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生物反應(yīng)器總論第一頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日生物反應(yīng)器總論

3.1生物反應(yīng)器概述3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)

3.4一般生物反應(yīng)器的操作和注意事項(xiàng)第二頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述3.1.1生物反應(yīng)器在生產(chǎn)中的地位和作用

1.生物技術(shù)和生物反應(yīng)器生物技術(shù)是對(duì)生物物質(zhì)有控制的應(yīng)用。因此,生物技術(shù)不僅僅包括基因工程或者細(xì)胞融合技術(shù),實(shí)際上,它的應(yīng)用范圍非常廣泛,涵蓋化工領(lǐng)域,如乙醇、微生物和有機(jī)酸類、聚合物的生產(chǎn),制藥領(lǐng)域,如抗生素、疫苗的生產(chǎn),能源領(lǐng)域,如燃料乙醇,食品領(lǐng)域,如奶制品、蛋白質(zhì)的生產(chǎn),以及農(nóng)業(yè),如動(dòng)物飼料、廢物處理、微生物殺蟲(chóng)劑、植物移植配方的生產(chǎn)和應(yīng)用。第三頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述

2.生物反應(yīng)器在生產(chǎn)中的地位和作用如圖3-1所示,在一般的生物工業(yè)中,生物有機(jī)體在生物反應(yīng)器中生長(zhǎng)、繁殖,其所需的營(yíng)養(yǎng)成分,如葡萄糖(碳源)、蛋白質(zhì)(氮源)、空氣(氧)及其它必要的添加劑(前體)等,經(jīng)適當(dāng)處理和嚴(yán)格消毒后根據(jù)需要加入生物反應(yīng)器中。生物有機(jī)體的生長(zhǎng)環(huán)境,如溫度,氧含量,PH值,經(jīng)熱交換、氧氣含量控制、酸堿滴入等手段維持,以使生物體始終處在良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。生物有機(jī)體在生物反應(yīng)器中合成產(chǎn)品和其他代謝產(chǎn)物,經(jīng)過(guò)一系列的分離過(guò)程后,得到最終產(chǎn)品。第四頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述圖3-1生物工業(yè)一般過(guò)程第五頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述3.1.2生物反應(yīng)器的類型生物反應(yīng)器有很多種,按照不同的分類角度可以分為各種類型,如表3-1所示。柱塞流反應(yīng)器(plugflow)指流體在反應(yīng)器內(nèi)從進(jìn)口流到出口,中間沒(méi)有返混,一些固定化細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器、膜反應(yīng)器及管式反應(yīng)器等屬于這種情況。全混流反應(yīng)器(backmix)指流體在反應(yīng)器內(nèi)經(jīng)過(guò)了充分混合,攪拌罐式反應(yīng)器是一種典型的全混流反應(yīng)器。第六頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述表3-1生物反應(yīng)器的分類按照反應(yīng)器內(nèi)流型理想反應(yīng)器柱塞流反應(yīng)器全混流反應(yīng)器非理想反應(yīng)器按照操作方式間歇反應(yīng)器連續(xù)式反應(yīng)器半連續(xù)式反應(yīng)器按照結(jié)構(gòu)特征罐式反應(yīng)器管式反應(yīng)器塔式反應(yīng)器膜反應(yīng)器第七頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述表3-1(續(xù))生物反應(yīng)器的分類按照反應(yīng)器內(nèi)相態(tài)均相反應(yīng)器非均相反應(yīng)器按照生物反應(yīng)器內(nèi)有機(jī)體種類微生物反應(yīng)器植物細(xì)胞反應(yīng)器動(dòng)物細(xì)胞反應(yīng)器酶反應(yīng)器按照反應(yīng)器內(nèi)氣液混合方式機(jī)械攪拌混合反應(yīng)器泵循環(huán)混合反應(yīng)器直接通氣混合反應(yīng)器連續(xù)氣相反應(yīng)器按照是否通氧通風(fēng)發(fā)酵設(shè)備嫌氣發(fā)酵設(shè)備第八頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述罐式反應(yīng)器高徑比在1:3之間,管式反應(yīng)器高徑比一般大于30,塔式反應(yīng)器高徑比通常大于10。膜式反應(yīng)器使用各種膜作為反應(yīng)器內(nèi)部關(guān)鍵組件,有時(shí)膜起分離作用,有時(shí)膜起固定化細(xì)胞和酶的作用。均相反應(yīng)器指反應(yīng)器內(nèi)只有一相,如均相酶反應(yīng)器,酶作為催化劑溶解在反應(yīng)液中,形成單一的液相。非均相反應(yīng)器內(nèi)反應(yīng)物質(zhì)有兩相以上,比如,一般的生物反應(yīng)器內(nèi)有固相(生物體)、液相(培養(yǎng)液)、氣相(空氣),固定床和流化床也屬于典型的非均相反應(yīng)器。第九頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述對(duì)于需氧生物培養(yǎng)來(lái)說(shuō),空氣和培養(yǎng)液如何混合接觸是一個(gè)非常重要的因素。目前常用的混合方式有四種,如圖3-2所示。機(jī)械攪拌混合是靠攪拌器的作用將通入培養(yǎng)液內(nèi)的空氣分成大量小氣泡,使其與液體充分混合接觸。泵循環(huán)反應(yīng)器依靠一個(gè)外置液體循環(huán)泵,將液體從反應(yīng)器出口打回到入口,實(shí)現(xiàn)液體的循環(huán)并與空氣進(jìn)行充分接觸。直接通氣混合是將空氣通過(guò)罐底氣體分布器直接通入,實(shí)現(xiàn)氣液混合接觸。第十頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述圖3-2生物反應(yīng)器中4種不同的氣液接觸方式,圖中的箭頭表示氣體流向1—攪拌混合;2—泵循環(huán)混合;3—直接通氣混合;4—連續(xù)氣相接觸第十一頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述3.1.3生物反應(yīng)器的發(fā)展趨勢(shì)生物反應(yīng)器的研究、開(kāi)發(fā)和設(shè)計(jì)是生物技術(shù)的一個(gè)重要內(nèi)容,一種好的生物反應(yīng)器出現(xiàn)往往能夠大規(guī)模降低生產(chǎn)成本,成為生物制品成功商業(yè)化的關(guān)鍵。因此,生物反應(yīng)器的開(kāi)發(fā)一直很活躍,尤其是最近的細(xì)胞生物反應(yīng)器開(kāi)發(fā)更是如此。生物反應(yīng)器的發(fā)展趨勢(shì)可歸納為以下幾個(gè)方面。

