臨床酶學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)教學(xué)文稿

臨床(línchuánɡ)酶學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)臨床(línchuánɡ)生物化學(xué)檢驗(yàn)林孟戈第一頁，共30頁。第一節(jié)酶學(xué)基本知識●酶的本質(zhì)---絕大部分的酶是蛋白質(zhì)，有些酶是核酸和酶蛋白組成的復(fù)合體，極少數(shù)酶的本質(zhì)是核酸。●酶的特性---極高的催化效率(xiàolǜ)、高度的特異性(specificity)以及催化作用的可調(diào)節(jié)性●酶的結(jié)構(gòu)與功能單純酶酶蛋白(apoenzyme)結(jié)合酶輔酶(coenzyme)輔因子(cofactor)輔基(prostheticgroup)第二頁，共30頁。●酶是蛋白質(zhì)，具有一、二、三級結(jié)構(gòu)，有些酶還具有四級結(jié)構(gòu)。●單體酶(monomericenzyme)---只由一條多肽鏈構(gòu)成●寡聚酶(oligomericenzyme)---由多個(duōɡè)相同或不同亞基以非共價鍵連接的酶●多酶體系(multienzymesystem)---由幾種不同功能的酶彼此聚合而成的多酶復(fù)合物●酶的必需基團(tuán)(essentialgroup)---與酶的活性密切相關(guān)的基團(tuán)●酶的活性中心(activecenter)---組成具有能與底物結(jié)合并起催化反應(yīng)的特定空間結(jié)構(gòu)區(qū)域第三頁，共30頁。酶的命名(mìngmíng)、分類與編號●酶的命名(mìngmíng)---習(xí)慣命名(mìngmíng)法、系統(tǒng)命名(mìngmíng)法●酶的分類---可分為六大類氧化還原酶(oxido-reductases)、轉(zhuǎn)移酶(transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、異構(gòu)酶(isomerases)、合成酶(或連接酶)(synthetases或ligases)●酶的編號---用4個數(shù)字加以系統(tǒng)編號第一個數(shù)字表示酶的類別，第二個表示亞類，第三個表示亞-亞類，第四個表示酶的編號序數(shù)。第四頁，共30頁。習(xí)慣用名英文縮寫EC編號(biānhào)系統(tǒng)名乳酸脫氫酶LD（LDH）1.1.1.27L乳酸：NAD+氧化還原酶單胺氧化酶MAO1.4.3.4單胺：氧化還原酶γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶γ-GT/GGT2.3.2.2γ-谷氨酰肽：氨基酸γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST2.6.1.1L-門冬氨酸：α-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷草轉(zhuǎn)氨酶）(GOT)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT2.6.1.2L-丙氨酸：α-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）(GPT)肌酸激酶CK2.7.3.2三磷酸腺苷：肌酸轉(zhuǎn)磷酸酶堿性磷酸酶ALP(AKP)3.1.3.1正磷酸單酯磷酸水解酶臨床酶學(xué)分析中常用酶的名稱(míngchēng)與編號第五頁，共30頁。第六頁，共30頁。三、酶促反應(yīng)(fǎnyìng)動力學(xué)（一）酶促反應(yīng)(fǎnyìng)方程第七頁，共30頁。（二）酶促反應(yīng)(fǎnyìng)進(jìn)程第八頁，共30頁。（三）酶動力學(xué)參數(shù)(cānshù)1．反應(yīng)速度(fǎnyìngsùdù)2．米氏常數(shù)(1)初速度指在反應(yīng)最初階段底物的消耗量很小（一般在50%以內(nèi)）時的反應(yīng)速度(fǎnyìngsùdù)(2)最大反應(yīng)速度(fǎnyìngsùdù)指當(dāng)酶的結(jié)合位點(diǎn)與底物結(jié)合飽和時的反應(yīng)速度(fǎnyìngsùdù)第九頁，共30頁。(四)酶偶聯(lián)反應(yīng)(fǎnyìng)ABCD

