實(shí)驗(yàn)室自建分子診斷項(xiàng)目基本要求專家共識

最新：實(shí)驗(yàn)室自建分子診斷項(xiàng)目基本要求專家共識（最全版）實(shí)驗(yàn)室自建方法(laboratorydevelopedtests,LDTs)是指由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部研發(fā)、確認(rèn)和使用、以診斷為目的的體外診斷方法。僅限于本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用，不得在市場銷售，也不得轉(zhuǎn)移到其他實(shí)驗(yàn)室使用。做好實(shí)驗(yàn)室自建分子檢測項(xiàng)目(laboratory－developedmoleculartests,LDMTs)，使其既能滿足臨床日益增長的分子診斷需求，又符合我國行政管理規(guī)范的要求。LDMTs的監(jiān)管要求01、實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)以及環(huán)境要求1．實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)：分子診斷實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過衛(wèi)生計(jì)生行政部門認(rèn)可的臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室審核驗(yàn)收，并在有效期內(nèi)。2．實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求：要求達(dá)到國家相關(guān)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室要求。02、人員要求1．開展LDMTs，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該有相應(yīng)團(tuán)隊(duì)(應(yīng)至少包括具有檢驗(yàn)等相關(guān)專業(yè)的博士學(xué)位并具有相關(guān)研究經(jīng)驗(yàn)和工作基礎(chǔ)的研究人員1名，臨床相關(guān)專業(yè)中級以上醫(yī)師1名，檢驗(yàn)相關(guān)專業(yè)中級以上檢驗(yàn)技師1名)。2．自建分子診斷項(xiàng)目負(fù)責(zé)人應(yīng)至少具有副高級以上專業(yè)技術(shù)職稱、博士學(xué)位、并從事分子診斷工作至少3年。3．分子診斷實(shí)驗(yàn)室操作人員應(yīng)經(jīng)過有資質(zhì)的培訓(xùn)機(jī)構(gòu)培訓(xùn)合格取得上崗證。4．簽發(fā)分子病理報(bào)告的醫(yī)師應(yīng)至少具有中級病理學(xué)專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格，并有從事分子病理工作的經(jīng)歷。03、管理要求1．開展LDMTs項(xiàng)目之前，應(yīng)有相關(guān)臨床科室的申請、醫(yī)務(wù)機(jī)構(gòu)的審批以及醫(yī)院倫理委員會(huì)的同意。2．應(yīng)通過相關(guān)行政管理機(jī)構(gòu)組織的同行專家委員會(huì)的評議，或經(jīng)所在地省、自治區(qū)、直轄市人民政府相關(guān)行政部門審核同意。3．通過初次評議的項(xiàng)目在試運(yùn)行一年后，宜申請相關(guān)行政管理機(jī)構(gòu)組織的同行專家委員會(huì)的再評議，通過再次評議的項(xiàng)目，正式運(yùn)行。4．通過再次評議的項(xiàng)目，宜接受每3年一次的復(fù)評審，用以監(jiān)督該項(xiàng)目的運(yùn)行情況。5．停用項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)和措施：一旦造成醫(yī)療糾紛或進(jìn)入司法程序，相關(guān)單位的LDMTs項(xiàng)目應(yīng)立即停止使用，并進(jìn)入緊急審核程序，通過相關(guān)行政管理機(jī)構(gòu)組織的同行專家委員會(huì)的評議后，項(xiàng)目方可恢復(fù)檢驗(yàn)。6．實(shí)驗(yàn)室須建立相應(yīng)的程序和管理制度。質(zhì)量控制的基本要求(一)應(yīng)不低于國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方法規(guī)要求，如《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理方法》、《CNAS－CL36醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說明》等。(二)開展LDMTs項(xiàng)目臨床應(yīng)用檢測之前，應(yīng)進(jìn)行性能確認(rèn)。(三)實(shí)驗(yàn)室自建分子診斷項(xiàng)目中，涉及的市售試劑耗材的質(zhì)量保證，應(yīng)不低于國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和地方法規(guī)要求。