HSQC實驗設計的變化

HSQC實驗設計的變化

生物大分子波譜學原理吳季輝PEP-HSQC PEP是”preservationofequivalentpathways”的縮寫,在常規(guī)的HSQC中S橫向磁化在t1期間由于化學位移進動要產(chǎn)生二個相互正交的分量，但是最后的反向INEPT只能將同S90度脈沖相位垂直的分量傳遞給1H，另一個保留在橫向，形成多量子信號而不能被觀測到。因此平均地講，有一半信號沒有被利用。PEP類型實驗通過檢測期前的特別序列實現(xiàn)兩個分量的同時檢測，因而使信噪比提高。

PEP-HSQC

生物大分子波譜學原理吳季輝PEP-HSQC

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生物大分子波譜學原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學原理吳季輝3.PFG-PEP-HSQC

通常稱為”gradient-enhancedHSQC”，梯度場脈沖可以用于相干傳遞途徑的選擇，但經(jīng)常導致一半信號的損失，因為梯度場脈沖選擇信號依據(jù)信號的絕對相干階。但是梯度場脈沖可以同PEP-HSQC結合起來，既保留正交的兩個分量，又沒有一半傳遞途徑被抑制的問題。

PEP-HSQC

生物大分子波譜學原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學原理吳季輝液體NMR技術的發(fā)展：TROSY

（Transverserelaxation-optimizedspectroscopy）偶極－偶極弛豫與化學位移各向異性弛豫間的互相關會導致J偶合裂分成的雙線有不同的線寬即二個單線成分的弛豫速率不同1997年Pervushin創(chuàng)造性地設計了一種脈沖序列，該序列抑制弛豫較快的成分，而只保留弛豫較慢的成分。利用這一原理可以大大提高核磁共振可以解析的蛋白質(zhì)的分子量生物大分子波譜學原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學原理吳季輝原始的TROSY序列

生物大分子波譜學原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學原理吳季輝改進的TROSY序列－ST2-PT生物大分子波譜學原理吳季輝同一個時間點采集兩個FID，一個相位是ψ1=y，-x；ψ2=-y；ψ4=-y；φref=1，2另一個FID的相位取ψ1=y，x；ψ2=y；ψ4=y。同時g2變號TROSY

生物大分子波譜學原理吳季輝三.進一步的討論

前面提到當pS時TROSY序列的效果最好。這里p反映了偶極－偶極相互作用的大小，而S是化學位移各向異性的大小，與磁場強度成正比。在較低的磁場強度下，主要的弛豫貢獻來自偶極－偶極相互作用，只有在高場情況下，化學位移各向異性才能與偶極－偶極相互作用相抗衡?？梢奣ROSY的效果必須在高場譜儀上才能得到表現(xiàn)。

TROSY

生物大分子波譜學原理吳季輝具體到15N－1H基團，H=-16ppm，N=-160ppm，rHN=0.101nm，且CSA張量的主軸與rHN矢量基本平行，計算表明當磁場強度相當?shù)?H共振頻率為1100MHz時，pS同時pI。滿足這樣條件時，較窄譜線的線寬便由公式中的其他項決定，這些項的主要來源是其他1H核特別是CH與這對核的偶極－偶極相互作用，所以如果將CH上的1H代以2H，TROSY將有非常好的效果。

750MHz下的氘代蛋白質(zhì)的理論線寬蛋白質(zhì)分子量1H線寬（窄）1H線寬（寬）15N線寬（窄）15N線寬（寬）150kDa15Hz70Hz5Hz60Hz800kDa50Hz350Hz15Hz300HzTROSY的效果生物大分子波譜學原理吳季輝HSQCTROSY

生物大分子波譜學原理吳季輝在較低場強下TROSY效果不明顯，而且由于TROSY僅檢測雙線之一，與常規(guī)異核相關譜相比信噪比較低，故一般在高場譜儀上對氘標樣品進行。

除了這里討論的15N－1H相關譜，芳環(huán)上的13C的化學位移各向異性也比較大，故也可記錄TROSY類型的13C－1H相關譜

Problemset1

生物大分子波譜學原理吳季輝請查找CloreMG的順磁弛豫增強(PRE)相關的相關文獻，分析測量基于HSQC的1H