霉菌毒素生物降解技術(shù)應(yīng)用

霉菌毒素生物降解技術(shù)應(yīng)用報(bào)告人：計(jì)成單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)四川眉山一奶牛公司純牛奶被檢出致癌物AFM1，國(guó)家規(guī)定奶中AFM1最高值為0.5μg/kg，被檢牛奶中AFM1實(shí)測(cè)為1.2μg/kg，超標(biāo)1.4倍。前言——研究背景和意義

表1

黃曲霉毒素引發(fā)的人類肝癌情況肝癌高發(fā)區(qū)地理分布與該地區(qū)食物被黃曲霉毒素污染的程度呈正相關(guān)。1.人黃曲霉毒素中毒癌癥年平均發(fā)病率食物AFB1陽(yáng)性率調(diào)查年限來(lái)源世界平均7/10萬(wàn)——Yeh等，1989江蘇啟東縣63/10萬(wàn)52.3%1979-1989Yeh等，1989廣西扶綏縣52/10萬(wàn)48.8%1979-1989Yeh等，1989癌癥年平均發(fā)病率膳食中AFB1攝取量，ng/d調(diào)查年限來(lái)源江蘇啟東縣61/10萬(wàn)22.3-25.91983-1999孫桂菊等，2002廣西扶綏縣131/10萬(wàn)1211-40971973-1999孫桂菊等，2002肉雞肝損傷，免疫機(jī)能下降豚鼠肝臟顏色變化鴨腹腔病變患鴨拱背和尾下垂2.動(dòng)物黃曲霉毒素中毒低劑量的嘔吐毒素（DON）造成動(dòng)物生產(chǎn)性能和免疫機(jī)能下降，高劑量的毒素則引起動(dòng)物急性死亡(Prelusky

等,1994)。DON引起消化道出血

T-2毒素導(dǎo)致雛雞口腔損傷3.動(dòng)物單端孢霉烯族毒素中毒嘔吐毒素對(duì)豬的危害全身性出血，尿酸鹽沉積和上消化道出現(xiàn)炎癥。禽類嘔吐毒素中毒動(dòng)物對(duì)玉米赤霉烯酮的敏感程度依次是:豬、大鼠、牛和禽。青年母豬對(duì)玉米赤霉烯酮的敏感性最強(qiáng)，飼料中含0.1～0.15mg/kg的玉米赤霉烯酮即可引起陰門紅腫，子宮的體積和重量增加。

玉米赤霉烯酮對(duì)母豬子宮的影響（CemlynMartin，2003）4.動(dòng)物玉米赤霉烯酮中毒子宮水腫充血子宮水腫輕度充血正常子宮雷元培，2012玉米赤霉烯酮導(dǎo)致陰門紅腫玉米赤霉烯酮導(dǎo)致直腸和陰道脫垂豬玉米赤霉烯酮中毒（CemlynMartin，2003）動(dòng)物胚胎死亡仔豬八字腿豬玉米赤霉烯酮中毒內(nèi)容一、霉菌毒素污染概況二、飼料霉菌毒素污染的防治三、霉立解降解霉毒素的動(dòng)物試驗(yàn)四、霉菌毒素生物降解前景展望霉菌毒素是由真菌(霉菌)產(chǎn)生的具有毒性的次級(jí)代謝產(chǎn)物。主要的霉菌毒素包括：黃曲霉毒素、單端孢霉烯族毒素（T2毒素、嘔吐毒素）、玉米赤霉烯酮、赭曲霉素、煙曲霉素等。一、霉菌毒素污染概況....麥角（類）生物堿1.污染飼料的主要霉菌毒素聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）估計(jì),全世界谷物25%受霉菌毒素污染，平均有2%的糧食由于霉變不能食用，全世界由于霉菌毒素污染造成每年數(shù)千億美元的損失。

據(jù)美國(guó)農(nóng)業(yè)部統(tǒng)計(jì),畜禽食用霉菌毒素污染的飼料,畜牧業(yè)每年遭受14.4億美元的經(jīng)濟(jì)損失。北美Afla8%;ZON52%;DON87%;FUM49%OTA12%南美Afla22%;ZON57%;DON27%;FUM88%;OTA6%南歐Afla50%;DON41%;ZON19%;FUM83%.;OTA29%中東Afla8%;ZON29%;DON40%;FUM65%;OTA22%東北亞Afla13%;DON71%;

