羅氏HE4試劑性能評估-劉萬里主任

羅氏HE4試劑性能評估綜述中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院劉萬里內(nèi)容羅氏HE4檢測原理Elecsys?HE4SFDA注冊研究概況Elecsys?HE4性能評估Elecsys?HE4性能小結(jié)

內(nèi)容羅氏HE4檢測原理Elecsys?HE4SFDA注冊研究概況Elecsys?HE4性能評估Elecsys?HE4性能小結(jié)

標(biāo)記免疫電化學(xué)發(fā)光檢測ECL(IA)TechnologyE Electro C ChemoL LuminescenceI ImmunoA Assay

方法、儀器、試劑三位一體的特定自動化分析，系統(tǒng)解決了大規(guī)模樣本檢測穩(wěn)定、高效、快速等問題。是醫(yī)學(xué)超微量分析的一次戰(zhàn)略性革命RocheHE4檢測試劑設(shè)計(jì)

雙抗體夾心一步法原理：雙抗體夾心法檢測時(shí)間：18分鐘1st孵育:９分鐘

10

μL血樣,生物素標(biāo)記HE4特異性單克隆抗體，釕標(biāo)記HE4特異性單克隆抗體，形成抗原抗體復(fù)合物2nd孵育:９分鐘加入鏈酶親和素包被的磁珠，通過生物素和鏈酶親和素反應(yīng)，形成復(fù)合物

檢測:

反應(yīng)復(fù)合物送入測量池，磁珠結(jié)合至電極表面，未結(jié)合的反應(yīng)物通過ProCell清除通過對電極增加電壓觸發(fā)化學(xué)發(fā)光光電子釋放，后者通過光電倍增管檢測RocheHE4檢測試劑設(shè)計(jì)

HE4檢測原理生物素標(biāo)記的HE4單克隆抗體Ru待檢樣本中的HE4(10μL)釕標(biāo)記的HE4單克隆抗體Ru鏈酶親和素包被的磁珠Ru進(jìn)行檢測9min9minRocheHE4試劑成分

試劑–工作溶液M:

包被鏈酶親和素的微粒（透明蓋），1瓶，6.5mL：包被鏈霉親和素的微粒0.72mg/mL；防腐劑

R1:

生物素化抗人HE4抗體（灰蓋），1瓶，10mL：生物素化單克隆抗HE4抗體（小鼠）0.75mg/L，磷酸鹽緩沖液100mmol/L，pH值6.5；防腐劑R2:

釕復(fù)合物標(biāo)記的抗人HE4抗體（黑蓋），1瓶，10mL：釕復(fù)合物標(biāo)記的單克隆抗HE4抗體（小鼠）1.5mg/L；磷酸鹽緩沖液100mmol/L，pH值7.4；防腐劑RocheHE4試劑成分

需要的材料試劑名稱貨號規(guī)格ElecsysHE405950929190100測試ElecsysHE4CalSet059509451904

x

1

mLPreciControlHE4059509531902

x

1

mLeachofPreciControlHE4

1and2試劑名稱貨號規(guī)格ElecsysCA125II11776223322100testsperrackpackElecsysCA125IICalSet117762403224

x

1

mLPreciControlTumormarker117764521222x3mLeachofPreciControlTumormarker1and2卵巢癌腫瘤標(biāo)志物

提供HE4和CA125檢測的廠家

HE4CA125Roche(Elecsys,cobase)Abbott(Architect)Beckman(Access)Siemens(Immulite,Centaur,Vista)Diasorin(Liaison)B.R.A.H.M.S(Kryptor)BectonDickinson(TriPath)plannedCanAg（ELISA）羅氏所有免疫平臺均可以同時(shí)提供CA125和HE4的檢測內(nèi)容羅氏HE4檢測原理Elecsys?HE4SFDA注冊研究概況Elecsys?HE4性能評估Elecsys?HE4性能小結(jié)

