化學(xué)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室分析技術(shù)-色譜-周倩如

職業(yè)衛(wèi)生評(píng)價(jià)與檢測(cè)第四章化學(xué)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室分析技術(shù)周倩如重慶市疾病預(yù)防控制中心

2014-5-13離子選擇性電極法離子選擇性電極法也稱(chēng)直接電位法，是利用膜電位把被測(cè)離子的活度表現(xiàn)為電極電位值，通過(guò)測(cè)定電極電位值來(lái)確定溶液中離子濃度的方法。離子選擇電極的結(jié)構(gòu)一般都是由敏感膜、內(nèi)參比電極和內(nèi)參比溶液組成。并且膜材料和內(nèi)參比液中均含有與待測(cè)離子相同的離子，其中膜電位的產(chǎn)生機(jī)理是基于電極膜和溶液界面的離子交換作用。離子選擇性電極法測(cè)量裝置示意圖2023/2/4當(dāng)電極置于溶液中，在電極膜和溶液界面將發(fā)生離子交換及擴(kuò)散作用，這就改變了兩相界面原有的電荷分布，因而形成了雙電層，產(chǎn)生了膜電位。由于內(nèi)參比電極電位固定，內(nèi)參比溶液的有關(guān)離子活度恒定，所以離子選擇電極電位只隨溶液中待測(cè)離子的活度變化而變化，并且兩者關(guān)系符合能斯特方程。離子選擇電極電位不能直接測(cè)出，通常是以離子選擇性電極為指示電極，飽和甘汞電極作為參比電極，插入被測(cè)溶液中構(gòu)成原電池，然后通過(guò)測(cè)量原電池電動(dòng)勢(shì)來(lái)求得被測(cè)離子的活度（或濃度）。在一定條件下原電池的電動(dòng)勢(shì)與被測(cè)離子活度的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系，通過(guò)測(cè)量原電池電動(dòng)勢(shì)，便可對(duì)被測(cè)離子進(jìn)行定量測(cè)定。2023/2/4離子選擇性電極法空氣中氟化氫和氟化物用浸漬玻璃纖維濾紙采集，洗脫后，用離子選擇電極測(cè)定氟離子的含量。樣品處理：將采過(guò)樣的濾紙放入塑料燒杯中，加入16ml

鹽酸溶液和2ml水；用玻璃棒將濾紙搗碎，放入1

根鐵芯塑料套攪拌子，于磁力攪拌器上攪拌3—5min，將濾紙打成漿狀。供測(cè)定。若樣品液中待測(cè)物的濃度超過(guò)測(cè)定范圍，可用鹽酸溶液稀釋后測(cè)定，計(jì)算時(shí)乘以稀釋倍數(shù)。樣品測(cè)定：用測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列的操作條件測(cè)定樣品溶液和樣品空白對(duì)照溶液。測(cè)得的樣品電位值減去空白對(duì)照的電位值后，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得氟的含量（μg）。處理后，向標(biāo)準(zhǔn)系列各杯加入1.3ml氨水溶液和2—3滴指示劑，在攪拌下用鹽酸溶液和氨水溶液調(diào)節(jié)溶液呈藍(lán)綠色。加5ml總離子強(qiáng)度緩沖液，插入氟電極及飽和甘汞電極，繼續(xù)攪拌4—5min，停止后，測(cè)量溶液的電位（mV）值。再攪拌1—2min，停止后，再測(cè)量電位值（mv）。如此操作直至讀數(shù)不變?yōu)橹埂?023/2/4氟化氫和氟化物的離子選擇電極法注意事項(xiàng)終點(diǎn)判斷：讀數(shù)不變不是指到儀器的顯示數(shù)值不變?yōu)橹?，而是根?jù)IUPAC（國(guó)際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)）推薦響應(yīng)時(shí)間定義，電位變化≤1mV/min時(shí)可認(rèn)為響應(yīng)達(dá)到平衡。重要的是，在標(biāo)準(zhǔn)液與樣液測(cè)量中，應(yīng)按完全一樣的方式進(jìn)行。氟電極的檢測(cè)線性范圍為為10-1-10-6mol/l，磷酸根、乙酸根、鹵素離子、硝酸根離子、硫酸根離子和碳酸氫根離子均不干擾測(cè)定。Fe3+、Al3+、Be2+、Th4+等可與F-絡(luò)合，使結(jié)果偏低。pH的影響：pH<5時(shí)，F(xiàn)-可與H+發(fā)生配位反應(yīng)，使F-濃度降低，因此檢測(cè)結(jié)果變低。當(dāng)pH＞8時(shí)，OH-對(duì)電極的響應(yīng)，將嚴(yán)重影響測(cè)定結(jié)果，使分析結(jié)果偏高。最佳檢測(cè)pH為5—6。2023/2/4氟化氫和氟化物的離子選擇電極法注意事項(xiàng)TISAB的作用：

