動(dòng)物蛋白質(zhì)的胃蛋白酶消化率(體外消化)

僅供個(gè)人學(xué)習(xí)參考僅供個(gè)人學(xué)習(xí)參考僅供個(gè)人學(xué)習(xí)參考僅供個(gè)人學(xué)習(xí)參考動(dòng)物蛋白質(zhì)的胃蛋白酶消化率（體外消化）一、適用范圍：本方法適用于動(dòng)物性原料品質(zhì)的判定。二、原理：用脫脂的樣本在一個(gè)熱的胃蛋白酶溶液中，穩(wěn)定地不斷攪拌約16小時(shí)，予以消化。測(cè)定它的蛋白質(zhì)含量。這種方法不能用于植物蛋白質(zhì)飼料原料或混合飼料，因?yàn)?，它們所含?fù)雜的碳水化合物是不能被胃蛋白酶消化的。將溶解了的蛋白質(zhì)全部作為可消化的，并用其對(duì)粗蛋白質(zhì)的百分率來(lái)表示。三、設(shè)備：1、恒溫水浴振蕩器：45±2℃o2、測(cè)定粗蛋白質(zhì)的全套設(shè)備。3、過(guò)濾裝置。4、索氏脂肪浸提器。四、試劑：除測(cè)定粗蛋白質(zhì)用的試劑外，尚需以下試劑：1、0.2%胃蛋白酶溶液的配制：先稀釋6.1ml鹽酸到1L。在使用前，現(xiàn)配0.2%胃蛋白酶溶液。2、所有胃蛋白酶應(yīng)具有1：3000的活性。3、加熱稀鹽酸至42—45℃,然后加入胃蛋白酶2g,輕輕地?cái)噭?dòng)，使其溶解（此時(shí)不要加熱?。?。即得在0.75mol/L鹽酸中的0.2%胃蛋白酶溶液。五、測(cè)定步驟：1、準(zhǔn)確稱取1g脫脂試樣，放入300ml碘量瓶?jī)?nèi)，加入經(jīng)過(guò)預(yù)熱（42—45C）的0.2%胃蛋白酶溶液150ml,蓋好塞子，在45℃下邊攪拌邊消化16小時(shí)，消化后用濾紙過(guò)濾，然后用溫水洗凈濾紙上的不消化物。將不消化物連同濾紙轉(zhuǎn)入消化管中，按照測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量的方法，測(cè)定不消化物中的粗蛋白質(zhì)含量。2、另取1份脫脂分析試樣，按照測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量的方法，測(cè)定其粗蛋白質(zhì)含量。然后，根據(jù)消化的和不消化的粗蛋白質(zhì)含量計(jì)算出試樣的胃蛋白酶消化率。六、測(cè)定結(jié)果計(jì)算與分析：1、計(jì)算：A-B動(dòng)物蛋白質(zhì)胃蛋白酶消化率（%）二※以A式中：A一試樣中粗蛋白質(zhì)的含量（%）oB一試樣中的不消化物粗蛋白質(zhì)的含量（%）。2、分析：合格的魚粉，其粗蛋白質(zhì)的胃蛋白酶消化率應(yīng)不小于85樂(lè)羽毛粉應(yīng)在75%以上。植物油脂檢驗(yàn)不皂化物測(cè)定法GB5535-85本標(biāo)準(zhǔn)適用于商品植物油不皂化物的測(cè)定。油脂中不皂化物即油脂皂化時(shí)，與堿不起作用的，不溶于水的物質(zhì)，包括留醇，脂溶性維生素的色素等。一、儀器和用具：錐形瓶：250nli冷凝管恒溫水浴鍋電爐分液漏斗：250ml量筒：50ml索氏抽提器電熱恒溫烘箱燒杯、試劑瓶等天平：感量0.001g二、試劑：1.0N氫氧化鉀乙醇溶液0.5N氫氧化鉀水溶液乙醇、乙醛中性乙醛乙醇混合液(2：1)三、操作方法：稱取混勻試樣5g(W)注入錐形瓶中，加1.0NK0H乙醇溶液50ml,連接冷凝管，在水浴鍋上煮沸約30min,煮到溶液清澈透明為止。用50ml蒸僧水將皂化液轉(zhuǎn)移入分液漏斗中，加入50ml乙醛,趨溫?zé)釙r(shí)猛烈搖動(dòng)lmin后，靜止分層。將下層皂化液放入第二只分液漏斗中，每次用50ml乙醛提取兩次。合并乙酸提取液，加水20nli輕輕旋搖，待分層后，放出水層，每次再加水20ml猛烈振搖洗滌兩次。先后用0.5NK0H水溶液和水各20ml,充分振搖洗滌一次，如此再洗滌兩次。最后用水洗至加酚醐指示劑時(shí)不顯紅色為止。用索氏抽提器回收乙醛，將抽提瓶中的殘留物在105c溫度下烘lh,冷卻稱重，再烘30min,直至恒重為止。將兒重后的殘留物溶于30ml中性乙醛乙醇中，用0.02N氫氧化鉀滴定至粉紅色。四、結(jié)果計(jì)算：油脂中不皂化物含量按下列公式計(jì)算：丁占八函100(Wl°?28VW)不皂化物(%)=——-式中：W1——?dú)埩粑镏亓?