第十二頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述

1.微生物反應(yīng)器朝著大型化發(fā)展。由于微生物可以懸浮培養(yǎng),對(duì)攪拌的剪切力要求不高,因此,微生物最有條件在大型甚至超大型反應(yīng)器內(nèi)生長(zhǎng)。目前,生產(chǎn)抗生素的發(fā)酵罐容積已達(dá)到400立方米,氨基酸的達(dá)到300立方米,單細(xì)胞蛋白(SCP)的達(dá)到2600立方米,用微生物處理廢水的生物反應(yīng)器甚至高達(dá)27000立方米。顯然,反應(yīng)器的增大有利于降低生產(chǎn)成本。我國(guó)生物反應(yīng)器的容積在200立方米以下。第十三頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述

2.動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器得到較大發(fā)展。由于動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)可以得到很多高附加值生物制品,如干擾物,單克隆抗體等,細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器的開(kāi)發(fā)越來(lái)越受到重視。

3.大量使用現(xiàn)代計(jì)算機(jī)技術(shù)進(jìn)行生物反應(yīng)器的設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)。首先,對(duì)反應(yīng)器內(nèi)的生物反應(yīng)過(guò)程建立數(shù)學(xué)模型,獲得能夠反應(yīng)生物過(guò)程規(guī)律的較精確的表達(dá)式,然后將該模型應(yīng)用于反應(yīng)器的設(shè)計(jì)和自動(dòng)控制中,從而優(yōu)化反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)和操作。第十四頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述3.1.4一般生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)原理這里的一般生物反應(yīng)器指機(jī)械攪拌罐式反應(yīng)器(Stirred-tankbioreactor),這種反應(yīng)器作為一般反應(yīng)器是因?yàn)椋菏紫龋@是一類工業(yè)上最重要,應(yīng)用最廣泛的生物反應(yīng)器,它具有雙重優(yōu)勢(shì),較低的制造成本和操作成本。其次,這類反應(yīng)器是較為普遍接受的標(biāo)準(zhǔn)生物反應(yīng)器,除了因?yàn)樗容^經(jīng)濟(jì)和容易放大外,大部分生物有機(jī)體都可以使用這種反應(yīng)器進(jìn)行培養(yǎng),它們的生長(zhǎng)環(huán)境在這種反應(yīng)器內(nèi)也比較容易得到滿足和調(diào)節(jié)。圖3-3是這種反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)。

第十五頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述圖3-3一般生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)第十六頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.1生物反應(yīng)器概述它的主要組成部分包括罐體,攪拌裝置,換熱器,除沫裝置,氣體和物料進(jìn)出口以及檢測(cè)和調(diào)節(jié)裝置。生物體生長(zhǎng)所需要的溫度、酸度分別由罐內(nèi)溫度計(jì)和酸度計(jì)檢測(cè),并由夾套換熱器和滴入酸堿進(jìn)行調(diào)節(jié)和維持。攪拌器的上部有消沫裝置,加上滴入的化學(xué)消沫劑,控制著罐內(nèi)泡沫的產(chǎn)生。生物體在生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的二氧化碳以及其他氣體從空氣出口經(jīng)過(guò)濾后排出。攪拌和罐體之間有機(jī)械密封,使整個(gè)生物反應(yīng)器處在密封無(wú)菌環(huán)境下。返回第十七頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)3.2.1分批培養(yǎng)中細(xì)胞的生長(zhǎng)