ZON56%;

FUM44%;OTA22%東南亞Afla65%;DON41%;

ZON49%;

FUM57%;OTA32%南亞Afla88%;DON30%;ZON30%;FUM58%;OTA71%大洋洲Afla11%;ZON18%;DON26%;FUM9%;OTA15%中歐Afla14%;DON60%;ZON26%;FUM32%;OTA28%北歐Afla0%;DON；62%;ZON3%;FUM40%;OTA25%2.

2010年全球霉菌毒素污染概況

中國(guó)玉米霉菌毒素污染抽樣檢查概況（2007）霉菌毒素樣本數(shù)檢出率(％)超標(biāo)率(％)含量黃曲霉毒素431007.02.1～54.7μg/kgT-2毒素7210027.812.5～1129.9mg/kg玉米赤霉烯酮4797.946.84.4～3613.6μg/kg嘔吐毒素409532.50.01～2.3mg/kg煙曲霉毒素757642.70.1～10.0mg/kg赭曲霉毒素7566.726.70.3～89.2μg/kg霉菌毒素樣品數(shù)平均含量ng/kg最高值ng/kg陽(yáng)性率(％)

黃曲霉毒素33424.81719.496.1T-2毒素34936.7252.198.3玉米赤霉烯酮420223.07772.387.9煙曲霉毒素30929.8240.499.7赭曲霉毒素383750.08400.085.4去氧瓜萎蓮菌醇412970.010900.099.0

亞洲地區(qū)配合飼料和飼料原料中霉菌毒素的分布（2007）我國(guó)華南、華東乃至華北地區(qū)收獲季節(jié)雨量較多，農(nóng)作物在田間就會(huì)受到霉菌的污染。解決糧食霉菌毒素污染是一個(gè)世界性問(wèn)題，是解決食品安全和人類健康的大問(wèn)題。Aspergillusspp.Fusariumspp.Penicilliumspp.黃曲霉寄生曲霉霉變玉米

黃曲霉毒素污染4.

2010年北京地區(qū)霉菌毒素污染的調(diào)查北京地區(qū)主要飼料原料中黃曲霉毒素檢測(cè)結(jié)果項(xiàng)目樣品數(shù)檢出率(%)超標(biāo)率(%)毒素平均含量(μg/kg)最小值(μg/kg)最大值(μg/kg)輕度污染率(%)中度污染率(%)嚴(yán)重污染率(%)玉米1650.06.26.92±4.810.0072.0043.86.20.0糠麩1346.20.00.27±0.110.001.3046.20.00.0豆粕1233.30.01.11±0.990.0012.0033.30.00.0DDGS1794.15.912.62±5.130.0083.688.25.90.0計(jì)成等2011