，gW試樣重量，gV一一滴定所消耗的氫氧化鉀溶液體積，mlN一一氫氧化鉀溶液的當(dāng)量濃度0.28一一每毫克當(dāng)量的油酸重量，g雙試驗(yàn)結(jié)果允許差不超過(guò)0.2樂(lè)求其平均數(shù)，即為測(cè)定結(jié)果。測(cè)定結(jié)果取小數(shù)點(diǎn)后第一位。過(guò)氧化值的測(cè)定一、適用范圍：本方法適用于油脂及動(dòng)物性原料的測(cè)定。二、原理：油脂氧化過(guò)程中，產(chǎn)生的過(guò)氧化物，與碘化鉀作用，生成游離碘；以硫代硫酸鈉溶液滴定，計(jì)算含量。三、試劑：1、飽和碘化鉀溶液：稱取14g碘化鉀，加10ml水溶解，必要時(shí)微熱加速溶解，冷卻后貯于棕色瓶中?，F(xiàn)用現(xiàn)配。2、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加601nl冰乙酸，混勻。3、0.02mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取5g硫代硫酸鈉(N^SQ-5HQ)(或3g無(wú)水硫代硫酸鈉)，溶于1000ml水中，緩緩煮沸10分鐘，冷卻。放置兩周后過(guò)濾備用。4、現(xiàn)淀粉指示劑：稱取可溶性淀粉0.5g,加入少許水調(diào)成糊狀倒入50nli沸水中調(diào)勻，煮沸,現(xiàn)用現(xiàn)配。四、測(cè)定步驟：精確稱取2—3g混勻的樣品，置于250nli碘量瓶中，加30ml三氯甲烷冰乙酸混合液，使樣品完全溶解；加入1.00ml飽和碘化鉀溶液。緊密塞好瓶塞，并輕輕振搖0.5min,然后在暗處放置5min,取出加75ml水，搖勻。立即用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，至淡黃色時(shí)，加1ml淀粉指示劑,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失為終點(diǎn)。同時(shí)作空白試驗(yàn)。五、測(cè)定結(jié)果的計(jì)算與分析：1、計(jì)算：X=[(V-VO)XNXO.1269]/m式中：X一樣品的過(guò)氧化值，%ov一樣品消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，mloV。一空白消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，mloN一硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的麾爾濃度，mol/Lo0.1269-1N硫代硫酸鈉1ml相當(dāng)于碘的克數(shù)。2、分析：油脂新鮮，其過(guò)氧化值不應(yīng)大于0.15機(jī)附：0.02mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定1、標(biāo)定：精確稱取0.15g于120℃烘3小時(shí)至恒重的基準(zhǔn)重銘酸鉀，置于碘量瓶中，溶于25nli水，加2g碘化鉀及201nl硫酸溶液(20%),搖勻，于喑處放置lOmin。加1501n水，用配制好的硫代硫酸鈉溶液滴定。近終點(diǎn)時(shí)加3nli淀粉指示液(5g/L),繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色變?yōu)榱辆G色。同時(shí)作空白試驗(yàn)。2、計(jì)算：C=(Vi-Vo)x0.04903式中：C一硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之物質(zhì)的量濃度，mol/Lom-重銘酸鉀之質(zhì)量，go匕一硫代硫酸鈉溶液之用量，mloV。一空白試驗(yàn)硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之用量，ml。_0.04903—與1.00ml硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液【C=LOmol/L】相當(dāng)?shù)囊钥吮聿坏闹剌`酸鉀的質(zhì)量。揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定(VBN)(半微量定氮法)一、原理：揮發(fā)性鹽基氮是指動(dòng)物性食品由于酶和細(xì)菌的作用，在腐敗過(guò)程中，使蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生氨以及胺類等堿性含氮物質(zhì)。