1.分批培養(yǎng)中細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程生物的分批培養(yǎng)是將大部分或全部生物所需營(yíng)養(yǎng)物料一次性投入生物反應(yīng)器,調(diào)節(jié)反應(yīng)器內(nèi)溫度、pH值、氧化還原電位處于最有利于生物生長(zhǎng)的狀態(tài),然后,接入生物體使其生長(zhǎng),直至一些關(guān)鍵的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)耗盡或者由于毒素積累或pH值發(fā)生變化等因素導(dǎo)致生長(zhǎng)環(huán)境惡化。第十八頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)如果以每升培養(yǎng)液中生物細(xì)胞干物質(zhì)的克數(shù)X(克/升)代表生物體的生長(zhǎng)情況,在分批培養(yǎng)情況下X隨時(shí)間變化的曲線大致如圖3-4所示。根據(jù)這個(gè)曲線,細(xì)胞生長(zhǎng)大體上可分為六個(gè)階段。圖3-4分批培養(yǎng)中細(xì)胞生長(zhǎng)的幾個(gè)階段①遲滯期(Thelagphase)。當(dāng)生物種子被接入新鮮培養(yǎng)液時(shí),細(xì)胞需要一定的時(shí)間適應(yīng)新環(huán)境,因而出現(xiàn)一段相對(duì)靜止的階段(圖中1),在這一階段,細(xì)胞的總量和濃度保持不變。這一階段的長(zhǎng)短取決于細(xì)胞的個(gè)體遺傳特性、種齡、接種量和環(huán)境等,一般為幾個(gè)小時(shí)。第十九頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)圖3-4分批培養(yǎng)中細(xì)胞生長(zhǎng)的幾個(gè)階段第二十頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)②加速生長(zhǎng)期(accelerationphase)。如圖中2,在這一時(shí)期內(nèi),一部分細(xì)胞已經(jīng)適應(yīng)新的環(huán)境,開(kāi)始生長(zhǎng)和繁殖。由于細(xì)胞個(gè)體的差異,這種適應(yīng)有快有慢,表現(xiàn)為細(xì)胞量的逐步增加。③指數(shù)生長(zhǎng)期(logarithmicorexperimentalphase)。又稱對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。在這一生長(zhǎng)期內(nèi)細(xì)胞的各成分以恒定的速度合成,表現(xiàn)在細(xì)胞含量的對(duì)數(shù)值與時(shí)間成直線關(guān)系,如圖中3。在這一時(shí)期內(nèi),細(xì)胞的生命力最強(qiáng)。④減速生長(zhǎng)期(decelerationphase)。由于細(xì)胞的生長(zhǎng),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)越來(lái)越少,培養(yǎng)液中積累的有毒代謝物也越來(lái)越多,細(xì)胞的繼續(xù)生長(zhǎng)受到限制,細(xì)胞濃度的增加逐漸減慢進(jìn)入減速生長(zhǎng)期,如圖中4。第二十一頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)⑤平衡生長(zhǎng)期(stationaryphase)。在減速生長(zhǎng)期內(nèi),細(xì)胞的生長(zhǎng)速度逐漸減慢,死亡的速度逐漸增加,當(dāng)二者達(dá)到相等時(shí)便進(jìn)入平衡生長(zhǎng)期。⑥負(fù)生長(zhǎng)期(declineordeathphase)。由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的進(jìn)一步下降和有毒代謝產(chǎn)物的進(jìn)一步積累,細(xì)胞的死亡速度開(kāi)始超過(guò)生長(zhǎng)速度,細(xì)胞的濃度呈增速下降趨勢(shì)。在抗生素工業(yè)中,這一時(shí)期抗生素產(chǎn)物繼續(xù)大量合成,但合成速度開(kāi)始降低,直至細(xì)胞大量死亡和自溶,細(xì)胞濃度呈指數(shù)下降,抗生素的合成速度迅速降低直至停止。

第二十二頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)

2.比生長(zhǎng)速率μ(specificgrowthrate)微生物細(xì)胞的生長(zhǎng)是一個(gè)自催化(autocatalytic)過(guò)程,也就是說(shuō),細(xì)胞量增長(zhǎng)的速度與細(xì)胞濃度成正比。在細(xì)胞的指數(shù)增長(zhǎng)期內(nèi),細(xì)胞增長(zhǎng)的變化符合這一規(guī)律。即每隔一個(gè)固定的時(shí)間間隔,細(xì)胞的量就要翻一番。設(shè)這一固定時(shí)間間隔為td,如果細(xì)胞的初始濃度為X0(克干物質(zhì)/升),經(jīng)過(guò)時(shí)間t后,細(xì)胞濃度為X(克干物質(zhì)/升),則有下列關(guān)系式:

第二十三頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)

第二十四頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)在上述公式中,μ即比生長(zhǎng)速率,單位為h-1

