走進分子生物學實驗室

走進分子生物學實驗室

——分子生物學實驗室常用設備和儀器介紹孫文宋田源培養(yǎng)箱常用培養(yǎng)箱一般為隔水式恒溫培養(yǎng)箱細菌——37℃霉菌——28℃使用時注意培養(yǎng)箱的水位，水位過低會引起溫度變化幅度加大，不能控溫冰箱4℃適合儲存某些溶液、試劑、藥品等。-20℃適用于酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質樣品等。-80℃適合某些長期低溫保存的樣品、大腸桿菌菌種、純化的樣品、特殊的低溫處理感受態(tài)等的保存。0-10℃的層析冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實驗。搖床分為恒溫式和常溫式用于大腸桿菌，酵母菌等生物工程菌種的振蕩培養(yǎng)及蛋白的誘導表達，培養(yǎng)通常為37℃和28℃烘箱用于滅菌和洗滌后的物品烘干有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進行烘干；用于RNA方面的實驗用具，需要在250℃烤箱中烘干。高壓蒸汽滅菌鍋/箱主要用于能耐高溫的物品，如培養(yǎng)基、金屬器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡膠及一些藥物的滅菌。壓力升至103.4kPa，溫度達121.3℃，維持15~20分鐘，可達到滅菌目的。電子天平按照最大稱量的不同分為超微量（2-5g），微量（3-50g），半微量（20-100g）等規(guī)格使用前需要檢查是否水平稱量時需要稱量紙，決不允許直接稱量稱量腐蝕性和吸濕性物質時需要用燒杯稱量pH計玻璃電極平常不用時應浸泡在蒸餾水中。甘汞電極在初次使用前，應浸泡在飽和氯化鉀溶液內，不要與玻璃電極同泡在蒸餾水中。不使用時也浸泡在飽和氯化鉀溶液中。磁力攪拌器在配置試劑過程中，有些試劑較難溶解，這時需要借助磁力攪拌器。磁力攪拌器可以加速溶解固體內容物。磁力攪拌器一般帶加熱功能。電爐和微波爐生物安全柜和超凈工作臺PCR儀、PCR反應及結果檢測聚合酶鏈式反應高溫變性低溫退火中溫延伸基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。優(yōu)點特異性強靈敏度高簡便、快速純度要求低PCR儀類型普通和梯度PCR儀熒光定量PCR儀原位PCR儀PCR反應體系10×擴增緩沖液10μl4種dNTP混合物（終濃度）各100～250μmol/L引物（終濃度）各5～20μmol/L模板DNA0.1～2μgTaqDNA聚合酶5～10UMg2+（終濃度）1～3mmol/L補加雙蒸水100μl

參加PCR反應的物質引物DNA聚合酶dNTP模板鏈緩沖體系引物設計原則①引物長度：15-30bp②引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。③引物內部不應出現(xiàn)互補序列。④兩個引物之間不應存在互補序列⑤引物與非特異擴增區(qū)的序列的同源性不要超過70%⑥引物3’端應嚴格要求配對，引物的5’端可以修飾。循環(huán)數(shù)一般為25～30次。循環(huán)數(shù)決定PCR擴增的產(chǎn)量。一般循環(huán)數(shù)為30個左右，循環(huán)數(shù)超過30個以后，DNA聚合酶活性逐漸達到飽和，產(chǎn)物的量不再隨循環(huán)數(shù)的增加而增加。結果檢測熒光素（溴化乙錠，EB）染色凝膠電泳熒光探針凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳（水平）聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）（垂直）蛋白質的凝膠電泳（SDS）凝膠制備和電泳過程制作膠模融化瓊脂糖，冷卻后加入EB倒模