掩蔽劑(通過(guò)絡(luò)合反應(yīng)掩蔽金屬離子的干擾)離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑(維持測(cè)試溶液的高離子強(qiáng)度狀態(tài))pH緩沖液(保證pH在5~6的范圍內(nèi)）甘汞電極的使用：甘汞電極的內(nèi)溶液使用的是飽和氯化鉀，作用是消除液接電位。試劑純度的影響。氟電極有使用壽命，機(jī)械損傷、膜受到化學(xué)腐蝕均可影響其壽命。在正常情況下，氟電極的壽命為1—2年。2023/2/4氟化氫和氟化物的離子選擇電極法什么叫色譜法？色譜法也稱(chēng)色層法或?qū)游龇ǎ且环N物理化學(xué)分析方法，它利用混合物中各物質(zhì)在兩相間分配系數(shù)的差別，當(dāng)溶質(zhì)在兩相間做相對(duì)移動(dòng)時(shí)，各物質(zhì)在兩相間進(jìn)行多次分配，從而使各組分得到分離。以氣體為流動(dòng)相的色譜法叫氣相色譜法（GC），它利用物質(zhì)的沸點(diǎn)、極性及吸附性質(zhì)的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)混合物的分離。2023/2/4氣相色譜法氣相色譜分類(lèi)：用固體吸附劑作固定相的叫氣固色譜。氣固色譜屬于吸附色譜，它是利用吸附劑表面對(duì)不同組分吸附性能差異進(jìn)行分離。用液體（涂在固體擔(dān)體上或毛細(xì)管壁上）作固定相的叫氣液色譜。氣液色譜屬于分配色譜，它是利用不同組分在兩相中分配系數(shù)不同進(jìn)行分離。實(shí)際工作中，氣液色譜的使用更廣泛。氣相色譜法的優(yōu)點(diǎn)：分離效能高，選擇性高，樣品用量少，靈敏度高，應(yīng)用范圍廣，分析操作簡(jiǎn)單快速。氣相色譜法的缺點(diǎn)：定性能力差。2023/2/4氣相色譜法氣相色譜法的工作過(guò)程：待測(cè)物樣品(氣體或液體）注入到色譜柱頂端，由載氣攜帶著通過(guò)色譜柱中固定相，使樣品中各組分分離，然后分別進(jìn)入檢測(cè)器。檢測(cè)器信號(hào)由電腦接收并處理，得到色譜圖，通過(guò)對(duì)色譜圖的處理，進(jìn)而對(duì)樣品中組分進(jìn)行定性和定量分析。2023/2/4氣相色譜法氣相色譜分離原理：是利用試樣中各組份在流動(dòng)相和固定相間的分配系數(shù)不同，組份在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次分配，由于固定相對(duì)各組份的吸附或溶解能力不同，因此各組份在色譜柱中的運(yùn)行速度就不同，經(jīng)過(guò)一定的柱長(zhǎng)后，便彼此分離，所以分配系數(shù)的差異是所有色譜分離的實(shí)質(zhì)性原因。2023/2/4氣相色譜法氣相色譜圖的一些基本術(shù)語(yǔ)2023/2/4氣相色譜法氣相色譜儀的構(gòu)成：氣相色譜儀基本結(jié)構(gòu)通常由氣路系統(tǒng)（載氣、氣體純化器，減壓閥）、進(jìn)樣系統(tǒng)（進(jìn)樣器、氣化室）、分離系統(tǒng)（色譜柱）、控溫系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)（檢測(cè)器）、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。2023/2/4氣相色譜法氣路系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)溫控系統(tǒng)載氣進(jìn)樣口柱溫箱檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理流量控制器氣路系統(tǒng)：氣源：作為氣相色譜載氣的氣體，要求要化學(xué)穩(wěn)定性好；純度高；價(jià)格便宜并易取得；能適合于所用的檢測(cè)器。常用的載氣有氫氣、氮?dú)?、氬氣、氦氣、二氧化碳?xì)獾鹊?。氣體凈化。氣流控制：載氣的流速不僅對(duì)色譜柱分離效率有重大影響，并且還決定分析所需要的時(shí)間。流速快，分析時(shí)間短；流速慢，分析時(shí)間增長(zhǎng)。檢測(cè)時(shí)，一般都有一個(gè)最佳流速，可以使柱子的分離效果最好。在實(shí)際工作中為了加快分析速度，選擇的流速往往稍高于最佳流速，但不影響分離。氣瓶的顏色：氮?dú)饪諝狻谏?、氫氣—綠色、氦氣—灰色2023/2/4氣相色譜法-氣路系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)：作用是進(jìn)樣和使樣品氣化。在儀器上就表現(xiàn)為進(jìn)樣器和進(jìn)樣口。通常，載氣的流量控制也是在進(jìn)樣口完成的。進(jìn)樣器：分為手動(dòng)進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣。進(jìn)樣口：使樣品瞬間氣化而不分解。2023/2/4氣相色譜法-氣路系統(tǒng)玻璃棉的作用：進(jìn)樣襯管中填有玻璃棉，其作用是過(guò)濾樣品中的雜質(zhì)和增大比表面積，以達(dá)到幫助樣品氣化的作用。如果不使用玻璃棉，儀器的重現(xiàn)性將受到影響。但玻璃棉不宜填得太多，過(guò)多的玻璃棉可能會(huì)造成二次進(jìn)樣，甚至峰分叉。2023/2/4氣相色譜法-氣路系統(tǒng)氣相色譜法不適用于沸點(diǎn)高于450℃的難揮發(fā)物質(zhì)和熱不穩(wěn)定的物質(zhì)。進(jìn)樣體積的選擇。進(jìn)樣量過(guò)小可能會(huì)不能達(dá)到儀器的靈敏度；進(jìn)樣量過(guò)大峰會(huì)展寬，分離度會(huì)變小。在液體進(jìn)樣時(shí)還應(yīng)考慮溶劑的氣化體積。（下圖為各種不同溶劑進(jìn)樣1μL的汽化體積(進(jìn)樣口溫度250℃，載氣壓力140kPa）2023/2/4氣相色譜法-氣路系統(tǒng)異辛烷正已烷甲苯乙酸乙酯丙酮二氯甲烷二硫化碳乙腈甲醇水110uL140μL170μL185μL245μL285μL300μL350μL450μL1010μL分離系統(tǒng)由色譜柱組成，它是色譜儀的核心部件，其作用是分離樣品。分為填充柱和毛細(xì)管柱。填充柱由不銹鋼或玻璃材料制成，內(nèi)裝固定相，一般內(nèi)徑為2—4mm，長(zhǎng)1—3m。毛細(xì)管柱又叫空心柱，分為涂壁，多孔層和涂載體空心柱。涂壁空心柱是將固定液均勻地涂在內(nèi)徑0.l—0.5mm的毛細(xì)管內(nèi)壁而成，毛細(xì)管材料可以是不銹鋼，玻璃或石英?，F(xiàn)在使用最廣泛的是石英毛細(xì)管柱。