,實(shí)際上是細(xì)胞濃度的增加速度除以細(xì)胞濃度,或者每單位細(xì)胞濃度,細(xì)胞濃度的增加速度。td為細(xì)胞的倍增時(shí)間,即細(xì)胞重量增加一倍所需要的時(shí)間,近似等于細(xì)胞完成一個(gè)分裂周期所需要的平均時(shí)間。如果忽略細(xì)胞死亡速率,且在反應(yīng)過(guò)程中沒(méi)有從反應(yīng)器內(nèi)取出細(xì)胞,則細(xì)胞在指數(shù)增長(zhǎng)期的生長(zhǎng)速度隨時(shí)間的變化符合上述公式3-1或公式3-2所表達(dá)的數(shù)量關(guān)系。第二十五頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)

3.莫諾德方程(Monodequation)在分批生物培養(yǎng)中,當(dāng)其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度足以支持微生物以最大的生長(zhǎng)速度生長(zhǎng),只有一種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度不足從而限制生物的生長(zhǎng),則生物生長(zhǎng)速率和這種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度的關(guān)系可以用莫諾德方程表示:第二十六頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)公式3-3中,μ—比生長(zhǎng)速率(1/h),μm—最大比生長(zhǎng)速率(1/h)S—營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度(g/L)Ks—營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)飽和常熟或者莫諾德常數(shù)(g/L)。最大比生長(zhǎng)速率μm實(shí)際上是當(dāng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)十分充足不再限制生物生長(zhǎng)時(shí)的比生長(zhǎng)速度,即當(dāng)S>>Ks時(shí)的情況。當(dāng)S>>Ks時(shí),Ks可以忽略不計(jì),莫諾德公式變?yōu)椋寒?dāng)Ks=S時(shí),莫諾德公式變?yōu)椋旱诙唔?yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)因此,莫諾德常數(shù)數(shù)值上等于比生長(zhǎng)速率達(dá)到最大比生長(zhǎng)速率一半時(shí)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度,它的大小表示了生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的偏愛(ài)程度(affinityforthesubstrate),數(shù)值越大,生物對(duì)這種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)越不偏愛(ài),反之亦然。最大比生長(zhǎng)速率μm和莫諾德常數(shù)是兩個(gè)重要的動(dòng)力學(xué)常數(shù),表征了某種生物的生長(zhǎng)受某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)影響的規(guī)律。莫諾德方程所表達(dá)的比生長(zhǎng)速率和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度關(guān)系如圖3-5所示。

第二十八頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)圖3-5比生長(zhǎng)速率和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度關(guān)系第二十九頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)在分批培養(yǎng)中,在指數(shù)生長(zhǎng)期,S>>Ks,因此μ=μm,在減速生長(zhǎng)期,μ不再是常數(shù),它隨營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度的變化而改變。減速生長(zhǎng)期一般非常短,有時(shí)甚至不存在。Ks的值越低,減速期越短。表3-2列出了幾種生物對(duì)某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的飽和常數(shù)。莫諾德方程是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)公式,表示了當(dāng)某一種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)限制某種生物生長(zhǎng)時(shí),生物的生長(zhǎng)與該營(yíng)養(yǎng)物濃度的關(guān)系,當(dāng)多種物質(zhì)限制性因素出現(xiàn),或更復(fù)雜情況時(shí),莫諾德方程不一定適用。

第三十頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)表3-2部分微生物對(duì)部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的飽和常數(shù)生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)飽和常數(shù)Ks(mgl-1)大腸菌(E.coli)葡萄糖6.8╳10-2大腸菌(E.coli)乳糖20.0大腸菌(E.coli)磷酸根(PO42-)1.6黑曲霉(Aspergillusniger)葡萄糖5.0產(chǎn)朊假絲酵母(C.utilis)氧氣0.45第三十一頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)3.2.2分批培養(yǎng)中基質(zhì)的消耗

1.得率系數(shù)、比產(chǎn)物生成速率和比基質(zhì)(營(yíng)養(yǎng)物)消耗速率。①菌體得率系數(shù)(biomassyieldcoefficient)和產(chǎn)物得率系數(shù)(productyieldcoefficient)在生物分批培養(yǎng)體系中,細(xì)胞濃度X(克干物質(zhì)/升)、產(chǎn)物濃度P(克/升)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度(基質(zhì)濃度)S(克/升)都隨時(shí)間t(小時(shí))變化,或者說(shuō)都是時(shí)間t的函數(shù)。如果細(xì)胞濃度X對(duì)時(shí)間的導(dǎo)數(shù)是,基質(zhì)濃度對(duì)時(shí)間的導(dǎo)數(shù)是,產(chǎn)物濃度對(duì)時(shí)間的導(dǎo)數(shù)是,產(chǎn)物得率系數(shù)和菌體得率系數(shù)由下頁(yè)兩個(gè)式子定義:

第三十二頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)也就是說(shuō),得率系數(shù)是產(chǎn)物或菌體濃度對(duì)時(shí)間的導(dǎo)數(shù)除以基質(zhì)消耗對(duì)時(shí)間的導(dǎo)數(shù),取正數(shù)。從上述定義也可以推出,得率系數(shù)實(shí)際上是產(chǎn)物或菌體生成速率對(duì)基質(zhì)消耗速率的導(dǎo)數(shù),取正值。如下公式所示:第三十三頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)因此,如果經(jīng)過(guò)一個(gè)較段時(shí)間Δt后,系統(tǒng)的菌絲濃度增加了ΔX,產(chǎn)物濃度增加了ΔP,某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(基質(zhì))濃度增加了—ΔS(或減少ΔS),則得率系數(shù)可由以下兩個(gè)公式計(jì)算:

由此可見(jiàn),菌體得率系數(shù)和產(chǎn)物得率系數(shù)代表了每消耗一個(gè)單位的某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),菌體和產(chǎn)物濃度的增加量。表3-3列出了產(chǎn)朊假絲酵母(C.utilis)對(duì)不同基質(zhì)的菌體產(chǎn)率系數(shù)。第三十四頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)表3-3產(chǎn)朊假絲酵母對(duì)三種基質(zhì)的菌體產(chǎn)率系數(shù)

基質(zhì)菌體得率系數(shù)Yx/s(g/mol)葡萄糖91.8乙醇31.2醋酸21.0第三十五頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)②比產(chǎn)物生成速率(specificrateofproductformation)和比基質(zhì)(營(yíng)養(yǎng)物)消耗速率(specificrateofsubstrateutilization)和以上介紹的比生長(zhǎng)速度μ類似,比產(chǎn)物生成速率qp和比基質(zhì)消耗速率qs分別由以下公式定義:第三十六頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)

2.基質(zhì)消耗速率生物培養(yǎng)中的基質(zhì)消耗不僅包括微生物生長(zhǎng)所需要的基質(zhì)消耗,而且包括維持微生物生存和合成產(chǎn)物所需要的基質(zhì)消耗。因此,有下列關(guān)系:

系統(tǒng)基質(zhì)的積累速率=外界基質(zhì)供應(yīng)速率----微生物生長(zhǎng)消耗基質(zhì)速率維持生存基質(zhì)消耗速率從系統(tǒng)中移出基質(zhì)速率合成產(chǎn)物消耗基質(zhì)速率第三十七頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)在分批培養(yǎng)系統(tǒng)中,基質(zhì)在培養(yǎng)前一次性加入,在培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有基質(zhì)移出,因此,基質(zhì)供應(yīng)速率和系統(tǒng)移出基質(zhì)速率都為零。由前述比生長(zhǎng)速率、比產(chǎn)物生成速率、比產(chǎn)物和菌體得率系數(shù)的定義可推算出:第三十八頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)維持生存消耗基質(zhì)速率=每單位細(xì)胞濃度維持基質(zhì)消耗速率?細(xì)胞濃度以上公式中,每單位細(xì)胞濃度維持基質(zhì)消耗速率稱為細(xì)胞的維持系數(shù)(maintenancecoefficient),表示在細(xì)胞生長(zhǎng)速度為零也沒(méi)有產(chǎn)物合成的情況下,每單位細(xì)胞濃度基質(zhì)的消耗速率。通常用m表示。則,在分批培養(yǎng)中,基質(zhì)的消耗速率可以由以下公式表示:公式中的參數(shù)代表的意義與前述相同。第三十九頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)很多情況下,尤其是通風(fēng)發(fā)酵過(guò)程中,維持系數(shù)m遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于μ/Yx/s,可以忽略為0,這時(shí),如果沒(méi)有產(chǎn)物合成,或者產(chǎn)物合成不消耗這種基質(zhì),公式3-5可簡(jiǎn)化為:

將比基質(zhì)消耗速率定義式公式3-3引入公式3-5,得:公式3-5、3-6和3-7都是描述分批培養(yǎng)中基質(zhì)消耗的動(dòng)力學(xué)方程,公式3-6適用于沒(méi)有產(chǎn)物合成以及維持系數(shù)可以忽落不計(jì)的情況。第四十頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)3.2.3產(chǎn)物的生成如果在生物細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)有產(chǎn)物的合成,產(chǎn)物合成的速率有以下關(guān)系:合成產(chǎn)物的總速率=產(chǎn)物的合成速率—產(chǎn)物移出速率—產(chǎn)物降解速率在分批培養(yǎng)過(guò)程中,一般沒(méi)有產(chǎn)物的移出,如果不考慮產(chǎn)物降解,產(chǎn)物生成速率由下列公式表達(dá):第四十一頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)在實(shí)際的分批生物培養(yǎng)系統(tǒng)中,按照與生物細(xì)胞生長(zhǎng)的關(guān)系,產(chǎn)物的生成可分為三種情況:

1.產(chǎn)物的生成與生物細(xì)胞生長(zhǎng)完全相關(guān)。即產(chǎn)物是生物生長(zhǎng)時(shí)直接代謝的產(chǎn)品,或者是生物代謝的中間產(chǎn)物。從生物細(xì)胞生長(zhǎng)的開(kāi)始,產(chǎn)物一直伴隨著細(xì)胞的生長(zhǎng),產(chǎn)物濃度和產(chǎn)品濃度密切相關(guān),如圖3-6(a)所示。乙醇、氨基酸和微生物的發(fā)酵屬于這種情況。第四十二頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)在這種情況下,產(chǎn)物的代謝速率可由下式表示:

式中,Yp/x為每單位干重量細(xì)胞生產(chǎn)產(chǎn)品的重量,稱為產(chǎn)物生長(zhǎng)因子(productyieldcoefficient)。μ和X分別是比生長(zhǎng)速率和細(xì)胞濃度。第四十三頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)

2.產(chǎn)物的生成與細(xì)胞生長(zhǎng)部分相關(guān)。產(chǎn)物只是在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中的某一階段產(chǎn)生,在其他階段,沒(méi)有產(chǎn)物生成。產(chǎn)物濃度和細(xì)胞濃度如圖3-6(b)所示。乳酸的發(fā)酵生產(chǎn)屬于這種情況。在這種情況下,產(chǎn)物的生成速率可由以下公式表示:式中,α1和β1分別為生長(zhǎng)相關(guān)因子和非生長(zhǎng)相關(guān)因子,為常數(shù),其他參數(shù)同前述。將公式3-9兩邊同除一個(gè)X,再將比產(chǎn)物生成速率和比生長(zhǎng)速率定義公式代入,得:第四十四頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)

3.產(chǎn)物的產(chǎn)生與生物細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)關(guān)。這種產(chǎn)物也稱次級(jí)代謝物(Secondarymetabolites),它與細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有必然的關(guān)系,一般在細(xì)胞停止生長(zhǎng)后才大規(guī)模產(chǎn)生,產(chǎn)物濃度和細(xì)胞濃度隨時(shí)間的變化曲線如圖3-6(c)所示。由于它和細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有必然的聯(lián)系,因此,無(wú)法將這種產(chǎn)物的產(chǎn)生和細(xì)胞的生長(zhǎng)相關(guān)聯(lián)。研究這種情況下的細(xì)胞生長(zhǎng)情況,需要使用前述公式3-5或者3-7??股匾约耙恍┪⑸锒舅氐陌l(fā)酵生產(chǎn)屬于這種情況。

第四十五頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.2生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)圖3-6分批培養(yǎng)中細(xì)胞的生長(zhǎng)和產(chǎn)物的形成。圖中(a)產(chǎn)物形成和細(xì)胞生長(zhǎng)完全相關(guān)(b)產(chǎn)物的形成和細(xì)胞的生長(zhǎng)部分相關(guān)(c)產(chǎn)物的形成和細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)關(guān)返回第四十六頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)生物工業(yè)生產(chǎn)很多都是深層需氧發(fā)酵過(guò)程,在這些過(guò)程中,生物的生長(zhǎng)和繁殖需要大量的氧氣,提供氧氣的辦法是向發(fā)酵罐培養(yǎng)液內(nèi)鼓入空氣,這一過(guò)程就是生物反應(yīng)器的通風(fēng)。生物一般只能利用溶解在發(fā)酵液中的氧。氧氣在水中的溶解度很小,在一個(gè)大氣壓、25℃下大約只有0.2mmol/L,而微生物在工業(yè)培養(yǎng)中氧氣的消耗量又很大,一般為20~25mmol/L,因此,必須不斷地向生物反應(yīng)器通入空氣,以保持培養(yǎng)液中溶解氧的濃度,。第四十七頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)3.3.1氣-液相間的溶氧傳質(zhì)理論在向培養(yǎng)液通風(fēng)時(shí),空氣在培養(yǎng)液內(nèi)形成大量的氣泡,氧氣首先從氣泡內(nèi)進(jìn)入培養(yǎng)液成為溶解氧,然后從培養(yǎng)液進(jìn)入生物細(xì)胞體內(nèi)供細(xì)胞消耗。因此,氧氣從氣相傳遞到微生物細(xì)胞內(nèi)的過(guò)程可分為兩步:1、氧氣從氣泡內(nèi)跨過(guò)氣液界面到達(dá)液體內(nèi)部;2、氧氣從液體內(nèi)部跨過(guò)液固界面進(jìn)入生物細(xì)胞內(nèi)。前者稱為氧氣在發(fā)酵液中的氣-液傳遞過(guò)程,后者叫做氧氣的液-固傳遞過(guò)程,如圖3-7所示。第四十八頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)圖3-7氧氣在發(fā)酵液中的傳遞過(guò)程第四十九頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)氧在氣液間的傳遞符合雙膜理論,其基本論點(diǎn)如下:圖3-8雙膜理論示意圖①相互接觸的氣、液兩相存在著穩(wěn)定的相界面,界面的兩側(cè)各有一個(gè)很薄的滯流膜層,在氣相一側(cè)的稱為氣膜,液相一側(cè)的叫做液膜。氧氣分子以擴(kuò)散的形式通過(guò)此二膜層。如圖3-8所示。②在相界面處,氣、液兩相達(dá)到平衡。③在膜層以外的氣、液兩相中,氧氣的濃度基本相等,全部濃度變化集中在兩個(gè)膜層內(nèi)。第五十頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)圖3-8雙膜理論示意圖第五十一頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)通過(guò)以上的假設(shè),就把整個(gè)氧氣在氣液間的傳遞過(guò)程簡(jiǎn)化為經(jīng)由氣液兩膜的分子擴(kuò)散過(guò)程。氧氣在氣液間的傳遞速度也就是氧氣通過(guò)兩個(gè)膜的擴(kuò)散速度,可以用下列公式表示: NA=kG(p-pi);(3-10) NA=kL(ci-c);(3-11)式中:NA――氧氣通過(guò)氣液的傳遞速度,mol/(m2·s); kG――氣膜傳質(zhì)系數(shù),mol/(m2·s·Pa); p――氣相氧分壓,Pa; pi――氣液相界面氧分壓,Pa; kL――液膜傳質(zhì)系數(shù),m/s; ci――氣液相界面氧氣濃度,mol/m3; c――液相溶氧濃度,mol/m3。第五十二頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)公式3-10和公式3-11含有氣液相界面的氧氣濃度和分壓,實(shí)際上并沒(méi)有辦法測(cè)定它們,這給計(jì)算帶來(lái)困難,于是,人們又提出以下兩個(gè)公式: NA=KG(p-p*);(3-12) NA=KL(c-c*);(3-13)式中:KG――以氧分壓為推動(dòng)力的總傳質(zhì)系數(shù),mol/ (m2·s·Pa); KL――以氧濃度為推動(dòng)力的總傳質(zhì)系數(shù),m/s; p*――與液相溶氧濃度c平衡的氧氣分壓,Pa; c*――與氣相氧分壓p平衡的液相溶氧濃度, mol/m3;第五十三頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)以上公式也可表述為推動(dòng)力除以阻力的形式:第五十四頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)又因?yàn)?,氧氣在水中的溶解度符合亨利定律,即:氣液平衡時(shí)p=HC*其中,H為亨利常數(shù),單位Pa/mol。所以,p*=H·c,p=H·c*;根據(jù)雙膜理論,相界面上氧的分壓與濃度達(dá)到平衡,所以:pi=H·ci將以上關(guān)系分別代入公式3-10和3-11,可得:

第五十五頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)再分別結(jié)合公式3-13和公式3-12,得:從上式可知,當(dāng)H比較大時(shí),相同的分壓下氣體在液相中的溶解度較低,遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于因此,KL=kL,氣體傳遞屬于液膜傳遞控制,氣體的傳遞速度由公式3-13決定。第五十六頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)氧氣向水中的傳遞屬于上述情況,因此,氧氣向發(fā)酵液的傳遞速率可由下述公式計(jì)算: 溶氧速率Na=KLa(c*-c);(3-14)式中:Na――溶氧速率,mol/(m3·s); a――每單位體積發(fā)酵液中氣液界面面積,m2/m3。由于a很難測(cè)定,KLa常常合并為一個(gè)常數(shù),稱為體積溶氧系數(shù),單位s-1或h-1。由公式3-14可看出,氧的傳遞推動(dòng)力(c*-c)和體積溶氧系數(shù)KLa是影響溶氧速率的關(guān)鍵因素,任何影響這兩個(gè)數(shù)的外界因素都影響發(fā)酵液中氧的傳遞。第五十七頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)3.3.2影響溶氧系數(shù)的因素從公式3-14可看出,要想提高生物反應(yīng)器的供氧速率,一是提高氧傳遞推動(dòng)力(c*-c),二是增加溶氧系數(shù)。因?yàn)榘l(fā)酵液內(nèi)氧氣濃度c不允許太低,提高推動(dòng)力就只能增加氧氣的飽和濃度c*。提高飽和濃度c*的辦法通常有三種:①降低培養(yǎng)液粘度;②通入富氧空氣;③提高生物反應(yīng)器內(nèi)壓力。工業(yè)生產(chǎn)上常采用稀釋培養(yǎng)液的辦法,后兩種辦法通常不被采用。第五十八頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)一般來(lái)說(shuō),在一個(gè)罐式攪拌生物反應(yīng)器中,溶氧系數(shù)KLa可以用下式表示:式中:Pg――在通氣情況下的攪拌功率,W; VL――反應(yīng)器中培養(yǎng)液凈體積,不包括氣體所占體積,m3; νg――氣體表面速率,等于空氣流量除以反應(yīng)器的橫截面積,m/s; KLa――氧的體積傳質(zhì)系數(shù)s-1; X――常數(shù); y,z――均為正數(shù)。第五十九頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)

1.機(jī)械攪拌攪拌是影響溶氧傳質(zhì)系數(shù)的一個(gè)主要因素,攪拌輸出功率越大,溶氧系數(shù)越大。這是因?yàn)楸容^大的攪拌功率不但可以使分布在發(fā)酵液中氣泡變小,增加氣液接觸面積,而且使氣泡在發(fā)酵液內(nèi)沿著一個(gè)比較曲折的途徑運(yùn)動(dòng),延長(zhǎng)了氣泡在液體內(nèi)的停留時(shí)間。更重要的是攪拌能夠增加液體的喘流程度,減少液膜厚度,降低傳質(zhì)阻力。此外攪拌也能使培養(yǎng)液中各成分在反應(yīng)器內(nèi)均勻分布,有利于細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝物的分散。第六十頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)