北京地區(qū)豬全價(jià)配合飼料黃曲霉毒素含量檢測(cè)結(jié)果項(xiàng)目樣品數(shù)檢出率（%）超標(biāo)率（%）毒素平均含量(μg/kg)最小值(μg/kg)最大值(μg/kg)輕度污染率（%）中度污染率（%）乳豬料757.114.36.56±3.430.0045.1742.814.3仔豬料1471.414.35.79±3.690.0047.2657.114.3中豬料1457.17.13.70±1.430.0048.1850.07.1大豬料1866.711.15.26±2.460.0046.8055.611.1妊娠母豬料1070.00.00.31±0.170.001.8070.00.0哺乳母豬料1369.223.111.65±5.080.0050.1046.123.1計(jì)成等2011鐮刀菌霉變玉米(DON)項(xiàng)目樣品數(shù)檢出率（%）超標(biāo)率（%）毒素平均含量（mg/kg）含量范圍（mg/kg）輕度污染率（%）中度污染率（%）玉米1492.957.11.01±0.17Ab0-2.1335.857.1糠麩1392.30.00.44±0.07Bc0-0.8992.30.0豆粕1154.50.00.05±0.02Cd0-0.2154.50.0DDGS17100.088.21.36±0.06Aa0.85-1.7211.888.2北京地區(qū)主要飼料原料中嘔吐毒素檢測(cè)結(jié)果計(jì)成等2011北京地區(qū)豬全價(jià)配合飼料嘔吐毒素含量檢測(cè)結(jié)果項(xiàng)目樣品數(shù)檢出率（%）超標(biāo)率（%）毒素平均含量（mg/kg）含量范圍（mg/kg）輕度污染率（%）中度污染率（%）乳豬料785.70.00.28±0.07b0.00-0.5385.70.0仔豬料14100.014.30.85±0.15a0.16-2.3185.714.3中豬料14100.014.30.62±0.09a0.12-1.1485.714.3大豬料1894.422.20.58±0.11a0.00-1.4472.222.2妊娠母豬料10100.013.60.82±0.14a0.13-1.4586.413.6哺乳母豬料1310023.10.62±0.13a0.07-1.5276.923.1計(jì)成等2011玉米赤霉烯酮霉變玉米項(xiàng)目樣品數(shù)檢出率（%）超標(biāo)率（%）含量范圍（μg/kg）陽(yáng)性樣品平均值（μg/kg）輕污染率（%）中度污染率（%）嚴(yán)重污染率（%）玉米1410006.25-321.47109.08±161.55B10000豆粕1154.4500-35.409.19±191.14B10000糠麩類1310000-44.4014.92±182.25B10000DDGS1710041.1848.89-2957.87882.68±146.4A58.8223.5317.6527

北京地區(qū)主要飼料原料中玉米赤霉烯酮檢測(cè)結(jié)果計(jì)成等2011項(xiàng)目樣品數(shù)陽(yáng)性樣品數(shù)檢出率（%）超標(biāo)率（%）含量范圍（μg/kg）陽(yáng)性樣品平均值（μg/kg）輕污染率（%）乳豬料7710004.69-106.8639.11±17.04

100仔豬料14141000<1-114.5953.60±13.02100中豬料141410007.59-131.6966.97±13.02100大豬料181810007.08-149.7659.01±12.51100懷孕母豬料101010009.23-149.1162.94±13.59100哺乳豬料131310007.35-231.5975.60±13.02100合計(jì)76761000<1-231.5958.88±5.3610028

豬全價(jià)配合飼料玉米赤霉烯酮含量檢測(cè)結(jié)果計(jì)成等2011聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）于1995年建議將危害分析與關(guān)鍵控制點(diǎn)（HACCP）系統(tǒng)應(yīng)用于霉菌毒素管理，通過(guò)加強(qiáng)作物生長(zhǎng)、成熟、收獲和貯存等各個(gè)環(huán)節(jié)的控制來(lái)最大限度的減少食品和飼料中的霉菌毒素。飼料在貯存過(guò)程中不可避免霉變：

1）嚴(yán)格控制原料的含水量2）使用優(yōu)質(zhì)防霉劑（丙酸及其鹽類）二、飼料霉菌毒素污染的防治適用范圍動(dòng)物霉菌毒素（ppb）AF1ZONT2OTADON玉米≤20≤500≤1000≤100≤5000配合飼料家禽≤20≤500≤1000≤100≤5000豬≤20≤500≤1000≤100≤1000犢?！?0≤500≤1000≤100≤1000泌乳期動(dòng)物≤20≤500≤1000≤100≤1000牛≤20≤500≤1000≤100≤5000-中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)ZON=玉米赤霉烯酮；T2=T-2毒素；OTA=赭曲霉毒素；DON=嘔吐毒素中國(guó)霉菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)方法分類具體技術(shù)優(yōu)缺點(diǎn)1.上世紀(jì)50年代傳統(tǒng)物理化學(xué)法堿處理、氧化處理、高溫處理、原料稀釋等①降低飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；②影響飼料的感官品質(zhì)；③有些方法去毒不徹底。2.上世紀(jì)90年代吸附劑吸附法硅鋁酸鹽類等無(wú)機(jī)吸附劑、酯化甘露聚糖等有機(jī)吸附劑

