公開課基因工程郝世強

公開課基因工程郝世強第1頁/共18頁1.不同生物間基因移植成功，說明生物共有一套

，從進化的角度看，這些生物具有

。2. 從化學(xué)本質(zhì)來看，運載體應(yīng)該是

。3.一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列,并在特定切點切割，這個特點說明了：

遺傳密碼共同的原始祖先小形環(huán)狀DNA酶具有專一性第2頁/共18頁5.直接分離基因——“鳥槍法”最大的缺點是工作量大，

。6.人工合成基因法①逆轉(zhuǎn)錄法：以信使RNA為模板，在

的作用下將脫氧核苷酸合成合成DNA(基因)。

②直接合成法：根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸順序推算出信使RNA核苷酸順序，再據(jù)此推算出基因DNA的脫氧核苷酸順序。用游離脫氧核苷酸直接合成相應(yīng)的基因。帶有一定的盲目性逆轉(zhuǎn)錄酶第3頁/共18頁7.基因運載體必須具備的條件

8. 基因工程育種與傳統(tǒng)育種技術(shù)相比，具有的優(yōu)點是9.在將質(zhì)粒導(dǎo)入細菌時，一般要用

處理細菌，以增大細菌細胞壁的通透性。10.培育轉(zhuǎn)基因動物，受體細胞一般選用

。

a.能夠在宿主細胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定的保存b.據(jù)多個限制酶切點，以便與外源基因連接c.具有標記基因，便于進行篩選育種周期短，目的性強，能克服遠緣雜交不親和障礙等。氯化鈣受精卵第4頁/共18頁

“基因剪刀”

“基因針線”

“基因的運載體”基因工程最基本的工具目的基因第5頁/共18頁基因操作的工具1.基因的“剪刀”──限制性內(nèi)切酶（限制酶）一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并在特定的切割點上將DNA分子切斷。專一性第6頁/共18頁限制性內(nèi)切酶限制酶第7頁/共18頁２、基因的針線──DNA連接酶▲作用部位：磷酸二酯鍵▲作用：將互補配對的兩個黏性末端連接起來▲作用對象：DNA片段類別限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA片段脫氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵氫鍵作用結(jié)果形成黏性末端或平末端形成重組DNA分子形成新的DNA分子分解成兩條單鏈DNA分子

第8頁/共18頁3、基因的運輸工具——載體常用運載體受體細胞種類來源質(zhì)粒細菌細菌、動植物細胞等病毒細菌病毒（噬菌體）細菌等植物病毒植物細胞動物病毒動物細胞▲作為載體必須具備的條件：1）能夠在宿主細胞中復(fù)制并穩(wěn)定地保存。2）具多個限制酶切點，以便與外源基因連接。3）具有某些標記基因，便于進行篩選。第9頁/共18頁提取目的基因目的基因與運載體結(jié)合目的基因?qū)胧荏w細胞目的基因的檢測和表達基因工程基本操作步驟第10頁/共18頁●檢測目的基因是否表達：分子水平：受體細胞是否產(chǎn)生特定的蛋白質(zhì)個體水平：受體細胞是否表現(xiàn)出特定的性狀

5、目的基因的表達目的基因的檢測類型檢測內(nèi)容方法分子檢測導(dǎo)入檢測目的基因是否進入受體細胞DNA分子雜交(DNA和DNA之間)轉(zhuǎn)錄檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA分子雜交(DNA和mRNA之間)翻譯檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原—抗體雜交個體水平檢測包括做抗蟲、抗病的接種實驗，如飼喂法、感染法等第11頁/共18頁（

第一步水解產(chǎn)物（單位bp）第二步水解產(chǎn)物（單位bp）A酶切割2100將第一步水解分離后，分別用B酶切割1900200140080060010001000500500B酶切割2500將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用A酶切割1900600130080050012001000200經(jīng)A酶和B酶同時切割19001000800600500200第12頁/共18頁第13頁/共18頁

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基因工程（1）2.（6） 重組質(zhì)粒、質(zhì)粒核區(qū)（大型環(huán)狀）DNA第15頁/共18頁

基因工程（2）1.（1）對照（單一變量）