松材線(xiàn)蟲(chóng)病檢測(cè)技術(shù)

松材線(xiàn)蟲(chóng)病檢測(cè)技術(shù)一、室內(nèi)檢驗(yàn)a、抽樣和取樣：在調(diào)運(yùn)檢疫時(shí)抽取有上述癥狀的部分檢疫物，抽樣數(shù)量為每批次總件數(shù)的0.5-5.0%，但最低不得少于5件。若無(wú)明顯癥狀時(shí)可隨機(jī)抽樣。在進(jìn)行病害調(diào)查時(shí)，則選取有松材線(xiàn)蟲(chóng)病癥狀的樣株，根據(jù)具體情況砍取木段或鉆取木屑進(jìn)行室內(nèi)檢驗(yàn)。在所選取的樣木（樣品）或樣株上鉆取少量木屑約10g，每樣3個(gè)重復(fù)。取樣時(shí)要注意選取靠近蛀道、蛹室的部位，所取樣品不得帶有樹(shù)皮。對(duì)所取樣品標(biāo)號(hào)后帶回實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。必要時(shí)可將整件樣木(或樣品)帶回實(shí)驗(yàn)室備檢。b、分離線(xiàn)蟲(chóng)：將各標(biāo)號(hào)樣品分別進(jìn)行線(xiàn)蟲(chóng)分離。分離線(xiàn)蟲(chóng)可采用貝爾曼(Baermann)漏斗法或淺盤(pán)法。對(duì)媒介昆蟲(chóng)進(jìn)行線(xiàn)蟲(chóng)分離時(shí)，可將其用剪刀或尖頭鑷子、解剖針等剪碎或撕碎后同樣采用上述方法進(jìn)行。分離時(shí)若室溫較低(不得低于7℃)可根據(jù)室溫高低將分離用水調(diào)至20—40℃(不得超過(guò)40℃)后浸泡分離材料，3—4小時(shí)線(xiàn)蟲(chóng)游離出一定數(shù)量后即可鏡檢。一般情況24小時(shí)后鏡檢。貝爾曼(Baermann)漏斗法：將大小適當(dāng)(直徑10—15cm)的漏斗末端接一段長(zhǎng)約10cm的乳膠管后置于漏斗架上，在乳膠管上裝一止水夾。剪大小適當(dāng)紗布兩層鋪在漏斗上。將帶到實(shí)驗(yàn)室的樣段去皮后劈成長(zhǎng)約3—4cm的細(xì)條或鉆取木屑，約取小木條(或木屑)10g置于漏斗上的紗布中，將紗布四角向中間蓋上分離材料，然后注入清水浸沒(méi)。注入清水后要注意使水充滿(mǎn)漏斗和下面的乳膠管，不要產(chǎn)生空隙。鏡檢時(shí)，用培養(yǎng)皿在漏斗末端接取線(xiàn)蟲(chóng)分離液約5—15ml即可。c、鏡檢：分別將各標(biāo)號(hào)盛有線(xiàn)蟲(chóng)分離液的培養(yǎng)皿置于解剖鏡下觀(guān)察，先確認(rèn)有無(wú)線(xiàn)蟲(chóng)。對(duì)有線(xiàn)蟲(chóng)的樣品進(jìn)行活體檢驗(yàn)，觀(guān)察它的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)。然后盡量選擇幾條成熟、特征易觀(guān)察的線(xiàn)蟲(chóng)，用針或吸管移至載玻片上的水滴中，使之沉底。將此載玻片在酒精燈火焰上方往返幾次，約5—6秒至蟲(chóng)體突然伸直時(shí)停止，加蓋玻片后在顯微鏡下觀(guān)察。根據(jù)形態(tài)特征予以鑒別，以確定其是否為松材線(xiàn)蟲(chóng)。分別記錄檢驗(yàn)結(jié)果。記錄的主要內(nèi)容和形式可參照松材線(xiàn)蟲(chóng)檢驗(yàn)記錄表。（3）鑒定臨時(shí)玻片的制作a、殺死和固定：將盛有線(xiàn)蟲(chóng)懸浮液的小燒杯置于65℃水浴中2分鐘殺死線(xiàn)蟲(chóng)，經(jīng)離心濃縮后即用三羥基乙胺福爾馬林固定液(TAF)固定。b、制片：在潔凈的載玻片上滴1小滴水，水滴大小以加蓋玻片后恰好充滿(mǎn)蓋玻片下的空間為宜。在解剖鏡下挑選經(jīng)固定后的雌雄成蟲(chóng)各兩條，擺在水滴中并使其沉沒(méi)，從水滴的一側(cè)緩緩加上蓋玻片，避免出現(xiàn)氣泡，用熔化的蠟燭或指甲油封片。（4）鑒定標(biāo)準(zhǔn)分類(lèi)地位：松材線(xiàn)蟲(chóng)BursaphelenchusxylophtIlus(SteineretBukrer)NickJe屬滑刃科(Aphelenchoididae)，傘滑刃屬(Bursaphelenchus)。它與滑刃屬(Aphelenchoides)的線(xiàn)蟲(chóng)很相似。在形態(tài)上兩個(gè)屬的主要區(qū)別是傘滑刃屬線(xiàn)蟲(chóng)的雄蟲(chóng)尾部為一小的交合傘所包裹，而滑刃屬線(xiàn)蟲(chóng)的雄蟲(chóng)無(wú)此交合傘形態(tài)特征：成蟲(chóng)蟲(chóng)體細(xì)長(zhǎng)，約lmm。頭部唇區(qū)高，溢縮顯著，口針細(xì)長(zhǎng)，基部略微增厚，使口針基結(jié)清晰。中食道球卵圓形，占體寬的2/3以上，食道腺細(xì)長(zhǎng)葉狀，覆蓋于腸背面。排瀉孔的開(kāi)口大致和食道與腸交接處平等。半月體在排瀉孔后約2/3體寬處。雌蟲(chóng)熱殺死后體態(tài)呈開(kāi)闊“C”形。尾部亞圓錐形，末端鈍圓，少數(shù)有微小的尾尖突(不超過(guò)2微米)。卵巢1個(gè)，前伸，卵呈單行排列，陰門(mén)開(kāi)口于蟲(chóng)體中后部約73%處，開(kāi)口處有后伸的寬的陰門(mén)前唇(陰門(mén)蓋)覆蓋。后子宮囊長(zhǎng)，約為陰肛距的2/3。雄蟲(chóng)熱殺死后體呈“J”形，尾端尖細(xì)，側(cè)觀(guān)呈爪狀，向腹部彎曲，為卵形交合傘所包裹(腹面觀(guān))。交合刺大，弓狀，成對(duì)，喙突顯著，交合刺遠(yuǎn)端膨大如