①影響維生素和微量元素等吸收；②在消化道內(nèi)吸附效果不穩(wěn)定；③造成環(huán)境蓄積性污染。3.本世紀(jì)初微生物發(fā)酵處理法芽孢桿菌、白腐真菌、假密環(huán)菌等①芽孢桿菌可以直接添加；②次級(jí)代謝產(chǎn)物可能有毒害作用。4.本世紀(jì)近10年純化降解酶降解法

白腐真菌、假密環(huán)菌、粘細(xì)菌、芽孢桿菌等所產(chǎn)解毒酶①特異性強(qiáng)；②不影響飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；③避免毒素的蓄積性污染環(huán)境；④避免次級(jí)代謝產(chǎn)物的毒害作用。1.霉菌毒素解毒方法研究進(jìn)展研究表明部分粘土類礦物質(zhì)能吸附黃曲霉毒素2.吸附劑吸附效果DON不易被吸附劑吸附樣品名稱樣品稱樣量g蒙脫石稱樣量gVB6結(jié)果（g/kg）平均數(shù)吸附率%九聯(lián)肉雞多維0.4099

13.2513.04

0.4247

12.83九聯(lián)肉雞+蒙脫石0.43480.54447.276.9446.780.42120.54096.60大龍仔豬多維0.4331

16.5116.60

0.4117

16.70大龍仔豬+蒙脫石0.42230.54359.808.9146.330.41820.54358.02吸附劑對(duì)維生素B6的吸附作用瘤胃內(nèi)容物含水量為84%-94%全消化道中67%的內(nèi)容物在瘤胃中。消化道食糜在瘤胃內(nèi)停留20-48小時(shí)，相當(dāng)于整個(gè)消化過(guò)程的一半時(shí)間。瘤胃中被吸附的黃曲霉毒素會(huì)解吸附。3.反芻動(dòng)物吸附劑應(yīng)用的問(wèn)題霉菌毒素傳統(tǒng)的物理和化學(xué)去毒方法存在效果不穩(wěn)定、營(yíng)養(yǎng)成分損失大、影響飼料適口性，且難以規(guī)模化生產(chǎn)等缺點(diǎn)而不能被廣泛應(yīng)用到實(shí)際生產(chǎn)中。微生物及生物酶解毒因具有解毒效率高、特異性強(qiáng)、對(duì)飼料和環(huán)境沒(méi)有污染等特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，備受研究者的關(guān)注。霉菌毒素生物降解指微生物、植物及其代謝產(chǎn)生的酶與毒素作用，使其分子結(jié)構(gòu)中毒性基團(tuán)被破壞而生成無(wú)毒降解產(chǎn)物的過(guò)程。4.生物降解法的發(fā)展國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào):30571353,31072063）、動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（編號(hào):2004DA125184（團(tuán)）0806），長(zhǎng)江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃研究項(xiàng)目（

編號(hào):

IRT0945

）及農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)科學(xué)技術(shù)體系（蛋雞）（編號(hào):nycytx-41-）項(xiàng)目資助下。對(duì)霉菌毒素（特別是黃曲霉毒素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮）生物降解進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究，并取得一些顯著成果。5.本研究室研究成果菌株編號(hào)菌株鑒定結(jié)果ANSM068Myxococcusfulvus橙紅色粘球菌ANSB060ANSS353Bacillussubtilis

枯草芽孢桿菌Stenotrophomonasmaltophilia嗜麥芽窄食單胞菌ANSBS02Brevundimonassp.

短波單胞菌ANSBC05Bacillusanthracis炭疽芽孢桿菌ANSKB03Klebsiellasp.克雷伯氏菌ANSCW03Cellulosimicrobiumsp纖維微桿菌ANSE471Enterobacterhormaechei霍氏腸桿菌ANSB532Brachybacteriumsp短狀桿菌課題組篩選到的能降解AFB1的菌株（Guan等，2008）CompanyLogo應(yīng)用Bacillussubtilis