2023/2/4氣相色譜法-分離系統(tǒng)色譜柱長(zhǎng)的選擇：分辨率與柱長(zhǎng)的平方根成正比。在其他條件不變的情況下為取得加倍的分辨率需有4倍的柱長(zhǎng)。較短的柱子適于較簡(jiǎn)單的樣品,尤其是由那些在結(jié)構(gòu)、極性和揮發(fā)性上相差較大的組分組成的樣品。但色譜柱越長(zhǎng)，分析時(shí)間越長(zhǎng)，分析效率降低。柱內(nèi)徑的選擇：

柱徑直接影響柱子的效率、保留特性和樣品容量。小口徑柱比大口徑柱有更高柱效，但柱容量更小。液膜厚度的選擇：液膜厚度影響柱子的保留特性和柱容量。厚度增加，保留也增加。薄液膜適合高沸點(diǎn)的化合物分析，厚液膜適合低沸點(diǎn)的化合物分析。固定相的選擇：不同的固定相對(duì)不同的分析物的影響不同，根據(jù)相似相溶原理，性質(zhì)越相近，固定相對(duì)其的流動(dòng)阻力越大，其保留時(shí)間越長(zhǎng)．色譜柱就是通過(guò)這個(gè)原理將不同性質(zhì)的混合物相互分開(kāi)的。2023/2/4氣相色譜法-分離系統(tǒng)色譜柱的維護(hù)：老化柱子

