標準解讀

《GB/T 38477-2020 基因表達的測定 蛋白印跡法》是一項國家標準，主要規(guī)定了使用蛋白印跡技術（Western Blotting）來檢測基因表達的方法。該標準適用于實驗室條件下對生物樣本中特定蛋白質的存在與否及其相對含量進行定性或定量分析。

根據標準內容，首先明確了實驗所需的主要試劑和材料，包括但不限于抗體、封閉液、洗脫緩沖液等，并強調這些物質的質量直接影響最終結果準確性。接著詳細描述了樣品制備過程，從細胞裂解到蛋白質提取再到凝膠電泳分離，每一步驟都有具體的操作指南和技術參數(shù)要求。

對于核心步驟——轉膜與免疫反應，文件中不僅給出了推薦使用的設備類型及操作條件，還特別指出了影響因素如溫度、時間以及抗體稀釋比例等關鍵控制點。此外，關于信號檢測部分，《GB/T 38477-2020》也提供了多種方法供選擇，并說明了各自優(yōu)缺點及適用范圍。

在數(shù)據處理方面，標準建議采用合適的軟件工具來進行圖像采集與分析，并提醒研究者注意背景扣除、條帶強度測量時可能遇到的問題。同時，對于如何評估實驗重復性和可靠性也有相應指導原則。


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....

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  • 正在執(zhí)行有效
  • 2020-11-19 頒布
  • 2020-11-19 實施
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文檔簡介

ICS07080

A21.

中華人民共和國國家標準

GB/T38477—2020

基因表達的測定蛋白印跡法

Determinationofgeneexpression—Westernblot

2020-11-19發(fā)布2020-11-19實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標準化管理委員會

GB/T38477—2020

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中國標準化研究院提出并歸口

。

本標準起草單位河北醫(yī)科大學中國標準化研究院河北省食品檢驗研究院中國科學院遺傳與發(fā)

:、、、

育生物學研究所農業(yè)資源研究中心中國醫(yī)科大學河北師范大學

、、。

本標準主要起草人呂品馬愛進張巖趙偉東曹鵬秀趙美丞王寧

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T38477—2020

基因表達的測定蛋白印跡法

1范圍

本標準規(guī)定了用蛋白印跡法測定基因表達的方法原理試劑或材料儀器設備測

(Westernblot)、、、

定步驟和結果分析

。

本標準適用于動植物組織或體外培養(yǎng)細胞目的基因表達測定

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

3術語定義和縮略語

、

31術語和定義

.

下列術語和定義適用于本文件

。

311

..

基因表達geneexpression

將儲存在分子中的遺傳信息經過轉錄和翻譯轉變成具有生物活性的蛋白質分子的過程

DNA,。

32縮略語

.

下列縮略語適用于本文件

。

牛血清白蛋白

BSA:(BovineSerumAlbumin)

增強型化學發(fā)光

ECL:(EnhancedChemiluminescence)

十二烷基硫酸鈉

SDS:(SodiumDodecylSulfate)

十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳

SDS:-(SodiumDodecylSulfate-PolyacrylamideGel

Electrophoresis)

緩沖鹽溶液

TBS:Tris(TrisBufferedSaline)

吐溫緩沖鹽溶液

TBST:-20/Tris(Tween-20/TrisBufferedSaline)

4原理

分離的蛋白質轉移到轉印膜上后先用抗目的蛋白質的一抗與轉印膜上的蛋白質反

SDS,

應然后利用帶標記的二抗與一抗反應最后根據二抗標記物的特性檢測微量蛋白質

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