枯草芽孢桿菌ANSB060經(jīng)過(guò)發(fā)酵生產(chǎn)產(chǎn)品—命名霉立解4.成果轉(zhuǎn)化產(chǎn)品—霉立解（一）霉立解對(duì)飼喂黃霉變花生粕肉雞生產(chǎn)性能的影響2012年4月中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)涿州實(shí)驗(yàn)站三、霉立解降解霉毒素的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

將420只體重接近的7日齡羅斯308肉公雞，隨機(jī)分為7組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞，進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。表1

試驗(yàn)設(shè)計(jì)分組日糧1基礎(chǔ)日糧+21%正?；ㄉ桑ㄕ龑?duì)照）2基礎(chǔ)日糧+21%霉變花生粕（負(fù)對(duì)照）3基礎(chǔ)日糧+21%正?；ㄉ?500g/t霉立解4基礎(chǔ)日糧+21%正常花生粕+1000g/t霉立解5基礎(chǔ)日糧+21%霉變花生粕+500g/t霉立解6基礎(chǔ)日糧+21%霉變花生粕+1000g/t霉立解7基礎(chǔ)日糧+21%霉變花生粕+2000g/t霉立解注：霉變花生粕為被黃曲霉毒素污染的花生粕，經(jīng)測(cè)定其AFB1含量為330μg/kg，AFB2含量為80.1μg/kg，AFG1含量為30.2μg/kg，AFG2含量為7.1μg/kg，其他種類毒素ZEN為15.1μg/kg，DON和OTA均未檢出。2.試驗(yàn)設(shè)計(jì)表2基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）原料名稱組成（%）營(yíng)養(yǎng)素名稱東北玉米58.7粗蛋白（%）21.48國(guó)產(chǎn)膨化大豆6.0禽代謝能MC/Kg3.01涿州豆粕8.0鈣（%）0.99正?；ㄉ?1.0總磷（%）0.65石粉1.2非植酸磷（%）0.43磷酸氫鈣1.8蛋氨酸（%）0.62食鹽0.3蛋胱氨酸（%）0.91大豆油2.0賴氨酸（%）1.15預(yù)混料1.0合計(jì)100.0樣品名產(chǎn)地AFB1含量ug/kg平均值ug/kg降解率%霉變花生粕1-1湖北336.96324.17霉變花生粕1-2湖北311.38霉變花生粕2-1湖北348.53342.37霉變花生粕2-2湖北336.22霉變花生粕1-1+霉立解湖北83.3358.1982.05霉變花生粕1-2+霉立解湖北33.05霉變花生粕2-1+霉立解湖北52.0642.8387.49霉變花生粕2-2+霉立解湖北33.60霉立解體外降解霉變花生粕黃曲霉毒素的測(cè)定各處理組飼料樣組別21天體重（g）42天體重（g）日增重（g/只﹒天）日采食量（g/只﹒天）料重比對(duì)照組844.19±8.85ab2391.01±24.03a73.66±1.68a134.56±2.11a1.86±0.02cd霉花生粕834.23±7.42b2257.00±35.65b67.75±1.49b132.34±1.47a1.97±0.02a好花生粕霉立解500838.33±4.25b2326.80±31.96ab70.88±1.56ab133.64±2.03a1.89±0.02bcd好花生粕霉立解1000828.81±7.94b2353.95±25.53a72.32±1.21a137.36±2.22a1.90±0.01bc霉花生粕霉立解500838.46±9.22b2339.78±29.97ab71.49±1.20ab137.07±1.75a1.92±0.02b霉花生粕霉立解1000839.25±8.52b2353.82±17.28a72.72±0.60a133.47±1.71a1.84±0.03d霉花生粕霉立解2000863.84±7.86a2381.04±22.24a72.41±0.86a136.73±1.41a1.89±0.01bcd表3