溶劑清洗

除掉柱入口污染的部分

2023/2/4氣相色譜法-分離系統(tǒng)進(jìn)樣口溫度:

考慮樣品中各組分的沸點(diǎn)，設(shè)定溫度使樣品瞬間汽化。色譜柱溫度:柱溫不得高于固定液的最高使用溫度，否則固定液會(huì)因揮發(fā)而流失。在保持較好分離度的前提下，對(duì)最難分離的物質(zhì)應(yīng)盡可能再用較高柱溫，但以保留時(shí)間適宜、峰型不拖尾為度。柱溫升高，柱效升高，但如果柱溫過(guò)高，會(huì)影響柱子的分離度。但柱溫太低，會(huì)使峰形變寬、柱效下降、并延長(zhǎng)了分析時(shí)間。柱溫的選擇還須從試樣沸點(diǎn)和固定液配比綜合考慮。柱溫一般選擇在接近或略低于組分平均沸點(diǎn)時(shí)的溫度。對(duì)于組分復(fù)雜、沸程寬的試樣，采用程序升溫的方法，使低沸點(diǎn)和高沸點(diǎn)樣品都能達(dá)到良好的分離。檢測(cè)器溫度:

防止檢測(cè)器污染，一般比色譜柱溫度高20-30℃。DET.T≥INJ.T≥COL.T+20℃2023/2/4氣相色譜法-溫控系統(tǒng)氫火焰離子化檢測(cè)器：

以氫氣和空氣燃燒的火焰作為能源，含碳有機(jī)物在火焰中燃燒產(chǎn)生離子化介質(zhì)和電子，在火焰燃燒處和收集極（電極）上加一電壓，帶電粒子被收集極吸引和捕獲形成離子流，根據(jù)離子流產(chǎn)生的電信號(hào)強(qiáng)度，檢測(cè)被色譜柱分離出的組分。

離子數(shù)目正比于碳原子數(shù)目(C-H鍵)。

一些官能團(tuán)如羰基(CO=)、羥基(－OH）、鹵素（－X）、胺（NH4+）則很少或根本不會(huì)離子化。對(duì)無(wú)機(jī)氣體如H2O,CO2,SO2,和NOx不靈敏。

檢測(cè)器溫度應(yīng)比柱溫箱設(shè)定的最高溫度高30C，且大于150C以防止水凝結(jié)在檢測(cè)器上。2023/2/4氣相色譜法-檢測(cè)系統(tǒng)電子捕獲檢測(cè)器

電子捕獲檢測(cè)器內(nèi)有一個(gè)放射源（Ni63放射源）作為負(fù)極，還有一正極。兩極間加適當(dāng)電壓。當(dāng)載氣(N2)進(jìn)入檢測(cè)器時(shí)，受放射源不斷放出β粒子射線的輻照發(fā)生電離，生成的正離子和電子分別向負(fù)極和正極移動(dòng)，形成恒定的基流。

含有電負(fù)性元素的樣品進(jìn)入檢測(cè)器后，就會(huì)捕獲慢速低能量電子而生成穩(wěn)定的負(fù)離子。

生成的負(fù)離子又與大量存在于周?chē)妮d氣正離子復(fù)合。結(jié)果導(dǎo)致基流下降，形成負(fù)峰。經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)換處理，形成色譜峰。ECD檢測(cè)器對(duì)鹵素、過(guò)氧化物、醌類(lèi)金屬有機(jī)物及硝基化合物非常靈敏。而對(duì)胺類(lèi)、醇類(lèi)及碳?xì)浠衔锊混`敏。靈敏度高，檢測(cè)限可達(dá)10-14g/ml，但線性范圍較窄。