Elecsys?HE4SFDA注冊研究

研究概況研究時(shí)間：2011.1~2011.6研究中心中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院山西省腫瘤醫(yī)院Elecsys?HE4SFDA注冊研究研究目的一：與康乃格公司HE4(酶聯(lián)免疫法)進(jìn)行比對檢測，評價(jià)試驗(yàn)結(jié)果研究目的二：盆腔腫塊患有卵巢癌風(fēng)險(xiǎn)的評估：ElecsysHE4和Elecsys125II聯(lián)合檢測計(jì)算ROMA指數(shù)，評估風(fēng)險(xiǎn)高低研究目的三：血清,血漿對比試驗(yàn)，驗(yàn)證不同類型樣本結(jié)果的一致性Elecsys?HE4SFDA注冊研究結(jié)果

共入組1487例樣本標(biāo)本類型醫(yī)科院腫瘤浙大婦產(chǎn)武漢同濟(jì)山西腫瘤合計(jì)卵巢上皮癌103494045237疑似樣本（盆腔包塊患者）611916868388其他腫瘤（子宮內(nèi)膜癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌、膀胱癌等）621363648282表觀健康人群12012511082437RF陽性111091040溶血1010101141脂血1011101142黃疸10001020合計(jì)3875322832851487Elecsys?HE4SFDA注冊研究結(jié)果

各研究中心不精密度結(jié)果

CV（低濃度）CV(中濃度)醫(yī)科院腫瘤醫(yī)院2.21%4.35%浙江大學(xué)婦產(chǎn)醫(yī)院1.05%1.11%武漢同濟(jì)醫(yī)院1.06%0.62%山西省腫瘤醫(yī)院1.61%0.66%選取中、低濃度的樣品各一份，分別檢測10次，計(jì)算CV值Elecsys?HE4SFDA注冊研究結(jié)果

各研究中心質(zhì)控結(jié)果良好

參比試劑考核試劑CA125醫(yī)院名稱質(zhì)控名稱HE4質(zhì)控名稱PreciControlHE4質(zhì)控名稱PCTM質(zhì)控批號2796427092270931560800015608100靶值47.5pmol/L391.5pmol/L45pmol/L341pmol/L32.6(U/mL)101(U/mL)范圍33-62313-47035.0-53.6262–40225.76~39.4479.79~122.21醫(yī)科院腫瘤檢測結(jié)果43.78447.446.18340.828.7101.7浙大婦產(chǎn)檢測結(jié)果41.34367.7447.8344.529.0280.24武漢同濟(jì)檢測結(jié)果39.59360.542.7432133.6291.94山西腫瘤檢測結(jié)果50.98441.7143.43343.932.9686.91Elecsys?HE4SFDA注冊研究結(jié)果

與參與試劑有良好的一致性y=1.0942x+2.7976相關(guān)系數(shù)r＝0.949回歸系數(shù)R2＝0.8997Elecsys?HE4SFDA注冊研究結(jié)果

ROMA指數(shù)可將盆腔腫塊患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分級絕經(jīng)前:PI=-12,0+2,38*LN[HE4]+0,0626*LN[CA125]絕經(jīng)后:PI=-8,09+1,04*LN[HE4]+0,732*LN[CA125]582例樣本被正確分入高/低風(fēng)險(xiǎn)組ROMA(%)=Exp(PI)x1001+Exp(PI)注：風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)PI（PredictiveIndex）LN為自然對數(shù)內(nèi)容羅氏HE4檢測原理Elecsys?HE4SFDA注冊研究概況Elecsys?HE4性能評估Elecsys?HE4性能小結(jié)

病例報(bào)告患者，女，45歲，B超檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊，羅氏試劑電化學(xué)發(fā)光法檢測血清HE4濃度，結(jié)果為136pmol/L。如何判斷這患者HE4結(jié)果是否異常？臨床判斷HE4檢測結(jié)果應(yīng)考慮的問題參考值HE4實(shí)驗(yàn)室檢測誤差樣本檢測前誤差：標(biāo)本采集影響

標(biāo)本保存的影響

干擾物質(zhì)的影響

人生理變異治療措施的干擾（藥物）其他疾病的干擾三組各年齡段HE4濃度比較a

均值±標(biāo)準(zhǔn)差pmol/l（例數(shù)）；青年組：<45歲；中年組：45-59歲；老年組：≧60歲。*LSD檢驗(yàn)；#經(jīng)隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方差分析組別總計(jì)a(323)青年組a(34)中年組a(108)#老年組a(181)#OC組337.5±156.4(160)304.6±143.2(19)334.7±156.4(60)373.3±132.5(81)良性組72.0±38.7(54)*50.6±16.3(10)68.7±12.6(18)96.6±38.7(26)健康組59.2±22.9(109)*42.2±8.9(5)58.7±7.6(30)76.8±5.6(74)1、參考值HE4在不同觀察組間的差異OC組，不同年齡的HE4良性病變組，不同年齡的HE4健康對照組組，不同年齡的HE4年齡因素對HE4濃度的影響HE4在各年齡組參考值的設(shè)定和診斷價(jià)值評估所有病例的ROC曲線青年組的ROC曲線

