課題2-土壤中分解尿素的細菌的分離和計數2

課題2土壤中分解尿素的細菌的分離和計數1專題2微生物的培養(yǎng)與應用三.實驗的具體操作

㈠.土壤取樣

從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3厘米左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。2為什么？◆取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。什么方法？（二）制備培養(yǎng)基

準備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。每個稀釋度下需要3個選擇培養(yǎng)基，1個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。

3什么原則？將稀釋相同倍數的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數目應明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。問題：為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數量，選用的稀釋范圍相同嗎？原因：土壤中各類微生物的數量（單位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數約為2185萬，放線菌數約為477萬，霉菌數約為23.1萬。結論：為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應當有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。4◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度稀釋倍數目的細菌104、105、106保證獲得菌落數在30～300之間、適于計數的平板放線菌103、104、105真菌102、103、104原因：不同微生物在土壤中含量不同◆應在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^程中，每一步都要在火焰旁進行◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保證獲得菌落數在30～300之間、適于計數的平板（三） 樣品的稀釋6

由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數為103～107。㈣.取樣涂布◆實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。7㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計數時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數目。選取菌落數目穩(wěn)定時的記錄作為結果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數目。培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。8◆如果得到了2個或2個以上菌落數目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數，如果同一稀釋倍數的三個重復的菌落數相差較大，表明試驗不精確，需要重新實驗。微生物的培養(yǎng)與觀察9[一]無菌操作1、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。2、應在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。3、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。[二]做好標記注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等。[三]規(guī)劃時間

四、操作提示10五.結果分析與評價1.通過對照實驗，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。2.提示：選擇每個平板上長有30—300個菌落的稀釋倍計算每克樣品的菌數最合適。同一稀釋倍數的三個重復的菌落數不能相差懸殊，如相差較大，表示實驗不精確。11六.課外延伸

在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細菌能夠分解尿素。12大腸桿菌呈黑色中心,有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂(EMB)上典型特征

13測定飲水中大腸桿菌數量的方法是將一定體積的水用細菌過濾器過濾后，將濾膜放到伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現黑色，通過記述得出水樣中大腸桿菌的數量。14濾膜法測定細菌數目：本課題知識小結:151.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（）

A.培養(yǎng)細菌

B.培養(yǎng)真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表現某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()

A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素實踐訓練CD163.下列說法不正確的是（）

A.科學家從70－80度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶

B.統(tǒng)計某一稀釋度的5個平板的菌落數依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數的估計值

C.設置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度

D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數量最大，種類最多。4.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（）

A.較多的氮源物質B.較多的碳源物質

C.青霉素類藥物D.高濃度食鹽BC17用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數目，其結果與實際值相比（）

A.比實際值高

B.比實際值低

C.和實際值一致

D.比實際值可能高也可能低B下列能選擇出分解尿素的細菌的培養(yǎng)基是()A.KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水

B.KH2PO4