使用注意事項(xiàng)：忌水、忌氧，忌使用含氯物質(zhì)作為溶劑（如氯仿）。

2023/2/4氣相色譜法-檢測(cè)系統(tǒng)保留時(shí)間定性在一定的色譜系統(tǒng)和操作條件下，每種物質(zhì)都有一定的保留時(shí)間，如果在相同色譜條件下，未知物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相同，則可初步認(rèn)為它們?yōu)橥晃镔|(zhì)。用不同檢測(cè)方法定性同一樣品可以采用多種檢測(cè)方法檢測(cè)，如果待測(cè)組分和標(biāo)準(zhǔn)物在不同的檢測(cè)器上有相同的響應(yīng)行為，則可初步判斷兩者是同一種物質(zhì)。

與其他儀器聯(lián)用定性將具有定性能力的分析儀器如質(zhì)譜（MS）、紅外（IR）、原子吸收光譜（AAS）、原子發(fā)射光譜（AES和ICP-MS）等儀器作為色譜儀的檢測(cè)器即可獲得比較準(zhǔn)確的定性信息。

注：時(shí)間帶的運(yùn)用！2023/2/4氣相色譜法-定性方法色譜定量分析的依據(jù)是被測(cè)物質(zhì)的量與它在色譜圖上的峰面積（或峰高）成正比。因?yàn)榉甯弑确迕娣e更容易受分析條件波動(dòng)的影響，且峰高標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍也較峰面積的窄，因此，通常情況是采用峰面積進(jìn)行定量分析。職業(yè)病危害因素檢測(cè)檢驗(yàn)定量分析一般采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。標(biāo)準(zhǔn)曲線法，亦稱(chēng)外標(biāo)法。首先用純物質(zhì)配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)試樣，在一定的色譜條件下準(zhǔn)確定量進(jìn)樣，測(cè)量峰面積（或峰高），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，要在與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線完全相同的色譜條件下準(zhǔn)確進(jìn)樣，根據(jù)所得的峰面積（或峰高），從曲線查出被測(cè)組分的含量。外標(biāo)法不使用校正因子，準(zhǔn)確性較高，操作條件變化對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性影響較大。對(duì)進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性控制要求較高，適用于大批量試樣的快速分析。2023/2/4氣相色譜法-定量方法原理：用活性炭管采集工作場(chǎng)所空氣中的苯，用二硫化碳解吸，經(jīng)色譜柱分離，氫焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量。樣品處理：將采過(guò)樣的前后段活性炭分別放入容積解析瓶中，各加入1.0mL二硫化碳，塞緊管塞，振搖1min，解析30min。解析液供測(cè)定。注意事項(xiàng)：二硫化碳的純度。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。2023/2/4氣相色譜法-苯的溶劑解吸法高效液相色譜法（HPLC）是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器的新型分離分析技術(shù)。分離原理與氣相色譜法類(lèi)似，都是根據(jù)不同組分在兩相間的分配系數(shù)不同進(jìn)行分離。高效液相色譜的流動(dòng)相是液體，因此適用于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定差的化合物分離。高效液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)：分離效能高、選擇性好、分析速度快、靈敏度高、重復(fù)性好、應(yīng)用范圍廣。高效液相色譜法的局限性：有機(jī)試劑成本高，毒性大；

缺少通用型檢測(cè)器；不能替代中低、壓柱色譜法。2023/2/4高效液相色譜法根據(jù)固定相的不同，液相色譜分為液固色譜、液液色譜和鍵合相色譜。應(yīng)用最廣的是以硅膠為填料的液固色譜和以微硅膠為基質(zhì)的鍵合相色譜。根據(jù)固定相的形式，液相色譜法可以分為柱色譜法、紙色譜法及薄層色譜法。按吸附力可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、體積排阻色譜和親和色譜。2023/2/4高效液相色譜法高效液相色譜儀由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（色譜工作站）五個(gè)基本部分和相關(guān)輔助部件構(gòu)成。2023/2/4高效液相色譜法高壓輸液系統(tǒng)由儲(chǔ)液罐、脫氣裝置、高壓輸液泵、過(guò)濾器、梯度洗脫裝置等組成。進(jìn)樣系統(tǒng)：隔膜式注射進(jìn)樣器和六通閥進(jìn)樣。分離系統(tǒng)：色譜柱、柱溫箱和連接管。2023/2/4高效液相色譜法色譜柱由柱管、填料、密封圈、過(guò)濾板、柱頭等組成。應(yīng)特別注意柱頭規(guī)格及無(wú)死體積連接的特性。2023/2/4高效液相色譜法—色譜柱色譜柱的使用注意點(diǎn)：避免柱壓過(guò)高（根據(jù)不同的柱子要求不同）。柱溫在40℃左右,一般不超過(guò)50℃。色譜柱的方向性。一般ODS柱流動(dòng)相PH使用范圍為2—7.5。避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳?。樣品進(jìn)樣前必須經(jīng)過(guò)微孔膜過(guò)濾。經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。如果用緩沖溶液作為流動(dòng)相，分析結(jié)束時(shí)必須先用純水沖洗10分鐘，再用甲醇-水沖洗，絕不能讓緩沖溶夜留在柱子中過(guò)夜。使用保護(hù)柱可延長(zhǎng)柱子壽命。保護(hù)柱應(yīng)經(jīng)常更換。2023/2/4高效液相色譜法—色譜柱柱溫箱的作用：控制溫度，保證分析結(jié)果重現(xiàn)性。升高溫度，降低了流動(dòng)相的黏度，降低柱壓，保證色譜系統(tǒng)的穩(wěn)定性。2023/2/4高效液相色譜法—柱溫箱檢測(cè)器是HPLC儀的三大關(guān)鍵部件之一。其作用是把洗脫液中組分定量轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)。紫外可見(jiàn)檢測(cè)器：