AUCCutoff點(diǎn)(PM)敏感性特異性總體0.8398267.3%93.6%青年組0.9467583.4%92.6%HE4在各年齡組參考值的設(shè)定和診斷價(jià)值評估中年組的ROC曲線老年組的ROC曲線

AUCCutoff點(diǎn)(PM)敏感性特異性中年組0.870*8075.0%93.1%老年組0.775*13050%93.2%2、實(shí)驗(yàn)室檢測誤差日間精密度（羅氏）日間精密度（驗(yàn)證）在三個(gè)研究中心進(jìn)行的重復(fù)性檢測的結(jié)果：不精密度（CV)＜５％低值（44.3）CV=2.1%高值（1317）CV=1.9%2、實(shí)驗(yàn)室檢測誤差初步結(jié)論實(shí)驗(yàn)室檢測誤差<5%樣本檢測前誤差血清、血漿（EDTA、肝素）樣品保存（24h內(nèi)）血清血漿，血清24h內(nèi)檢測，HE4無顯著性差異樣本檢測前誤差

干擾物質(zhì)影響（羅氏）

藥物的影響（羅氏）回收率均<±10%結(jié)論：上述濃度下的干擾物質(zhì)和藥物對HE4檢測無顯著影響。樣本檢測前誤差

對HE4濃度分別在65pmol/L和155pmol/L進(jìn)行檢測，判斷與乳清酸性蛋白家族其他成員的交叉反應(yīng)性Elafin:彈性蛋白酶特異性抑制劑SLPI：分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑干擾物質(zhì)的影響：交叉反應(yīng)（羅氏）結(jié)論：交叉反應(yīng)對HE4結(jié)果的影響可忽略不計(jì)。樣本檢測前誤差HE4生理變異的影響（n=2)初步結(jié)論:HE4個(gè)體日間變異度<10%樣本檢測前誤差

肺部疾病的影響

腎功不良的影響結(jié)論：肺部疾病，尤其是腎衰顯著影響HE4水平總結(jié)1、HE4的參考值需按年齡段設(shè)定2、HE4實(shí)驗(yàn)室檢測誤差<5％2、HE4個(gè)體日間變異度約10％3、肺部疾病和腎衰HE4水平顯著升高4、其他樣品前檢測影響因素對HE4的影響不顯著5、HE4結(jié)果超過參考值上限20％判斷為異常，對高于正常參考限但未大于20％的患者，應(yīng)連續(xù)追蹤觀察?；颊逪E4結(jié)果的初步判斷患者，女，45歲，B超檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊，羅氏試劑電化學(xué)發(fā)光法檢測血清HE4濃度，結(jié)果為136pmol/L腎功正常，無肺部疾病病理診斷：卵巢癌實(shí)驗(yàn)室檢測誤差約136x5％＝6.8個(gè)體變異＝36x10%=13.6預(yù)計(jì)該患者HE4的結(jié)果為115.6－156.4范圍內(nèi)該年齡組參考限為80pmol/L結(jié)論：該患者HE4異常增高內(nèi)容羅氏HE4檢測原理Elecsys?HE4SFDA注冊研究概況Elecsys?HE4性能評估Elecsys?HE4性能小結(jié)

Elecsys?HE4性能參數(shù)

小結(jié)Elecsys?HE4性能參數(shù)檢測時(shí)間18min檢測原理一步三明治法校準(zhǔn)2點(diǎn)定標(biāo)溯源性HE4EIAfromFujirebioDiagnostics,Inc.樣本類型

采用含有分離膠標(biāo)準(zhǔn)樣本管采集的血清

肝素鋰，K2-EDTA和K3-EDTA抗凝的血漿樣本量10μL空白最低限(