霉立解對(duì)飼喂黃曲霉毒素霉變花生粕肉雞22-42天生產(chǎn)性能的影響3.試驗(yàn)結(jié)果左正常花生粕1組中霉變花生粕2組右霉花生粕加霉立解5組4.試驗(yàn)6周末體重變化5.試驗(yàn)6周各處理組雞肝臟圖片負(fù)對(duì)照組雞出現(xiàn)肝臟病變死亡情況5.肉雞肝臟變化（二）霉立解對(duì)飼喂霉變玉米對(duì)產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響2010年12月中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)涿州實(shí)驗(yàn)站表1試驗(yàn)設(shè)計(jì)分組日糧C0基礎(chǔ)日糧（對(duì)照）C20基礎(chǔ)日糧+20%霉變玉米E20基礎(chǔ)日糧+20%霉變玉米+ANSB060發(fā)酵液C40基礎(chǔ)日糧+40%霉變玉米E40基礎(chǔ)日糧+40%霉變玉米+ANSB060發(fā)酵液C60基礎(chǔ)日糧+60%霉變玉米E60基礎(chǔ)日糧+60%霉變玉米+ANSB060發(fā)酵液注：（1）霉變玉米為被黃曲霉毒素污染的玉米，經(jīng)測(cè)定其AFB1含量為70μg/kg，其他種類毒素DON為0.23μg/kg，ZEN和OTA均未檢出。（2）枯草芽孢桿菌ANSB060菌液的添加量為：1公斤發(fā)霉玉米添加0.4升發(fā)酵液。1.試驗(yàn)設(shè)計(jì)表2基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）原料Ingredient比例Percentage,%營(yíng)養(yǎng)成分Nutritioncomponent含量Content玉米Maize62.34代謝能ME,MJ/Kg11.09大豆粕Soybeanmeal22.00粗蛋白CP,%16.50棉籽粕Cottonseedmeal3.00賴氨酸Lysine,%0.87小麥麩Wheatbran2.00蛋氨酸Methionine,%0.42磷酸氫鈣CaHPO41.60蛋+胱氨酸Met+Cys,%0.66石粉Limestone8.23鈣Ca,%3.48食鹽Salt0.25磷P,%0.58氯化膽堿Cholinechloride0.08有效磷AP,%0.40小蘇打Sodiumbicarbonate0.20蛋氨酸Methionine0.09賴氨酸Lysine0.07礦物質(zhì)預(yù)混料aMineralpremixa

0.11維生素預(yù)混料bVitaminpremixb

0.03合計(jì)Total100正常玉米（左）與被黃曲霉毒素污染的玉米（右）表3枯草芽孢桿菌對(duì)飼喂3周AFB1霉變玉米蛋雞生產(chǎn)性能的影響分組產(chǎn)蛋率（%）平均蛋重（g）日耗料量（g）料蛋比C075.00a56.71100.22ab2.48abC2065.00ab56.4893.08bc2.88abE2074.68a56.5881.12cd1.93bC4063.41ab53.95109.63a3.75aE4066.08ab54.3198.27ab2.96abC6049.79b53.3269.44d3.21abE6055.39b53.3970.76d2.56abSEM6.100.461.780.12P0.010.19<.00010.022.生產(chǎn)性能試驗(yàn)結(jié)果組別蛋黃重(g)蛋黃色澤蛋殼強(qiáng)度

