常見臨床標本的細菌學標本檢驗培訓課件

常見臨床標本的細菌學檢驗細菌檢驗的常見標本：糞便、血、尿液、痰、膿汁、腦脊液、分泌物等檢驗的目的:

協(xié)助疾病的診斷和治療。原則：準確、快速、敏感、低耗、和安全。

一、認真檢查細菌學檢驗單

收到化驗單后，應及時登記、并檢查化驗單上的標本類型、來源、送檢目的、患者姓名、性別、年齡、臨床診斷等內(nèi)容。只有了解標本的來源及病人的臨床情況，才能有目的地選擇正確的檢驗方法，檢出病原菌。第一節(jié)臨床標本細菌學檢驗的基本要求二、正確采集和處理標本

1.無菌操作在采集血液、腦脊液或穿刺液時，應嚴格無菌操作，避免雜菌污染。

2.使用適當?shù)娜萜餮?、腦脊液等應放在無菌容器內(nèi)，其他標本盡量用無菌容器盛裝。容器滅菌應采用干熱、濕熱或紫外線照射等方法。

3.應在用藥物之前，并選擇合適的部位采樣。

4.送檢標本采集后，應注明患者姓名、年齡、采樣日期、科室或病房，標本名稱、臨床診斷、檢驗項目等。

立即送檢。如不能及時送檢，可將標本放于運送培養(yǎng)基或保存液中保存送檢。腦膜炎和淋病標本需放35~37℃保溫送檢。

5.安全防護在采集、運送和檢驗的過程中務必注意安全，防止污染、傳播和自身感染。

6.及時檢驗和報告對國家規(guī)定的傳染病檢驗結(jié)果，必須及時報送上級部門。

三、選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法臨床常見標本細菌分離用培養(yǎng)基見表：

臨床常用細菌分離培養(yǎng)基EBBASSMAC/EMBCASNANYESA血、骨髓

++++尿

+++糞、肛拭

+++痰、咽拭

++++生殖道標本++++++眼耳口鼻+++++標本體液（除血+++同時做需氧和厭氧培養(yǎng)做細菌計數(shù)、必要時加厭氧培養(yǎng)霍亂則用堿性蛋白胨水增菌和TCBS分離可直接涂片染色鏡檢，并同時做需氧和厭氧培養(yǎng)部分可直接涂片鏡檢可直接涂片染色鏡檢，膿汁可同時做需氧和厭氧培養(yǎng)部分可直接涂片鏡檢EB：增菌肉湯

CA：巧克力平板SNA：耐瑟菌選擇培養(yǎng)基SA：沙保培養(yǎng)基NYE：耶爾森菌培養(yǎng)基四、臨床標本細菌學檢驗基本程序：培養(yǎng)方法根據(jù)檢驗目的可選擇需氧培養(yǎng)、厭氧培養(yǎng)和二氧化碳培養(yǎng)。從培養(yǎng)結(jié)果中區(qū)別污染菌和病原菌：①觀察菌落是否在劃線上每次培養(yǎng)均做無菌對照；②結(jié)合擬培養(yǎng)細菌的生長特點對照判斷③注意培養(yǎng)時間，不同細菌生長速度不同④涂片染色檢查，觀察是否與目的菌一致。標本選擇采集（保存、運送）觀察、前處理直接涂片檢查快速檢驗分離培養(yǎng)（需氧、厭氧、二氧化碳培養(yǎng)）增菌（需氧、厭氧、二氧化碳培養(yǎng)）可疑菌落涂片檢查生化試驗血清學鑒定藥敏試驗動物試驗報告報告報告

一、標本采集（一）自然排便采集法挑取有膿血、粘液部分的糞便2－3g或液狀糞便絮狀物1－2ml，盛于無菌廣口瓶/蠟紙盒中或置于保存液/增菌液中送檢。志賀菌檢驗常用甘油緩沖鹽水送檢。

霍亂弧菌用堿性蛋白胨水送檢。（二）直腸拭子采集法第四節(jié)糞便標本的細菌學檢查

不易獲得糞便或排便困難的患者及幼兒，用甘油鹽水濕潤，然后插入肛門約4－5cm（幼兒2－3cm）處，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，擦取表面粘液，裝入無菌試管或保存液中送檢。如不能立即送檢，應放入卡－布（Cary-Blair）運送培養(yǎng)或PH7.0的磷酸鹽甘油（0.033mol/L磷酸鹽緩沖液與等體積甘油的混合液）中運送或保存。

二、檢驗方法及結(jié)果報告

（一）檢驗程序糞便標本的細菌學檢驗程序見圖：

35℃18~24h糞便

SS和MAC/EMB初步鑒定

KIA和MIU

分離培養(yǎng)

