判斷苛養(yǎng)菌流感嗜血桿菌、卡他布蘭漢菌和淋病奈瑟菌對青霉素、阿莫西林和氨芐西林的敏感性。2/4/202329染色液質(zhì)控革蘭染色：G+:金黃色葡萄球菌ATCC25923G-:大腸埃希菌ATCC25922抗酸染色:陽性:Mube.trculosisATCC25177陰性:大腸埃希菌ATCC25922要求:每批試劑并每周2/4/202330照片革蘭氏抗酸2/4/202331設(shè)備質(zhì)量控制新設(shè)備的檢查，包括如安全性、配件、有無破損等新設(shè)備比對實(shí)驗(yàn)（與舊設(shè)備比對或與參考設(shè)備或方法比對）設(shè)備運(yùn)行記錄、維護(hù)保養(yǎng)記錄、維修記錄制定和執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程培訓(xùn)操作人員2/4/202332手工、半自動、自動鑒定系統(tǒng)使用廠家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株對相應(yīng)試劑進(jìn)行質(zhì)控，每批試劑至少1次使用廠家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株做質(zhì)控，應(yīng)符合預(yù)期結(jié)果當(dāng)新儀器啟用時(shí)、新批號試劑啟用時(shí)、結(jié)果出現(xiàn)問題時(shí)都需要做質(zhì)控2/4/202333設(shè)備質(zhì)量控制天平、pH計(jì)、離心機(jī)、加樣槍、溫度計(jì)、生物安全柜、高壓鍋等需進(jìn)行校準(zhǔn)冷藏和培養(yǎng)等設(shè)備應(yīng)進(jìn)行溫度監(jiān)控并記錄2/4/202334藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制紙片擴(kuò)散法：每周至少1次；更換藥物或培養(yǎng)基時(shí)要做質(zhì)控。常見菌：大腸埃希菌ATCC25922,金黃色葡萄球菌25923,綠膿假單胞菌27853質(zhì)控手工法（稀釋法）：每周至少1次，最好每次試驗(yàn)做控。解釋：常規(guī)試驗(yàn)通常使用微量肉湯稀釋法，標(biāo)準(zhǔn)做法是每批試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株與臨床分離株同時(shí)做。金黃色葡萄球菌29213,大腸埃希菌ATCC25922綠膿假單胞菌27853質(zhì)控2/4/202335藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制藥物敏感試驗(yàn)（儀器法）使用廠家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株對相應(yīng)試劑進(jìn)行質(zhì)控?每批試劑至少1次?當(dāng)試驗(yàn)結(jié)果異常、不穩(wěn)定，或缺少經(jīng)驗(yàn)的人員操作時(shí)，應(yīng)增加質(zhì)控的頻率。2/4/202336紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制條件及質(zhì)控菌株細(xì)菌類別質(zhì)控菌株試驗(yàn)條件腸桿菌科大腸埃希菌ATCC25922大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h銅綠假單胞及不動桿菌屬銅綠假單胞ATCC27853大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）同上葡萄球菌屬金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h如測試苯唑西林、甲氧西林時(shí)，孵育時(shí)間應(yīng)增至24h2/4/202337紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制連續(xù)質(zhì)控檢測1次/天共30天，獲30個(gè)檢測值如：1、≤3個(gè)值超出范圍，可行每周一次質(zhì)控2、≥4個(gè)值超出范圍，繼續(xù)做每天一次質(zhì)控3、每當(dāng)試劑、藥敏紙片、培養(yǎng)基改變時(shí)，應(yīng)重新行30天的質(zhì)控4、每周一次質(zhì)控時(shí)如某周出現(xiàn)一次失控，則應(yīng)連續(xù)做5次質(zhì)控。零失控時(shí)作每周一次質(zhì)控，否則行連續(xù)30次質(zhì)控2/4/202338藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制

藥敏紙片保存：藥敏紙片應(yīng)在有干燥劑的容器內(nèi)低溫（-20℃）保存。少量日常工作用紙片4℃保存。藥敏紙片從冰箱取出后，應(yīng)平衡至室溫，從而減少暖空氣與冷的紙片接觸產(chǎn)生的冷凝。紙片應(yīng)在有效期內(nèi)使用，過期應(yīng)該丟棄。2/4/202339藥物敏感試驗(yàn)的規(guī)則