(kg/cm2)蛋殼厚度

(mm)哈氏單位蛋白高度

(mm)蛋形指數(shù)蛋殼色澤C016.29abc6.96a2.68a0.34a72.625.231.3586.55C2016.35ab5.95bc2.20ab0.32bc73.655.561.3585.37E2017.17a6.27ab2.37a0.32bc77.055.661.3685.37C4014.73d5.742.43a0.31a73.335.151.3785.26E4015.16bcd5.79bc2.40a0.33ab72.215.481.4084.08C6015.50bcd5.88bc1.88b0.31a76.485.861.3983.73E6015.01cd5.94bc1.80b0.32bc76.345.621.3983.16SEM0.120.070.040.0020.590.070.0030.25P<.0001<.0001<.00010.010.050.130.110.18表4立解060菌對(duì)飼喂3周AFB1霉變玉米蛋雞蛋品質(zhì)的影響3.雞蛋品質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果表5枯草芽孢桿菌對(duì)飼喂3周AFB1霉變玉米蛋雞器官指數(shù)的影響處理肝臟重/活體重（%）脾臟重/活體重（%）腎臟重/活體重（%）心臟重/活體重（%）C03.25a0.090.770.40C202.56b0.090.700.33E203.11a0.090.750.34C402.09c0.080.680.32E402.62b0.090.730.35C601.97c0.080.670.35E602.44bc0.100.640.37SEM0.500.000.100.10P<.00010.080.160.094.肝、脾、腎試驗(yàn)結(jié)果表6枯草芽孢桿菌對(duì)飼喂6周AFB1霉變玉米蛋雞肝臟代謝酶活和抗氧化指標(biāo)的影響處理SOD活性（U/mgprot）GSH-Px活性（U/mgprot）MDA含量（nmol/mgprot）C0157.26a37.48a0.21cC20142.28ab31.75ab0.39cE20139.87ab32.53ab0.42cC40132.86b22.99b0.85bE40148.84ab31.18ab0.37cC60132.25b24.16b1.29aE60145.75ab29.17ab0.85bSEM9.665.250.20P0.050.04＜0.00015.抗氧化試驗(yàn)結(jié)果表7枯草芽孢桿菌對(duì)飼喂6周霉變玉米蛋雞回腸和結(jié)腸食糜AFB1殘留量的影響處理回腸食糜結(jié)腸食糜AFB1殘留量（μg/kg）降解率（%）AFB1殘留量（μg/kg）降解率（%）C00±0.000.7±0.01C206.59±0.077.66±0.09E203.35±0.34496.80±0.0511C4015.54±0.0243.11±0.20E4011.56±0.142624.42±0.0943C6022.05±0.1238.60±0.04E6013.78±0.073725.01±0.16356.腸道黃曲霉毒素降解試驗(yàn)結(jié)果烘干物質(zhì)）（三）霉立解對(duì)仔豬生長(zhǎng)的應(yīng)用效果研究2011年4月億萬(wàn)中元生物技術(shù)公司試驗(yàn)豬場(chǎng)1.試驗(yàn)設(shè)計(jì)

96頭健康的三元雜交仔豬，平均體重25±0.5kg，試驗(yàn)期為21天。處理重復(fù)對(duì)照組20%霉玉米20%霉玉米+1kg/T霉立解12348888888888882.試驗(yàn)結(jié)果平均采食量（g)平均日增重（g)料肉比腹瀉率（%）對(duì)照組1361±26643±152.12±0.113.120%霉玉米組1346±31619±202.21±0.0540.6霉立解+20%霉玉米組1351±19636±232.09±0.090仔豬生產(chǎn)性能結(jié)果（四）嘔吐毒素降解菌對(duì)生長(zhǎng)豬的應(yīng)用效果研究（合作研究）1999年6月加拿大農(nóng)業(yè)部食品研究所

用作益生菌

飼料混合發(fā)酵去毒降解飼料中DON在魚的腸道篩選微生物1.試驗(yàn)設(shè)計(jì)豬飼養(yǎng)試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)驗(yàn)證解毒微生物的效率適應(yīng)期4天預(yù)飼期9天攻毒期9天恢復(fù)期11天小豬組成A正常玉米B玉米+DONC發(fā)酵+毒的玉米D發(fā)酵的玉米玉米

玉米+DON

+DON

發(fā)酵+毒玉米++DON發(fā)酵玉米+DON嘔吐毒素

0

5ppm5ppm

0DOM-1去環(huán)氧化嘔吐毒素

0

00

0表1豬去毒試驗(yàn)設(shè)計(jì)測(cè)定指標(biāo)生產(chǎn)性能指標(biāo)個(gè)體重耗料量

每個(gè)試驗(yàn)階段測(cè)兩次飼料增重比試驗(yàn)期第18天取血，測(cè)定血清生化指標(biāo)

4個(gè)處理組的豬有顯著差異B組玉米+DOND組發(fā)酵玉米C組發(fā)酵玉米+DONA組正常玉米2.試驗(yàn)結(jié)果處理組ABCD攻毒期日增重(g/d)882b458a835b835b日采食量(g/d)1,337b943a1,367b1,347b料重比0.66b0.47a0.62b0.61ab恢復(fù)期日增重(g/d)9161,056890899日采食量(g/d)1,6481,6801,6291,628料重比0.550.630.550.55表2解毒微生物對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響+DON+DON表3.豬血清中DON和DOM-1的含量處理n