(四)定性檢測項(xiàng)目，每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陰性、弱陽性和/或陽性質(zhì)控物。如為基因突變、基因多態(tài)性或基因型檢測，則應(yīng)包括最能反映檢測情況的突變或基因型樣品，每批檢測的質(zhì)控至少應(yīng)有一種基因突變或基因型，并建議在一定周期內(nèi)涵蓋所有的基因型。(五)定量檢測項(xiàng)目，每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置高值、中值和低值質(zhì)控物。(六)應(yīng)參加通過認(rèn)可的能力驗(yàn)證計(jì)劃提供者提供的能力驗(yàn)證計(jì)劃。(七)在沒有能力驗(yàn)證提供的情況下，通過與其他實(shí)驗(yàn)室(如已獲認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室、使用相同檢測方法的實(shí)驗(yàn)室、使用配套系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室)比對的方式確定檢驗(yàn)結(jié)果的可接受性時(shí)，應(yīng)滿足如下要求：1．規(guī)定比對實(shí)驗(yàn)室的選擇原則。2．樣品數(shù)量：至少5份，包括正常和異常水平或不同常見基因突變或基因型；頻率：至少每年2次。3．判定標(biāo)準(zhǔn)：至少應(yīng)有≥80%的結(jié)果符合要求。4．實(shí)驗(yàn)室使用兩套及以上檢測系統(tǒng)檢測同一項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)有比對數(shù)據(jù)表明其檢測結(jié)果的一致性，比對頻次每年至少1次，樣品數(shù)量不少于20份，濃度水平應(yīng)覆蓋測量區(qū)間，計(jì)算回歸方程，系統(tǒng)誤差應(yīng)<±7.5%。應(yīng)定期(至少每年1次，每次至少5份臨床樣品)進(jìn)行檢驗(yàn)人員的結(jié)果比對、考核并記錄。使用不同生物參考區(qū)間的檢測系統(tǒng)間不宜進(jìn)行比對。LDMTs性能確認(rèn)的基本要求（略）LDMTs的方法學(xué)確認(rèn)的技術(shù)指標(biāo)01、準(zhǔn)確性(accuracy)：對定量分析，準(zhǔn)確性指的是"接近真實(shí)值"，而對于定性分析，準(zhǔn)確性則是指與比對試驗(yàn)或者標(biāo)準(zhǔn)方法檢測結(jié)果的相關(guān)性。確認(rèn)方法：準(zhǔn)確性的評估可以使用參考物質(zhì)進(jìn)行評定，或者與另一種臨床上有連續(xù)性并被普遍接受的方法(所謂"金標(biāo)準(zhǔn)")進(jìn)行比對。在缺乏金標(biāo)準(zhǔn)的情況下，可以引用參考文獻(xiàn)作為指導(dǎo)。用于確認(rèn)的標(biāo)本通常選用與臨床檢測同類的標(biāo)本。樣品數(shù)n≥20，濃度應(yīng)覆蓋測量區(qū)間。定性結(jié)果一致性宜大于90%，定量結(jié)果一般可接受為不能超過對照方法平均含量的3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差或者15%變異度。02、精確性(precision)：精確性是指規(guī)定條件下所獲得獨(dú)立測量結(jié)果的接近程度，評價(jià)檢測技術(shù)的重復(fù)性。包括同一批標(biāo)本用同一種方法同一種儀器的精密度(repeatability)，以及不同日間、操作者、不同儀器、不同實(shí)驗(yàn)之間的精密度(reproducibility)。確認(rèn)方法：因需考慮安排不同的操作者、不同批號的試劑以及不同型號的儀器來進(jìn)行多次的重復(fù)操作，一般建議確認(rèn)一項(xiàng)分子檢驗(yàn)方法的精密度大致需要20個(gè)工作日。在選擇待測標(biāo)本用于確認(rèn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一般用高和低2個(gè)不同含量標(biāo)本來進(jìn)行，并接近檢測限。標(biāo)本類型、取樣與儲存條件應(yīng)盡量符合待測的臨床標(biāo)本。目前尚缺乏統(tǒng)一的國際參考標(biāo)準(zhǔn)來確定臨床診斷實(shí)驗(yàn)室可普遍接受的精密度范圍。對于定性試驗(yàn)，判斷結(jié)果的一致性，一般符合率應(yīng)該大于90%。對于定量試驗(yàn)，一般確認(rèn)實(shí)驗(yàn)可接受的精密度為不能超過已知靶分子平均含量的3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差或者15%變異度。FDA建議變異度不能超過20%。CNAS的要求則以能力驗(yàn)證/室間質(zhì)評評價(jià)界限(靶值±0.4對數(shù)值)作為允許總誤差(TEa)，重復(fù)性精密度<3/5TEa；中間精密度<4/5Tea。03、參考范圍(referencerange)：指特定人群檢測結(jié)果的預(yù)計(jì)數(shù)值范圍，等同于參考區(qū)間或者正常參考值范圍，其數(shù)據(jù)來源于不存在可能影響檢測結(jié)果疾病的人群的樣本。