酶學(xué)分析中作為(zuòwéi)試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶Ei——指示(zhǐshì)酶Ea——輔助酶ExEiEa工具酶第十頁，共30頁。第十一頁，共30頁。第二節(jié)血清酶變化(biànhuà)的生理病理機(jī)制一、血清酶的來源與去路（一）血清酶的來源1．血漿固有(gùyǒu)酶2．非血漿固有(gùyǒu)酶①外分泌酶②細(xì)胞酶（二）血清酶的去路1．腎小球?yàn)V過從尿液中排出2．網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除3．血管內(nèi)失活或滅活第十二頁，共30頁。二、血清酶變化(biànhuà)的生理病理機(jī)制（一）血清酶的生理差異1．性別2．年齡3．飲食4．運(yùn)動5．妊娠（二）血清酶變化的病理機(jī)制1．酶合成異常2．細(xì)胞內(nèi)酶的滲漏3．酶進(jìn)入(jìnrù)血液的方式4．其他血管內(nèi)的抑制作用、清除速度第十三頁，共30頁。(一)酶活性單位1．慣用單位2．國際單位---在特定的條件下，一分鐘內(nèi)使底物轉(zhuǎn)變(zhuǎnbiàn)一微摩爾的酶量為一個國際單位。3．Katal單位---在規(guī)定條件下，每秒鐘催化轉(zhuǎn)化一摩爾底物的酶量。1katal＝60×106U

第三節(jié)酶含量的表示(biǎoshì)方法一、酶活性濃度(nóngdù)表示法第十四頁，共30頁。（二）酶活性濃度指單位體積樣品中的酶活性單位（三）正常上限(shàngxiàn)升高倍數(shù)（ULN)是指用測得的酶活性結(jié)果除以參考范圍上限(shàngxiàn)第十五頁，共30頁。第十六頁，共30頁。二、酶蛋白質(zhì)量濃度(nóngdù)表示法測定(cèdìng)酶蛋白質(zhì)量濃度優(yōu)點(diǎn)：①靈敏度高②特異性高③可測定無活性的酶④與酶活性測定一起，計算(jìsuàn)免疫比活性⑤在同工酶測定中更有價值第十七頁，共30頁。第四節(jié)酶催化活性濃度測定的理論(lǐlùn)基礎(chǔ)一、定時(dìnɡshí)法二、連續(xù)監(jiān)測法第十八頁，共30頁。（三）連續(xù)監(jiān)測法的方法(fāngfǎ)設(shè)計1．以人工合成色素原做底物的連續(xù)監(jiān)測2．NAD(P)H的連續(xù)監(jiān)測3．以Trinder反應(yīng)做指示(zhǐshì)反應(yīng)的連續(xù)監(jiān)測4．特殊反應(yīng)類型的連續(xù)監(jiān)測第十九頁，共30頁。第五節(jié)酶活性測定的影響因素與最適條件(tiáojiàn)的確定一、方法(fāngfǎ)因素的影響（一）正向反應(yīng)與逆向反應(yīng)（二）檢測底物或檢測產(chǎn)物（三）底物啟動(qǐdòng)模式與樣品啟動(qǐdòng)模式第二十頁，共30頁。二、測定條件的影響(yǐngxiǎng)與最適條件的確定（一）底物種類和濃度（二）緩沖液種類、pH和離子強(qiáng)度（三）反應(yīng)溫度（四）輔助(fǔzhù)因子和激活劑（五）抑制劑（六）酶偶聯(lián)法中的輔助(fǔzhù)酶和指示酶（七）延滯期與線性期的確定（八）樣品與試劑比例第二十一頁，共30頁。三、其他因素對測定結(jié)果(jiēguǒ)的影響（一）儀器（二）校準(zhǔn)物（三）實(shí)驗(yàn)(shíyàn)參數(shù)（四）副反應(yīng)第二十二頁，共30頁。第六節(jié)同工酶檢測(jiǎncè)技術(shù)一、電泳(diànyǒnɡ)法二、抑制法三、其他方法（一）熱變性（二）親和層析法第二十三頁，共30頁。免疫抑制法利用同工酶的一種(yīzhǒnɡ)亞基與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，酶活性受到抑制，測定加與不加抗體前后樣品中酶活性的變化，可以計算出該型同工酶的活性。不加抗CK-MM血清時樣品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性；加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性：50％CK-MB的活性；加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性×2：CK-MB活性；所測CK-MM和CK-MB之總活性－CK-MB活性＝CK-MM活性。第二十四頁，共30頁。第七節(jié)目前(mùqián)常用診斷酶的酶活性測定一、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶與門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的測定(cèdìng)第二十五頁，共30頁。L-丙氨酸＋α-酮戊二酸α-丙酮酸＋L-谷氨酸丙酮酸＋NADH＋H+乳酸(rǔsuān)＋NAD+ALT（樣品(yàngpǐn)）LD（試劑(shìjì)）酶耦聯(lián)法測定ALT340nm－△A/minα-酮酸標(biāo)本中GLDH