抗核抗體檢測(cè)及臨床意義張瑾

風(fēng)濕免疫性疾病相關(guān)自身抗體抗核抗體譜（ANAs）類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)抗體(RF,抗CCP等)抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）抗自身免疫性肌炎譜自身免疫性肝病相關(guān)抗體譜抗磷脂抗體譜當(dāng)前1頁(yè)，總共54頁(yè)?？购丝贵w譜檢測(cè)的意義有助于彌漫性結(jié)締組織病的分類(lèi)和診斷抗Sm抗體是SLE的標(biāo)記抗體；抗Scl-70抗體是SSc的標(biāo)記抗體；抗Jo-1抗體是PM/DM的標(biāo)記抗體；觀察疾病活動(dòng)度和治療反應(yīng)抗dsDNA抗體研究發(fā)病機(jī)理抗核小體抗體、抗dsDNA抗體當(dāng)前2頁(yè)，總共54頁(yè)?；靖拍預(yù)NA熒光核型ANAs中的常見(jiàn)抗體當(dāng)前3頁(yè)，總共54頁(yè)?？购丝贵w自身抗體：指抗自身組織、器官、細(xì)胞及其成分的抗體ANA：指抗細(xì)胞核成分（DNA，RNA，蛋白質(zhì)和酶）的抗體。ANA存在一個(gè)譜。ANA新概念：抗核酸(Nucleicacid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗體總稱(chēng)某些核抗原成分在核仁和胞漿內(nèi)比核質(zhì)內(nèi)更豐富

(如SSA/RO,Jo-1,rRNP等)當(dāng)前4頁(yè)，總共54頁(yè)。ANA檢測(cè)方法-IIF法ANA滴度ANA核型當(dāng)前5頁(yè)，總共54頁(yè)。ANA滴度的意義結(jié)締組織病的粗篩（>1:160）陽(yáng)性標(biāo)本還需進(jìn)一步識(shí)別感染、腫瘤及5%正常人可出現(xiàn)低滴度陽(yáng)性ANA陰性基本可以除外SLEANA滴度與疾病活動(dòng)性無(wú)明確相關(guān)性當(dāng)前6頁(yè)，總共54頁(yè)。熒光顯微鏡下ANA的染色型別均質(zhì)型（H）核膜型（M)斑點(diǎn)型（S）核仁型（N）著絲點(diǎn)型（ACA）胞漿型（C）混合型當(dāng)前7頁(yè)，總共54頁(yè)。均質(zhì)型(H)抗組蛋白抗ds/ssDNA抗核小體主要出現(xiàn)在SLE中當(dāng)前8頁(yè)，總共54頁(yè)。均質(zhì)型

(H)當(dāng)前9頁(yè)，總共54頁(yè)。核膜型

(M)主要與抗dsDNA有關(guān)與抗原底物片固定方法和備制過(guò)程有關(guān)出現(xiàn)在SLE中部分與抗核包膜蛋白有關(guān)抗板層素抗gp210出現(xiàn)在PBC中

當(dāng)前10頁(yè)，總共54頁(yè)。核膜型

(M)當(dāng)前11頁(yè)，總共54頁(yè)。與抗ENA成分有關(guān)抗Sm抗RNP抗SS-A抗SS-B出現(xiàn)在SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM等

斑點(diǎn)型(S)當(dāng)前12頁(yè)，總共54頁(yè)。斑點(diǎn)型(S)當(dāng)前13頁(yè)，總共54頁(yè)。與抗核仁蛋白有關(guān)抗Scl-70抗RNA多聚酶I抗PM-Scl出現(xiàn)在SSc中核仁

型(N)當(dāng)前14頁(yè)，總共54頁(yè)。核仁

型(N)當(dāng)前15頁(yè)，總共54頁(yè)。與抗著絲點(diǎn)染色質(zhì)有關(guān)存在于有絲分裂期出現(xiàn)在SSc、CREST綜合征等中著絲點(diǎn)

型(ACA)當(dāng)前16頁(yè)，總共54頁(yè)。著絲點(diǎn)

型(ACA)當(dāng)前17頁(yè)，總共54頁(yè)。與抗胞漿成分有關(guān)抗核糖體P蛋白（rRNP）：出現(xiàn)在SLE中抗合成酶：Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ抗信號(hào)識(shí)別顆粒（SRP)抗線粒體：出現(xiàn)在PBC中抗高爾基體抗溶酶體等等

