(3.2.3)-培養(yǎng)基的制備程序

微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基的制備程序【知識(shí)目標(biāo)】知道培養(yǎng)基的制備程序和要求。。

【能力目標(biāo)】能夠獨(dú)立進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)基的制備

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任務(wù)目標(biāo)一、培養(yǎng)基的制備程序調(diào)配：按照培養(yǎng)基的配方準(zhǔn)確稱量各成分，置于盛有蒸餾水的三角燒瓶中，充分混勻。溶化：將培養(yǎng)基的各成分混勻于水中，加熱溶解。加熱過(guò)程中應(yīng)不斷攪拌，并防止液體外溢。溶化完畢后應(yīng)注意補(bǔ)充失去的水分。矯正pH：用pH比色計(jì)、精密pH試紙或比色法可測(cè)定培養(yǎng)基的pH值。一般將培養(yǎng)基的pH值矯正至7.4～7.6。有的細(xì)菌需要酸性或堿性培養(yǎng)基。由于培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，其pH約降低0.1～0．2，因此矯正pH時(shí)應(yīng)比實(shí)際需要的pH高0.1～0.2。過(guò)濾澄清：培養(yǎng)基配成后若有沉渣或渾濁，須過(guò)濾使之澄清透明。液體培養(yǎng)基一般用濾紙過(guò)濾澄清；固體培養(yǎng)基加熱溶化后趁熱用絨布過(guò)濾，亦可用雙層紗布夾薄層脫脂棉過(guò)濾。一、培養(yǎng)基的制備程序分裝：1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基一般分裝于三角燒瓶中，滅菌后備用。2）瓊脂平板：將溶化的固體培養(yǎng)基（已滅菌），按無(wú)菌操作傾人無(wú)菌平皿內(nèi)，輕搖平皿，使培養(yǎng)基鋪于平皿底部，凝固后備用。一般內(nèi)徑為90mm的平皿中傾入培養(yǎng)基的量約為13～15ml，如為MH瓊脂則每個(gè)平皿傾人培養(yǎng)基的量為25ml。內(nèi)徑為70mm的平皿內(nèi)，傾人培養(yǎng)基約7～8ml較為適宜。一、培養(yǎng)基的制備程序分裝：3）半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基一般分裝于試管內(nèi)，分裝量約為試管長(zhǎng)度的1/3，滅菌后直立凝固待用。4）瓊脂斜面：制備瓊脂斜面應(yīng)將培養(yǎng)基分裝在試管內(nèi)，分裝量為試管長(zhǎng)度的1/5，滅菌后趁熱放置斜面凝固，斜面長(zhǎng)約為試管長(zhǎng)度的2/3。5）液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基一般分裝在試管內(nèi)，分裝量為試管長(zhǎng)度的1/3，滅菌后備用。一、培養(yǎng)基的制備程序滅菌：培養(yǎng)基的滅菌可根據(jù)其性質(zhì)和成分選擇不同的滅菌方法。普通基礎(chǔ)培養(yǎng)基一般用高壓蒸汽滅菌，此類培養(yǎng)基分裝量少時(shí)，用103.4kPa/cm的壓力滅菌15分鐘即可；若分裝量多，則用此壓力滅菌30分鐘。培養(yǎng)基中若含糖、明膠時(shí)，則以68.45kPa/cm。的壓力滅菌15分鐘為宜。培養(yǎng)基中如含有糖、血清、牛乳、雞蛋等不耐高溫高壓的物質(zhì)，則選用間歇蒸汽滅菌法滅菌。含尿素、血清、腹水等物質(zhì)的培養(yǎng)基選用過(guò)濾除菌為宜。一、培養(yǎng)基的制備程序檢定：培養(yǎng)基制備后是否符合要求，需要進(jìn)行質(zhì)量檢查。檢查內(nèi)容包括無(wú)菌試驗(yàn)和效果檢測(cè)。無(wú)菌試驗(yàn)是將制備好的培養(yǎng)基置于35℃環(huán)境培養(yǎng)18～24小時(shí)，若無(wú)菌生長(zhǎng)說(shuō)明被檢培養(yǎng)基無(wú)菌。效果檢測(cè)則用標(biāo)準(zhǔn)菌株接種在被檢培養(yǎng)基上，觀察細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落、形態(tài)等是否典型。保存：制備好的培養(yǎng)基注明名稱、配制的日期等，置保鮮袋內(nèi)存放于冰箱