實驗四+食品中細(xì)菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完課件

實驗四食品中細(xì)菌總數(shù)及大腸菌群的檢測食品微生物學(xué)基礎(chǔ)實驗普通微生物學(xué)實驗一、目的要求1、掌握食品中微生物學(xué)基本指標(biāo)的檢測方法。了解食品質(zhì)量與細(xì)菌和大腸菌群數(shù)量的重要關(guān)系2、通過實驗，初步掌握食品中污染的活細(xì)菌計數(shù)方法，以判別食品的衛(wèi)生質(zhì)量1、菌落總數(shù)主要作為判別食品被污染程度的標(biāo)志，也可以應(yīng)用這一方法觀察細(xì)菌在食品中繁殖的動態(tài)，以便對被檢樣品進行衛(wèi)生學(xué)評價時提供依據(jù)。2、大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。由腸桿菌科中四個菌屬內(nèi)的一些細(xì)菌所組成，即艾希氏菌屬、枸櫞酸桿菌屬、產(chǎn)氣克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。二、實驗原理四、操作方法一、細(xì)菌總數(shù)：

(1)以無菌操作將檢樣25克(或25ml)放于裝有225ml滅菌生理鹽水和玻璃珠的三角瓶中，充分振蕩制作成1:10的均勻稀釋液，樣品PH值應(yīng)在6.5-7.5之間，必要時用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸調(diào)節(jié)(固體食品需先用無菌均質(zhì)器均質(zhì)后再稀釋)。

(2)用移液器，吸取1:10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖均勻，制成1:100的稀釋液。

(3)另取槍頭，按上述操作進行10系列稀釋成不同濃度的稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支無菌槍頭。

(4)根據(jù)對標(biāo)本污染情況的估計，選擇2-3個稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即吸取該稀釋度的稀釋液1ml于滅菌培養(yǎng)平皿內(nèi)，每個稀釋度作兩個平皿。

(5)稀釋液吸入平皿后，將融化并冷卻至45℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml滅菌生理鹽水的滅菌平皿作空白對照。

(6)待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36+1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)482小時后取出，計算平板內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克樣品所含菌落總數(shù)。菌落總數(shù)的檢驗程序檢樣25g(或25ml)樣品＋225ml稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋選擇2-3個樣品勻液各取1ml,分別加入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)每皿加入15-20ml培養(yǎng)基搖勻36℃±1℃培養(yǎng)48±2h計算菌落數(shù)，報告梯度稀釋檢樣25g或25ml＋225ml稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋，選三個適宜稀釋度接種LST肉湯管36℃±1℃培養(yǎng)48±2h不產(chǎn)氣產(chǎn)氣接種BGLB肉湯36℃±1℃培養(yǎng)48±2h不產(chǎn)氣產(chǎn)氣大腸菌群陰性大腸菌群陽性查MPN表，報告LST發(fā)酵管現(xiàn)象1．影響雜菌總數(shù)準(zhǔn)確性的因素有哪些？2．在食品衛(wèi)生檢驗中為什么