胞漿型

(C)見(jiàn)于PM/DM當(dāng)前18頁(yè)，總共54頁(yè)。

胞漿型(C)當(dāng)前19頁(yè)，總共54頁(yè)。ANA熒光核型小結(jié)均質(zhì)型（H）：像大餅，SLE相關(guān)核膜型（M)：像圈圈，SLE相關(guān)斑點(diǎn)型（S）：像藕片，抗ENA核仁型（N）：像紐扣，SD相關(guān)著絲點(diǎn)型（ACA）：像滿天星，抗ACA胞漿型（C）：像空心大餅,SLEPM/DMPBC相關(guān)混合型：稀釋后檢測(cè)有助于區(qū)分當(dāng)前20頁(yè)，總共54頁(yè)?？购丝贵w譜（ANAs）ANAs抗核不溶成分抗核可溶成分（抗ENA）抗染色體DNA蛋白抗核仁抗體

抗DNA抗體

抗核小體抗體

抗組蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4

抗Sm,U1RNP,SSA,SSB抗Scl-70,Jo-1,PM-1抗rRNP,PCNA…….dsDNAssDNA抗著絲點(diǎn)抗體（ACA)抗5sRNA當(dāng)前21頁(yè)，總共54頁(yè)?？筪sDNA檢測(cè)方法以短膜蟲(chóng)或馬疫錐蟲(chóng)為底物的間接免疫熒光法(IIF)：≥1:5短膜蟲(chóng)或馬疫錐蟲(chóng)的動(dòng)基體內(nèi)含有天然純dsDNA，未經(jīng)人工處理，不含組蛋白與ssDNA，抗原性純一特異。優(yōu)點(diǎn)：特異性好

當(dāng)前22頁(yè)，總共54頁(yè)。抗dsDNA檢測(cè)方法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）:≥100IU/ml優(yōu)點(diǎn)：敏感性最高缺點(diǎn)：過(guò)于敏感，同時(shí)可能檢測(cè)到ssDNA抗體和低親和力dsDNA抗體,而這兩種致病力均不強(qiáng)

放射免疫法(Farr):≥20%

優(yōu)點(diǎn)：對(duì)高親和度DNA抗體的檢測(cè)優(yōu)于CL-IIF缺點(diǎn)：具有放射性，對(duì)技術(shù)人員身體造成一定影響蛋白印跡法（WB）

缺點(diǎn)：dsDNA抗原在純化包備過(guò)程中可變性解鏈，變成ssDNA,導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果不同方法檢測(cè)SLE患者抗dsDNA抗體的結(jié)果：everythingispossible至少用兩種方法做（報(bào)告結(jié)果時(shí)注明方法學(xué)）,互為補(bǔ)充。如：IIF法+ELISA法

當(dāng)前23頁(yè)，總共54頁(yè)。當(dāng)前24頁(yè)，總共54頁(yè)。當(dāng)前25頁(yè)，總共54頁(yè)。抗dsDNA抗體臨床意義SLE的血清特異性抗體多有致病性（IgG型），與親和力（高）有關(guān)與LN與SLE疾病活動(dòng)性相關(guān)，活動(dòng)期達(dá)90％可用于SLE疾病活動(dòng)期判斷＆藥物療效觀察與SLE急性皮疹、血管炎、漿膜腔炎、白細(xì)胞減少等有關(guān)當(dāng)前26頁(yè)，總共54頁(yè)。當(dāng)前27頁(yè)，總共54頁(yè)。抗組蛋白抗體（AHA）

（酶聯(lián)免疫吸附法X2SD)可出現(xiàn)于多種結(jié)締組織病，不具有診斷特異性SLE：50%

活動(dòng)期SLE可達(dá)90.2%與LN相關(guān)，與SLE疾病活動(dòng)性存在一定意義的相關(guān)性藥物性狼瘡（DIL）：>90%如：異煙肼、苯妥因鈉、青霉胺、雌激素等僅有AHA而無(wú)其他ANA，強(qiáng)烈支持DIL其他結(jié)締組織病：23-30%如：RA、PBC、SSc等

當(dāng)前28頁(yè)，總共54頁(yè)。核小體是真核細(xì)胞染色質(zhì)的基本復(fù)制單位，由組蛋白與DNA組成。參與SLE發(fā)病機(jī)制：多克隆B細(xì)胞活化劑產(chǎn)生ANuA，先于其他ANA促進(jìn)抗dsDNA與AHA形成參與LN的發(fā)生