重復(fù)數(shù)DON平均濃度±

SD(ng?ml-1)DOM平均濃度±

SD(ng?ml-1)A組正常玉米6n.d.n.d.B組玉米+DON838.8±13.7n.d.C組發(fā)酵玉米+DON8n.d.20.8±4.4D組發(fā)酵玉米6n.d.n.d.n.d.:未檢測(cè)出;SD:表示8個(gè)處理的標(biāo)準(zhǔn)誤

結(jié)論細(xì)菌發(fā)酵處理的日糧可以消除DON對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響。細(xì)菌本身對(duì)仔豬無(wú)毒，且不影響飼料適口性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)，利用微生物在飼料和食品中去毒是可行的。國(guó)內(nèi)外生物酶降解玉米赤霉烯酮的研究較少。Orsolya等（2004）從白蟻尾腸分離到酵母菌株Trichosporon，可以有效降解飼料中的玉米赤霉烯酮，能將ZEA分子中的內(nèi)酯環(huán)打開生成非雌激素化合物。

（五）降解玉米赤霉烯酮毒素微生物1.在保存的菌株和雞、魚、鼠和牛的腸道內(nèi)容物等72個(gè)樣品進(jìn)行了篩選。最終在動(dòng)物腸道食糜中分離出能夠高效降解玉米赤霉烯酮的菌株。2.經(jīng)過(guò)初篩和復(fù)篩，篩選得到對(duì)玉米赤霉烯酮降解率達(dá)到80%的細(xì)菌2株，其中一株是枯草芽孢桿菌（霉立解01G）。3.目前正在研究其作用機(jī)理及其降解產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。申請(qǐng)專利已經(jīng)授權(quán)，專利號(hào)：ZL201010920651.2本實(shí)驗(yàn)室降解玉米赤霉烯酮毒素微生物CompanyLogo發(fā)明專利：降解玉米赤霉烯酮毒素的微生物使用發(fā)酵液和上清液800μl加玉米赤霉烯酮200μl（500ppb）在37℃反應(yīng)72小時(shí)后使用HPLC檢測(cè)，其降解率分別為83%和74%。圖1.霉立解01G菌發(fā)酵液和上清液對(duì)玉米赤霉烯酮的降解率降解率%降解解活性物質(zhì)性質(zhì)研究取該菌株的上清液800μl進(jìn)行熱處理（100℃加熱10min）后與200μl玉米赤霉烯酮（500ppb）反應(yīng)，另取800μl上清液加入蛋白酶K（0.01g蛋白酶K）反應(yīng)兩小時(shí)后，向混合液中加入200μl玉米赤霉烯酮，反應(yīng)72小時(shí)后檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)熱處理或蛋白酶K處理后的上清液降解率比未處理的發(fā)酵液和上清液降低55-65%。降解率%樣品名產(chǎn)地含量ug/kg平均值ug/kg消化率%霉變花生粕1-1湖北0.000

霉變花生粕1-2湖北0.00

霉變花生粕2-1湖北26.9429.84

霉變花生粕2-2湖北32.75

霉變花生粕1-1+霉立解湖北0.00

霉變花生粕1-2+霉立解湖北0.00

霉變花生粕2-1+霉立解湖北0.000100%霉變花生粕2-2+霉立解湖北0.00表

霉立解體外降解玉米赤霉烯酮的測(cè)定結(jié)果后備母豬玉米赤霉烯酮中毒后飼用霉立解情況的調(diào)查2012年6月河北某豬場(chǎng)調(diào)查目標(biāo)：飼喂相同飼料并出現(xiàn)玉米赤霉烯酮中毒現(xiàn)象的同一豬舍母豬豬品種：長(zhǎng)白豬和大白豬豬只總數(shù)：120頭調(diào)查豬只月齡：6個(gè)月（80kg左右）飼料中玉米赤霉烯酮含量：兩種后備母豬飼料中玉米赤霉烯酮含量分別為414ug/kg和517ug/kg飼喂時(shí)間：30天調(diào)查時(shí)間：