2.培養(yǎng)液的凈體積在同樣的攪拌形式和尺寸,同樣的輸入功率情況下,培養(yǎng)液的凈體積越大,溶氧系數(shù)越小。這是因?yàn)槿绻l(fā)酵液體積比較大,攪拌的均勻程度就會(huì)下降,盡管攪拌葉附近的傳質(zhì)效果可能不受影響,但是,遠(yuǎn)離攪拌的地方溶氧效果就會(huì)降低,總體上氣液傳質(zhì)效果就會(huì)變差,總?cè)苎跸禂?shù)降低。相反,培養(yǎng)液的凈體積小,攪拌比較均勻,發(fā)酵液各處都受到攪拌作用,溶氧系數(shù)就大。所以,減少培養(yǎng)液的凈體積也能夠提高溶氧系數(shù),當(dāng)然,培養(yǎng)液體積不能太小,至少要浸沒(méi)攪拌葉。

第六十一頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)

3.氣體的表面速率對(duì)同一個(gè)生物反應(yīng)器,氣體的表面速率越大,單位時(shí)間向反應(yīng)器通入的空氣越多,溶氧系數(shù)越大。原因在于較大的通氣量能夠在發(fā)酵液中產(chǎn)生較多的氣泡,從而增大氣液接觸面積,使溶氧系數(shù)提高。同時(shí),通氣對(duì)培養(yǎng)液也起到一定的攪拌作用,通氣量越大,攪拌越劇烈,降低了液膜和氣膜厚度,減少了傳質(zhì)阻力。因此,增加通氣量也能夠提高溶氧系數(shù),但是,通氣量也不能太大,因?yàn)樘蟮耐饬坎粌H容易產(chǎn)生大量泡沫,使發(fā)酵液沖出發(fā)酵罐,而且,通氣量超過(guò)一定的限度,容易發(fā)生所謂的“過(guò)載”現(xiàn)象。第六十二頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)

4.?dāng)嚢韫迌?nèi)部結(jié)構(gòu)在相同的條件下,如果對(duì)生物反應(yīng)器的內(nèi)部結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造,也可以增加溶氧系數(shù)。比如,內(nèi)壁加有擋板的反應(yīng)器比不加擋板溶氧系數(shù)大,因?yàn)閾醢逶黾恿朔磻?yīng)器內(nèi)液體的喘動(dòng)程度,使傳質(zhì)液膜變薄,減少了傳質(zhì)阻力,同時(shí)也改善了反應(yīng)器內(nèi)液體的流型,使各處更加平均。

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5.發(fā)酵液性質(zhì)發(fā)酵液性質(zhì)影響溶氧系數(shù)表現(xiàn)在它們對(duì)公式10中幾個(gè)常數(shù)x、y、z的影響上。首先,發(fā)酵液表面張力不同,空氣氣泡在發(fā)酵液中的合并難易程度就不一樣。一般純水和空氣的混合屬于這種“易合并表面氣-水混合液”。如果在發(fā)酵液中加入少量的電解質(zhì),發(fā)酵液的表面張力就會(huì)發(fā)生改變,形成“非易合并表面氣-水混合液”,發(fā)酵液內(nèi)的氣泡就比較難以合并,小氣泡的數(shù)量就會(huì)較多,氣液接觸面積相對(duì)較大,在一定情況下溶氧系數(shù)就較高。第六十四頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)以下兩個(gè)公式是在空氣-純水和空氣-含電解質(zhì)水兩個(gè)系統(tǒng)中溶氧系數(shù)計(jì)算公式:純水-空氣混合系統(tǒng)溶氧系數(shù)關(guān)聯(lián)公式(式中各參數(shù)物理意義同公式3-10):第六十五頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)含電解質(zhì)水-空氣系統(tǒng)溶氧系數(shù)關(guān)聯(lián)公式(式中各參數(shù)物理意義同公式3-10):第六十六頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)其次,在牛頓流體和非牛頓流體中,溶氧系數(shù)的變化規(guī)律也不同。牛頓流體指流體在層流時(shí),流體的粘度不隨速度而變,其速度分布呈拋物線形。大部份流體如水、酒精、空氣等屬于此類。非牛頓流體指流體行為不符合牛頓粘度定律者,如牙膏、強(qiáng)力膠、水泥漿等。在非牛頓流體中,攪拌功率的變化對(duì)溶氧系數(shù)的影響比牛頓流體要小,因此,要想達(dá)到同樣的溶氧系數(shù),非牛頓流體發(fā)酵液需要更大的攪拌功率。第六十七頁(yè),共七十四頁(yè),2022年,8月28日3.3生物反應(yīng)器的通風(fēng)和溶氧傳質(zhì)

6.消沫劑消沫劑對(duì)溶氧系數(shù)的影響較大,有雙重作用。一方面,消沫劑能夠降低表面張力,減小發(fā)酵液中氣泡的直徑,使發(fā)酵液中充滿較多的小氣泡,從而增加單位體積

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