此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，在堿性溶液中蒸出后，用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定計(jì)算含量。二、試劑：氧化鎂混懸液(10g/L)：稱取1.0g氧化鎂，加100ml水，振搖成混懸液。硼酸吸收液(20g/L)鹽酸［c(HC1)=0.OlOmol/L］或硫酸［c(1/2H2s01=0.010mol/L］的標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液。甲基紅一乙醇指示劑(2g/L)次甲基藍(lán)指示劑(lg/L)臨時(shí)將上述兩種指示液等量混合為混合指示劑。三、儀器：半微量定氮器微量滴定管：最小分度0.01ml四、分析步驟：試樣處理：將試樣除去脂肪、骨及腱后，絞碎攪勻，稱取約10.0g,置于錐形瓶中，加100ml水，不時(shí)振搖，浸漬30nlin后過(guò)濾，濾液幟置冰箱備用。蒸飾滴定：將盛有10ml吸收液及5滴?6滴混合指示液的錐形瓶置于冷凝管的下端，并使其下端插入吸收液的液面下，準(zhǔn)確吸取5.0ml上述試樣濾液于蒸儲(chǔ)器反應(yīng)室內(nèi)，加5ml氧化鎂混懸液(10g/L),迅速蓋塞，并加水以防漏氣，通入蒸汽，進(jìn)行蒸鐲，蒸譚5min即停止，吸收液用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(0.010mol/L)或硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，終點(diǎn)至藍(lán)紫色。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。五、計(jì)算結(jié)果：試樣中揮發(fā)性鹽基氮的含量按式⑴進(jìn)行計(jì)算。x_x_(Vi-V2)xcx14

wx5/100xl00式中：X一一試樣中揮發(fā)性鹽基氮的含量，單位為毫克每百克(mg/100g)VI一一測(cè)定用樣液消耗鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，單位為毫升(ml)物一一試劑空白消耗鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，單位為毫升(ml)c一一鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的實(shí)際濃度，單位為摩爾每升(mol/L)14——與1.00ml鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液［c(HCI)=1.000niol/L］或硫標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液［c(1/2H2S04)=1.000mol/L］相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，單位為毫克(mg)m試樣質(zhì)量，單位為克(g)計(jì)算結(jié)果保留三們有效數(shù)字。六、精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%o三甲胺的測(cè)定一、原理：試樣中總的含氮量減去載體及水溶氮的含氮量，再除以系數(shù)10.03即為氯化膽堿的含量。二、儀器與試劑：同粗蛋白質(zhì)的測(cè)定。三、測(cè)定步驟：1、精確稱取0.45g左右樣品測(cè)其含氮量，即為總氮N總。2、精確稱取1g左右樣品，放入帶有定性濾紙的漏斗中，用蒸儲(chǔ)水沖洗10次左右，取出濾紙及殘留物烘干，以凱氏定氮法測(cè)定含氮量，即為載體含氮量NI。3、精確稱取3g左右樣品，用蒸馀水溶解，定容100ml,放置0.5小時(shí)后，取上清液51nl進(jìn)行蒸飾，測(cè)其含氮量，即為水溶氮。四、測(cè)定結(jié)果的計(jì)算與分析：1、計(jì)算：N總一N「N「氮化膽堿含量尤10.03三甲胺的含量%=水浴炎I的含后X39142、允許差：兩次平行測(cè)定結(jié)果絕對(duì)值不大于1%,取其算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。