抗核小體抗體（ANuA）當(dāng)前29頁(yè)，總共54頁(yè)?？购诵◇w抗體臨床意義SLE標(biāo)記性/高特異性自身抗體敏感性：58%-66%（優(yōu)于抗dsDNA及抗Sm）特異性：98%-100%（與抗dsDNA相當(dāng)）用于SLE的早期診斷ANuA的產(chǎn)生早于抗dsDNA、AHA抗dsDNA陰性者有1/4～1/2ANuA陽(yáng)性與LN相關(guān)，用于SLE疾病活動(dòng)性監(jiān)測(cè)當(dāng)前30頁(yè)，總共54頁(yè)。ANuA、抗dsDNA、AHA聯(lián)合檢測(cè)意義當(dāng)前31頁(yè)，總共54頁(yè)?？笶NA抗體

extractablenuclearantigen可提取性核抗原成分：核酸與核蛋白，不含染色質(zhì)成分功能：參與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白翻譯合成來(lái)源：無(wú)種屬差異，有組織不均一性理化特性：對(duì)溫度和RNA酶敏感（U1RNP、SS-A）意義：抗ENA抗體是ANAs中范圍最廣、最為重要的一簇抗體，與疾病活動(dòng)性大多無(wú)相關(guān)當(dāng)前32頁(yè)，總共54頁(yè)。

抗ENA抗體檢測(cè)方法免疫雙擴(kuò)散法(ID)對(duì)流免疫電泳法(CIE)免疫印跡法(IBT)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Proteinchip）當(dāng)前33頁(yè)，總共54頁(yè)?？筍m抗體與抗U1RNP抗體靶抗原：位于細(xì)胞核內(nèi)的一組含尿嘧啶豐富的核糖核蛋白，Sm和U1RNP是同一分子復(fù)合物中的不同位點(diǎn)當(dāng)前34頁(yè)，總共54頁(yè)。抗Sm抗體與抗U1RNP抗體抗Sm：SLE的標(biāo)記性抗體，是前瞻性及回顧性診斷的指標(biāo)。陽(yáng)性率低：SLE（30%）抗U1RNP：多種CTD均可出現(xiàn)，與手指腫脹、雷諾現(xiàn)象、肌炎、指端硬化等相關(guān)，但腎炎發(fā)生率低。

陽(yáng)性率：40-60%，其中SLE(30-40%),SSc(14%),pSS(12%),PM/DM(15%)高滴度抗U1RNP+抗Sm-MCTD抗U1RNP+抗Sm+SLE抗U1RNP-抗Sm+實(shí)驗(yàn)室誤差?U1RNP丟失?當(dāng)前35頁(yè)，總共54頁(yè)?？箁RNP抗體靶抗原：胞漿中60S核糖體大亞基上的磷酸化蛋白

當(dāng)前36頁(yè)，總共54頁(yè)?？箁RNP抗體SLE的高度特異性抗體，與SLE腦病相關(guān)常在SLE活動(dòng)期存在,但不會(huì)隨病情的緩解立即消失,可持續(xù)1-2年后才轉(zhuǎn)陰。陽(yáng)性率：24%可出現(xiàn)在SLE早期（ANA及抗dsDNA陰性）

當(dāng)前37頁(yè)，總共54頁(yè)?？筍SA與抗SSB抗體靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相鄰結(jié)構(gòu)在不同的細(xì)胞周期，在細(xì)胞內(nèi)的定位不同（細(xì)胞核內(nèi)和胞漿中均可存在）pSS的SS-A存在于細(xì)胞核內(nèi)SLE的SS-A存在于胞漿中SS-B主要位于細(xì)胞核內(nèi)45KD47KD48KD當(dāng)前38頁(yè)，總共54頁(yè)?？筍SA與抗SSB抗體抗SS-A：結(jié)締組織病中出現(xiàn)頻率最高的抗體（60-75%），見(jiàn)于pSS（75%）SLE（25%）