最終鑒定35℃18~24h涂片檢查系統(tǒng)生化試驗血清學鑒定藥敏試驗挑可疑菌落35℃18~24h報告菌種及藥敏（二）檢驗方法及結(jié)果報告

1、顯微鏡檢查一般不做直接涂片鏡檢，只有在檢查一些特殊疾病如霍亂、結(jié)核、葡萄球菌或艱難梭菌引起的偽膜性腸炎才作直接涂片檢查。（1）霍亂弧菌顯微鏡檢查：①染色檢查：取米泔水樣便或絮狀物、粘液制片2張，干燥后用乙醇或甲醇固定，分別做革蘭染色及1：10稀釋的石碳酸復染紅色，鏡檢有無革蘭陰性呈魚群排列的弧菌；②懸滴檢查：取米泔水樣便制成懸滴或壓滴標本，檢查細菌動力。在懸滴片中加霍亂弧菌血清做制動試驗可初步診斷。（2）葡萄球菌顯微鏡檢查：發(fā)現(xiàn)大量革蘭陽性呈葡萄狀排列的球菌可初步診斷。（3）結(jié)核分枝桿菌顯微鏡檢查：取蠶豆大小糞塊與飽和鹽水10－15ml混合，靜置1－2小時，取浮面液體少許作涂片，行萋－尼染色鏡檢。若找到紅色桿菌，可報告“找到抗酸桿菌”

（4）艱難梭菌顯微鏡檢查：發(fā)現(xiàn)革蘭陽性粗大桿菌，無莢膜，有卵圓形芽胞于菌體一端者，可報告找到“革蘭陽性芽胞桿菌，形似艱難梭菌”。（5）空腸彎曲菌顯微鏡檢查：若見細小、長而彎的革蘭陰性弧菌、S形或螺旋形成海鷗狀的細菌，報告“找到彎曲菌”。2.分離培養(yǎng)及鑒定

（1）霍亂弧菌培養(yǎng)：①種于堿性蛋白胨水中，經(jīng)37℃6小時增菌；②取表面生長物移種于堿性瓊脂平板上或TCBS平板；③作氧化酶試驗，陽性者用霍亂弧菌多價“O”診斷血清作玻片凝集試驗，初步報告為霍亂弧菌；④同時挑取菌落作純培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)18小時后，經(jīng)玻片凝集試驗復核無誤，即可作生化試驗、血清學試驗進行全面鑒定，并報告結(jié)果。

（2）大腸埃希菌試驗：

①取膿血或糊狀糞便于弱選擇性培養(yǎng)培養(yǎng)基（EMB或MAC），37℃培養(yǎng)18－24小時后觀察；②挑選可疑菌落接種KIA和MIU進行初步生化鑒定；③從斜面是挑取菌苔或直接從上述平板挑取5－10個菌落，分別與致病性大腸埃希菌診斷血清進行凝集，并與單價血清做分型鑒定。

（3）金黃色葡萄球菌培養(yǎng)：

①取嘔吐物、糞便等種于高鹽甘露醇瓊脂或高鹽卵黃瓊脂平板；②挑取平板上的黃色菌落涂片鏡檢；③做各項試驗加以鑒定，并檢測其腸毒素，最后報告。（4）艱難梭菌培養(yǎng)：取黃色夾有偽膜的新排出液狀糞便，種于環(huán)絲氨酸－甲氧頭孢霉素－果糖瓊脂（CCFA）平板上，37℃厭氧培養(yǎng)48小時后，選擇可疑菌落移種于庖肉培養(yǎng)基備毒素測定，同時做其他試驗加以鑒定，最后報告。（5）沙門菌及志賀菌屬培養(yǎng)（重點）：取膿血、粘液糞便種于GN增菌液或亞硒酸鹽增菌液。或直接劃線接種于強選擇性培養(yǎng)基（SS、XLD等）和弱選擇性培養(yǎng)（MAC、EMB、CB等）各一個，經(jīng)37℃培養(yǎng)18－24小時。挑取不發(fā)酵乳糖的小而透明的菌落，接種KIA和MIU37℃孵育后，觀察結(jié)果。用生化試驗和血清學凝集試驗作最后鑒定并報告。如生化試驗符合，診斷血清不發(fā)生凝集，則將待檢菌液隔水煮沸1小時以破壞K抗原和Vi抗原，再作凝集試驗。

腸桿菌科生化反應氧化酶硝酸鹽還原吲哚甲基紅VP檸檬酸鹽硫化氫尿酶丙二酸鹽苯丙氨酸脫氨酶賴氨酸脫羧酶鳥氨酸脫羧酶精氨酸雙水解酶動力ONPG埃希菌屬—+++——————+d—++/-志賀菌屬—+d+———————d—d—沙門菌屬—+—+—++——+++/d+變形桿菌屬—+d+-/+d+/-+—+————+克雷伯菌屬—+dddd—dd—d——+—腸道桿菌系統(tǒng)生化反應：沙門菌屬細菌的初步鑒定MIU

觸酶氧化酶硝酸鹽還原診斷血清凝集KIA斜面底層產(chǎn)氣H2S甲型副傷寒KA+-/++--+—+A~F多價+A群+乙型副傷寒KA++++--+—+A~F多價+B群+丙型副傷寒KA++++--+—+A~F多價+C群+vi+豬霍亂沙門菌KA+-/++--+—+A~F多價+C群+傷寒沙門菌KA--+/-

+--+—+A~F多價+D群+vi+其他沙門菌KA++

+--+—+A~F多價+腸炎+微量生化反應系統(tǒng)Micro-ID系統(tǒng)VP硝酸鹽還原

苯丙氨酸脫羧酶硫化氫吲哚鳥氨酸賴氨酸丙二酸鹽尿素七葉甘ONPG阿拉伯糖側(cè)金盞花醇肌醇三梨醇421421421421421—+——+++———+++