確認(rèn)方法：對于大部分檢測項(xiàng)目，正常參考范圍與異常值范圍都是在前期研究中就已經(jīng)明確，目的是為了給特定患者群體確定正常數(shù)值范圍。對于定性試驗(yàn)，參考范圍可以是陰性、正常、無克隆性增生，或者其他能夠表明檢測結(jié)果是否正常的用詞。需要注意的是，某些檢測項(xiàng)目是沒有參考范圍的。如對于HCV陽性樣本的HCV基因分型檢測，就無法在所有HCV已知基因型中選出一個(gè)"正常"的基因型。04、可報(bào)告范圍(reportablerange)：可報(bào)告范圍是指當(dāng)儀器、試劑或系統(tǒng)的測量反應(yīng)為有效時(shí)的檢測結(jié)果范圍。簡單地說，報(bào)告范圍包括所有可能被報(bào)告的結(jié)果。確認(rèn)方法：對于定性測試，應(yīng)包括所有的報(bào)告結(jié)果(如野生型純合子、突變型雜合子或純合子)。對于定量試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室必須明確定量分析中的分析測量范圍(analyticmeasurementrange,AMR)是指待測樣品在未被稀釋、濃縮或其他不屬于常規(guī)檢查步驟部分的預(yù)處理?xiàng)l件下，一種方法可直接測量待測樣品值的范圍。因?yàn)榭梢韵♂寴悠?，?bào)告范圍可能大于AMR。05、分析靈敏度(analyticsensitivity)：檢測系統(tǒng)或方法可檢測的最低分析物濃度稱為分析靈敏度或檢測限。在分子檢測領(lǐng)域，分析敏感性是指用該項(xiàng)分子測試技術(shù)能夠測到生物標(biāo)本中待測靶核酸分子的最低含量。定性實(shí)驗(yàn)中，分析靈敏性常用"最低檢測限(limitofdetection,LoD)"來表達(dá)。這種檢測低限指能連續(xù)在同一個(gè)標(biāo)本中測到靶核酸的可能性在統(tǒng)計(jì)學(xué)上概率≥95%。定量實(shí)驗(yàn)中，多用"定量限(limitofquantitation,LoQ)"來表示。與LoD不同，LoQ表示一個(gè)能夠檢測出的靶物質(zhì)在標(biāo)本中的最高和最低的量。對于某些分子檢測方法來說，LoD與LoQ相同。但由于LoD不需要考慮是否在線性范圍內(nèi)，所以LoD常常比LoQ還要低。確認(rèn)方法：通常通過一系列稀釋已知含量的靶病原體或分子來分析最低檢測限。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)條件下并用同一個(gè)批號的制劑，重復(fù)測定已稀釋至最低濃度的標(biāo)本，重復(fù)測定來自臨床的5個(gè)標(biāo)本，60個(gè)結(jié)果，CV值小于指定標(biāo)準(zhǔn)視為接受。06、分析特異性(analyticspecificity)：是指該方法本身能夠檢測出特定待測核酸分子的能力。與其他相關(guān)的核酸分子的交叉反應(yīng)和標(biāo)本條件的變化是否對待測分子的檢測造成影響。分子測定方法的交叉反應(yīng)多來源于其他有相關(guān)或類似的核酸分子。干擾物質(zhì)是指標(biāo)本中其他非靶分子物質(zhì)對待測的靶分子檢測正確性的影響。在生物樣本中，內(nèi)源性干擾物質(zhì)除去包括常見的血液中的血紅素、膽紅素、三酯甘油外，還有很多肉眼不能觀察到的與疾病有關(guān)的代謝產(chǎn)物等。外源性干擾物常見于采集和處理標(biāo)本過程中的污染。例如：采樣管含有的抗凝劑、防腐劑、穩(wěn)定劑，手套上的滑石粉以及核酸分子提取純化過程中殘留的試劑。確認(rèn)方法：評價(jià)分子檢測方法的交叉反應(yīng)性，首先要獲得盡可能多的可能與特定待測靶分子發(fā)生交叉反應(yīng)的分子核酸序列并加以分析。如果在所測的標(biāo)本中存在某些結(jié)構(gòu)和核酸序列相近的病原體或內(nèi)源性生物分子，應(yīng)對這些病原體和生物分子進(jìn)行驗(yàn)證評價(jià)。干擾物的作用是抑制正常PCR反應(yīng)，使結(jié)果偏低，從而造成假陰性。最常見的驗(yàn)證方法之一是在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的過程中加入一個(gè)已知的PCR反應(yīng)對照。在測定過程中，如果PCR反應(yīng)對照未發(fā)生擴(kuò)增或擴(kuò)增產(chǎn)物量低于預(yù)期值范圍，即可證實(shí)有干擾抑制物在該標(biāo)本中存在。07、臨床驗(yàn)證(clinicalvalidity)：臨床驗(yàn)證是確定某種分子檢測技術(shù)檢出核酸分子診斷疾病的能力。臨床驗(yàn)證的目的是評價(jià)這種新的分子檢測技術(shù)是否適合于特定的臨床疾病的診斷。臨床敏感性不同于分析敏感性：分析敏感性主要指參考方法檢測結(jié)果為陽性的結(jié)果中，用實(shí)驗(yàn)方法得到陽性結(jié)果的一致性；臨床敏感性主要指結(jié)果為真陽性的人群中真正罹患某種疾病或異常的比例，強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床診斷的一致性。同樣的，臨床特異性也不同于分析特異性，分析特異性主要指參考方法檢測結(jié)果為陰性的結(jié)