放線菌的雜交育種

微生物雜交育種

微生物雜交育種的一般程序：選擇原始親本誘變篩選直接親本直接親本之間親和力的鑒定雜交分離到基本培養(yǎng)基或選擇性培養(yǎng)基篩選重組體重組體分析鑒定放線菌的雜交育種

玻璃紙法

平板雜交法

放線菌的雜交育種

雜交技術(shù)【一】——玻璃紙法原理介紹：用于雜交實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)直接親本都攜帶營(yíng)養(yǎng)缺陷型標(biāo)記。另外，其中一個(gè)親本帶某藥物的抗性標(biāo)記，而另一親本則是對(duì)同種藥物具有敏感性。eg：

A親本帶met-和strB親本帶his-和ura-，但對(duì)str敏感。所用培養(yǎng)基：完全培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基（即在基本培養(yǎng)基中加入同一種藥物的補(bǔ)充培養(yǎng)基）

首先是將兩親本孢子接種到覆蓋于固體完全培養(yǎng)基上的玻璃紙表面將玻璃紙轉(zhuǎn)移到含有某藥物的補(bǔ)充培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。一定時(shí)間培養(yǎng)①因?yàn)锽親本對(duì)該藥物有敏感性，則在異核體中帶有對(duì)該藥物敏感的等位基因。②B對(duì)該藥物敏感，且所在的培養(yǎng)基中又缺乏所需his，ura營(yíng)養(yǎng)成分。③培養(yǎng)基上缺乏所需要的met成分

所謂異核體：即放線菌雜交過程的兩直接親本不發(fā)生染色體交換，兩親本的染色體獨(dú)立存在在同一細(xì)胞內(nèi)。菌落表型是原養(yǎng)型?；蛐头謩e與親本之一相同，無重組體出現(xiàn)，沒有發(fā)生遺傳信息交換。玻璃紙平板雜交的具體方法：①制孢子懸浮液②混合液接種到完全培養(yǎng)基上的半透性玻璃紙表面③移取長(zhǎng)有基質(zhì)菌絲的玻璃紙到添加有某藥物的補(bǔ)充培養(yǎng)基上④分離子的檢出和鑒別

雜交技術(shù)【二】——平板雜交法

該方法適合于大量菌落與一個(gè)共同實(shí)驗(yàn)菌株配對(duì)測(cè)定致育能力優(yōu)點(diǎn)：適于在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行大量配對(duì)菌株的雜交。

具體方法：①將多株親本A菌株的菌落以點(diǎn)種法分別接種到各個(gè)完全培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)備用。②將一株共同配對(duì)的親本菌株B產(chǎn)生的孢子作成孢子懸液，取一定量加入到另一個(gè)有限培養(yǎng)基瓊脂平板上，培養(yǎng)備用。③待A孢子成熟后，采用影印法復(fù)印到B菌株平板上培養(yǎng)。形成部分結(jié)合子。④兩親本染色體進(jìn)行一次單交換而形成雜合系。進(jìn)一步培養(yǎng)、繁殖、雜合系形成孢子，采用影印法將雜合系孢子復(fù)印到各種選擇性培養(yǎng)基平板上，從而從中檢出重組體分離子。重組體。

有限培養(yǎng)基：是專供異核體菌株生長(zhǎng)使用的培養(yǎng)基。通常在基本培養(yǎng)基