原理：基于被分析組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選擇性吸收

優(yōu)點(diǎn)：1）對(duì)溫度和流速變化不敏感

2）可用于梯度分析

缺點(diǎn)：僅適用于測(cè)定有紫外吸收的物質(zhì)熒光檢測(cè)器：

原理：基于被分析組分發(fā)射的熒光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)

優(yōu)點(diǎn)：1）靈敏度極高，是最靈敏的檢測(cè)器之一

2）選擇性好

3）對(duì)溫度和流速不敏感，可用于梯度洗脫

缺點(diǎn)：僅適用于測(cè)定可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)2023/2/4高效液相色譜法—檢測(cè)器在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。正相液-液分配分離：先選中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。常用溶劑的極性順序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)2023/2/4高效液相色譜法—流動(dòng)相流動(dòng)相使用的注意事項(xiàng)使用的溶劑必須是HPLC級(jí)別的，水最好是18.2MΩ的超純水。使用前應(yīng)使用0.45μm或更小孔徑濾膜過(guò)濾，目的是除去溶劑中的微小顆粒，避免堵塞色譜柱，尤其在使用無(wú)機(jī)鹽配制的緩沖液時(shí)。脫氣，目的是除去流動(dòng)相中因溶解或混合而產(chǎn)生的氣泡。使用了緩沖鹽的流動(dòng)相應(yīng)當(dāng)天配制。2023/2/4高效液相色譜法—流動(dòng)相原理：空氣中五氯酚用微孔濾膜與乙二醇吸收液串聯(lián)采樣，經(jīng)C18色譜柱分離,紫外檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量。樣品檢測(cè)：將采樣后的吸收液搖勻，吸收液定量轉(zhuǎn)移至具塞試管中，用甲醇洗滌吸收管及微孔濾膜，并定容至10.0mL，搖勻，供測(cè)定。2023/2/4酚類(lèi)化合物的五氯酚及其鈉鹽的高效液相色譜法離子色譜法（IC）是利用色譜技術(shù)測(cè)定水溶液中帶正電荷或負(fù)電荷的離子態(tài)物質(zhì)的方法，屬高效液相色譜法的一種。根據(jù)分離機(jī)理不同，離子色譜（IC）可分為離子交換色譜（HPIC）、離子排斥色譜（HPIEC）和離子對(duì)色譜（MPIC）三種。離子色譜法的優(yōu)點(diǎn)：分析過(guò)程快速、方便靈敏度高選擇性好可同時(shí)分析多種離子化合物運(yùn)行費(fèi)用非常低，無(wú)需特殊試劑分離柱的穩(wěn)定性好，容量高2023/2/4離子色譜法分離方式選擇：首先應(yīng)了解待測(cè)化合物的分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)以及樣品的基體情況，如無(wú)機(jī)還是有機(jī)離子，離子的電荷數(shù)，是酸還是堿，親水還是疏水，是否為表面活性化合物等。待測(cè)離子的疏水性和水合能是決定選用何種分離方式的主要因素。水合能高和疏水性弱的離子，如Cl-或K+，最好用離子交換分離。水合能低和疏水性強(qiáng)的離子，如高氯酸（ClO4-）或四丁基銨，最好用親水性強(qiáng)的