課題2月季花藥培養(yǎng)

課題2月季的花藥培養(yǎng)知識(shí)回顧單倍體育種的過(guò)程？花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（N）秋水仙素處理，使染色體加倍植株（2N）特點(diǎn)：1、明顯縮短育種年限2、后代植株都為純合子正常植株（2N）花絲囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉。（一）被子植物的花粉發(fā)育1、雄蕊一、基礎(chǔ)知識(shí)花藥：花粉囊：大多數(shù)被子植物的花藥是由4個(gè)花粉囊（少數(shù)植物為2個(gè)）。

當(dāng)花粉囊中有大量的花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）?；ǚ郏夯ǚ哿Ｊ怯苫ǚ勰讣?xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而形成，因此，花粉粒是單倍體的生殖細(xì)胞。小孢子母細(xì)胞4個(gè)小孢子（四分體時(shí)期）2、被子植物的花粉發(fā)育過(guò)程減數(shù)分裂1個(gè)小孢子（單核居中期）1個(gè)小孢子（單核靠邊期）單核期花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核花粉粒（雙核期）有絲分裂生殖細(xì)胞將再進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子。①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）。②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)花粉管細(xì)胞核和兩個(gè)精子。同一個(gè)花粉粒中的兩個(gè)精子和花粉管細(xì)胞核的基因型相同？了解：思考：如果小孢子母細(xì)胞的染色體是2N，則精子的染色體是多少？移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導(dǎo)生根（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑兩種途徑之間并沒(méi)有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。(三)、影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇①不同植物的誘導(dǎo)成功率很不相同；②同一植物的不同生理狀況；（花期早期－初花期）③合適的花粉發(fā)育期；（單核期）不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開(kāi)始松動(dòng)，給材料消毒帶來(lái)困難困難；為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開(kāi)放的花蕾。盛開(kāi)的或略微開(kāi)放的花都不易選做實(shí)驗(yàn)材料。2、培養(yǎng)基的組成3、其他因素親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理、接種密度等。二、實(shí)驗(yàn)操作（一）材料的選?。ǘ┎牧系南荆ㄈ┙臃N和培養(yǎng)（一）材料的選取從花藥看：初花期

從花粉看：?jiǎn)魏似趶幕ɡ倏矗和耆撮_(kāi)放

通過(guò)鏡檢來(lái)確定是否處于適宜的發(fā)育期。方法一：醋酸洋紅法(最常用)方法二：焙花青-鉻礬法（某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色）花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，易被堿性染料著色染成紅色。這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。（二）材料的消毒無(wú)菌水沖洗3～5次

花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒無(wú)菌水清洗無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2～4分鐘（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）用于培養(yǎng)花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾消毒即可。（三）接種和培養(yǎng)1、剝?nèi)』ㄋ幵跓o(wú)菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥。注意：①勿損傷花藥，以免誘導(dǎo)出非花粉愈傷組織。②要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。2、接種立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個(gè)。3、培養(yǎng)溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

①培養(yǎng)條件：一般經(jīng)過(guò)20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開(kāi)裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。長(zhǎng)出愈傷組織時(shí)則將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。②培養(yǎng)：如果花藥開(kāi)裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開(kāi)裂后盡快將幼小植株分開(kāi)，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開(kāi)。4、鑒定和篩選

在花藥培養(yǎng)中，特別是通過(guò)愈傷組織形成的花粉植株，常常會(huì)出現(xiàn)染色體組數(shù)目變化（主要原因是營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合造成的）。三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

3、接種是否成功1、選材是否恰當(dāng)

選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，應(yīng)通過(guò)顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。2、無(wú)菌技術(shù)是否過(guò)關(guān)如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問(wèn)題。

如果接種的花藥長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時(shí)轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進(jìn)一步分化成再生植株。例1：某二倍體植物是雜合體，圖為其花藥中未成熟花粉在適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)產(chǎn)生完整植株的過(guò)程。據(jù)圖回答：（1）圖中①表示的是該花粉培養(yǎng)過(guò)程中的:過(guò)程，②表示的是

過(guò)程，X代表的是

，③表示的是

過(guò)程，④表示的是誘導(dǎo)

過(guò)程。脫分化再分化胚狀體分化生根（2）圖中從愈傷組織形成完整植株的途徑有兩條，具體通過(guò)那一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中

的種類及其濃度配比，最后獲得的來(lái)源于為成熟花粉的完整植株都稱為

植株（甲）。未成熟花粉經(jīng)培養(yǎng)能形成完整植株，說(shuō)明為成熟花粉有

。（3）對(duì)植株進(jìn)行

，才能使其結(jié)實(shí)產(chǎn)生后代（乙），否則植株甲只有通過(guò)

的方式才能產(chǎn)生后代（丙）。乙、丙兩種植株中，能產(chǎn)生可育花粉的是

植株，該植株群體中每一植株產(chǎn)生可育花粉的基因組成