目前，我國絕大多數(shù)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室均參考美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(CLSI)出版的對各類細(xì)菌進(jìn)行常規(guī)藥敏試驗(yàn)和報(bào)告時(shí)的選藥指南2/4/202340CLSICLSI(clinicalandlaboratorystandardsinstitute)-美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所-已被我國衛(wèi)生部指定為部頒標(biāo)準(zhǔn)-每年有新版2/4/202341

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該認(rèn)真瀏覽CLSIM100內(nèi)容，將新的推薦內(nèi)容融入到實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)測試中，使之形成可行的操作規(guī)范M100每年更新一次M02,M07每三年更新一次2/4/2023422011年CLSI主要變化修正-腸桿菌科—頭孢唑啉折點(diǎn)-腸桿菌科—碳青霉烯類折點(diǎn)-銅綠—氨曲南和頭孢菌素折點(diǎn)（再評價(jià)）-附錄A—罕見AST結(jié)果的核實(shí)增加-表格—β溶血鏈球菌組可誘導(dǎo)克林霉素耐藥-厭氧菌表格-腸桿菌科細(xì)菌天然耐藥2/4/202343腸桿菌科-頭孢唑林折點(diǎn)的修訂

藥物紙片擴(kuò)散法（mm）MIC法（ug/ml)SIRSIR頭孢唑林2009>=1815-17<=14<=816>=32頭孢唑林2010---<=12>=4頭孢唑林2011*>=2320-22<=19<=24>=8*頭孢唑啉的新折點(diǎn)是建立在每8小時(shí)2克的給藥劑量上2/4/202344腸桿菌科-碳青霉烯類折點(diǎn)的修訂

藥物紙片擴(kuò)散法（mm）CLSIM100S-19(2009)CLSIM100S-21(2011)SIRSIR多利培南--->=2320-22<=19厄他培南>=1916-18<=15>=2320-22<=19美洛培南>=1614-15<=13>=2320-22<=19亞胺培南>=1614-15<=13>=2320-22<=192/4/202345腸桿菌科-碳青霉烯類折點(diǎn)的修訂

藥物MIC法（ug/ml)CLSIM100S19(2009)CLSIM100S-21(2011)SIRSIR多利培南---<=12>=4厄他培南<=24>=8<=0.250.5>=1亞胺培南<=48>=16<=12>=4美洛培南<=48>=16<=12>=42/4/202346分析后質(zhì)量控制2/4/202347分析后質(zhì)量控制報(bào)告的核對與審核分級報(bào)告報(bào)告結(jié)果的保存加強(qiáng)與臨床的溝通交流2/4/202348報(bào)告的核對與審核

在發(fā)出報(bào)告前確保所有室內(nèi)質(zhì)控在控。一般檢驗(yàn)的審核：檢測項(xiàng)目與申請單內(nèi)容是否一致。病人基本信息、檢測項(xiàng)目與申請單內(nèi)容是否一致。細(xì)菌的分離和鑒定流程是否符合標(biāo)準(zhǔn)。鑒定的細(xì)菌和臨床標(biāo)本是否相符。細(xì)菌的耐藥情況是否合理？對于連續(xù)送檢的患者，結(jié)果是否有變化？2/4/202349報(bào)告的核對與審核

異常檢驗(yàn)結(jié)果的審核：如細(xì)菌鑒定結(jié)果與藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果相矛盾，與臨床基本信息及診斷有矛盾，檢驗(yàn)結(jié)果之間關(guān)系不合理，此次結(jié)果與近期測定結(jié)果不相符，應(yīng)作如下分析：對檢驗(yàn)過程進(jìn)行審核，如標(biāo)本編號是否正確、結(jié)果錄入是否準(zhǔn)確。分析是否可能存在標(biāo)本采集、運(yùn)輸及保存中的問題，并及時(shí)與臨床聯(lián)系；分析是否可能存在與治療及病