RA（10%）SSc（24%）PBC（20%）等抗SSB：常與抗SSA相伴出現(xiàn)，診斷pSS更特異，見(jiàn)于pSS（40%）、SLE（10%）臨床意義：與新生兒狼瘡和先天性心臟傳導(dǎo)阻滯、平滑肌受累、光過(guò)敏、血管炎、皮損、紫癜、淋巴結(jié)腫大、WBC減少有關(guān)ANA陰性的SCLE：常為抗SSA抗體陽(yáng)性。當(dāng)前39頁(yè)，總共54頁(yè)。當(dāng)前40頁(yè)，總共54頁(yè)。當(dāng)前41頁(yè)，總共54頁(yè)?？笿o-1抗體(抗PL-1抗體)靶抗原：組氨酸t(yī)RNA合成酶胞漿中的磷酸蛋白當(dāng)前42頁(yè)，總共54頁(yè)?？笿o-1抗體(抗PL-1抗體)PM/DM的標(biāo)記抗體，陽(yáng)性率20-30%抗體效價(jià)與疾病活動(dòng)性相關(guān)抗Jo-1抗體綜合征：急性發(fā)熱,對(duì)稱(chēng)性關(guān)節(jié)炎,技工手,雷諾現(xiàn)象,肌炎（相對(duì)輕）,肺間質(zhì)病變其他抗合成酶抗體：抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ當(dāng)前43頁(yè)，總共54頁(yè)?？筍cL-70抗體靶抗原：DNA拓樸異構(gòu)酶I的降解產(chǎn)物主要存在核仁中SSc的標(biāo)記抗體，陽(yáng)性率20-30%多見(jiàn)于dSSc，病情進(jìn)展快，提示預(yù)后不良與ILD、彌漫性皮膚硬化有關(guān)，而PAH少見(jiàn)當(dāng)前44頁(yè)，總共54頁(yè)。主要靶抗原：著絲點(diǎn)蛋白-B多見(jiàn)于ISSc，病程緩慢，提示預(yù)后較好CREST綜合征：軟組織鈣化（C）,雷諾現(xiàn)象（R）,食道功能障礙（E）,指端硬化（S）,毛細(xì)血管擴(kuò)張（T），但并非標(biāo)記抗體，也見(jiàn)于孤立性雷諾現(xiàn)象、SS、PBC、AIH等國(guó)外文獻(xiàn)：與PAH相關(guān)，而ILD少見(jiàn)中國(guó)人群：未發(fā)現(xiàn)與PAH相關(guān)，但I(xiàn)LD少見(jiàn)白伊娜，王遷等.中國(guó)系統(tǒng)性硬化癥患者硬皮病相關(guān)自身抗體的檢測(cè)及其臨床意義.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志.2011（5）:452-455.抗著絲點(diǎn)抗體(ACA)當(dāng)前45頁(yè)，總共54頁(yè)。TakeHomeMassageANA熒光核型對(duì)抗體性質(zhì)范圍有一定提示作用，尤其在靶抗原陰性時(shí)。ANA陰性而靶抗原陽(yáng)性主要見(jiàn)于抗胞漿成分抗體，如：SS-A、Jo-1、rRNP、線粒體等。抗核仁型抗體常與SSc有關(guān)?？咕|(zhì)型或核膜型抗體常與SLE有關(guān)。當(dāng)前46頁(yè)，總共54頁(yè)。TakeHomeMassage抗dsDNA：SLE特異性抗體，與LN及疾病活動(dòng)度有關(guān)，至少兩種方法聯(lián)合檢測(cè)（如：IIF法+ELISA法）?？购诵◇w、抗組蛋白、抗dsDNA三抗體陽(yáng)性者強(qiáng)烈提示增殖性LN。與疾病活動(dòng)性相關(guān)的抗體：抗dsDNA、抗核小體、抗組蛋白、抗Jo-1、抗rRNP與預(yù)后相關(guān)的抗體：抗Scl-70（差）、ACA（好）當(dāng)前47頁(yè)，總共54頁(yè)。案例1女性，34歲游走性多關(guān)節(jié)痛，雷諾現(xiàn)象半年RF56U/L；抗CCP抗體陰性；ANA1：320胸部CT：輕度肺間質(zhì)病變?cè)\斷？治療？（核仁型）UCTDILD發(fā)展為

SSc可能性大Pred+CTX當(dāng)前48頁(yè)，總共54頁(yè)。案例2男性，50歲雙腕關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象半年ANA全套：陰性；抗CCP、RF：陰性胸部CT：輕度肺間質(zhì)病變右腕關(guān)節(jié)MRI：骨髓水腫和滑膜炎診斷？

復(fù)查：ANA陰性，抗Jo-1弱陽(yáng)性診斷：抗Jo-1抗體綜合征Pred+TⅡ當(dāng)前49頁(yè)，總共54頁(yè)。案例3女性32歲手指關(guān)節(jié)痛2月ANA（+）S1:80抗SSA（+++）135抗Ro52（+++）110三大常規(guī)正常；ESRC