烏洛托品鑒別（六次甲基四胺）一、試劑和材料：氫氧化鉀；硫酸溶液：6+100；鈉氏試劑；氨制硝酸銀溶液：稱取1.0g硝酸銀，置于100ml燒杯中，加20ml水溶解，在不斷攪拌的同時(shí)滴定氨水溶液，至棕色沉淀幾乎全部溶解后，過(guò)濾，濾液置于棕色試劑瓶中保存；紅色石蕊試紙：變色范圍pH4.5?8.0（紅一藍(lán)）；二、鑒別方法：水劑樣品，稱取約0.5g實(shí)驗(yàn)室樣品，加10ml水，為試驗(yàn)溶液。粉劑樣品，稱取約2g實(shí)驗(yàn)室樣品，加20nli水溶解，過(guò)濾，棄去濾渣，為試驗(yàn)溶液。在試驗(yàn)溶液中，加10ml硫酸溶液，于電爐上加熱、煮沸，用沾有氨制硝酸銀溶液或鈉氏試劑的試紙檢驗(yàn)產(chǎn)生的蒸汽，觀察試紙顏色，若試紙顏色變黑，則加入2g氫氧化鉀，繼續(xù)加熱產(chǎn)生的蒸汽能使?jié)櫇竦募t色石蕊試紙變藍(lán)，證明有甲醛和氨產(chǎn)生，判定樣品中含有六次甲基四胺。油脂TBA值的測(cè)定方法一、原理：油脂受到光、熱、空氣中氧的作用，發(fā)生酸敗反應(yīng)，分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種，它能與TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉紅色化合物，在538nm波長(zhǎng)處有吸收高峰，利用此性質(zhì)即能測(cè)出丙二醛含量，從而推導(dǎo)出油脂酸敗的程度。二、試劑：TBA水溶液：準(zhǔn)確稱取TBAO.288g溶于水中，并稀釋至100ml（如TBA不易溶解，可加熱至全溶澄清，然后稀釋至100ml）,相當(dāng)于0.02M；三氯乙酸混合液：準(zhǔn)確稱取三氯乙酸（分析純）7.5g及0.IgEDTA,用水溶解，稀釋至100ml；氯仿（分析純）；丙二醛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.315gl,1,3,3-四乙氧基丙烷，溶解后稀釋至1000ml,此溶液每ml相當(dāng)于丙二醛100ug,置于冰箱內(nèi)保存。準(zhǔn)確吸取10ml,稀釋至100ml,此溶液每ml相當(dāng)于丙二醛10ug,備用。三、操作步驟：⑴標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取每相當(dāng)于丙二醛10ug的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于納氏比色管中，加水至總體積為5ml,加入5mlTBA溶液，然后按樣品測(cè)定步驟進(jìn)行，測(cè)得光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。⑵樣品測(cè)定：準(zhǔn)確稱取融化均勻的油脂樣品5T0g,置于100ml有蓋三角瓶?jī)?nèi)，加入251nl三氯乙酸混合液,振搖半小時(shí)（保持油脂融溶狀態(tài)，如冷結(jié)即在70℃水浴上略微加熱使之融化后繼續(xù)振搖）用雙層濾紙過(guò)濾，除去油脂。濾液重復(fù)用雙層濾紙過(guò)濾一次。準(zhǔn)確移取上述濾液5ml置于25nli比色管內(nèi)，加入5mlTBA溶液，混勻，加塞，置于90℃水浴內(nèi)保溫40min,取出，冷卻lh,移入小試管內(nèi)，離心5min,上清液傾入251nl納氏比色管中，加入5ml氯仿，搖勻，靜置，分層，吸出上清液于532nm波長(zhǎng)比色，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到微克數(shù)（同時(shí)做空白試驗(yàn)）。四、計(jì)算丙二醛含量（mg/kg）=5x〃7式中：C一一從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得丙二醛的微克數(shù)（ug）m——樣品質(zhì)量（g）光密度：TBA（A532/kg）二生小匕上空x1000mVi式中：V一一油脂用三氯乙酸定容體積，mlV、一一取濾液體積，mlV:——加TBA體積，ml飼料中粗脂肪的測(cè)定一、適用范圍：本方法適用于各種單一、混合、配合飼料和預(yù)混料。二、原理：索氏脂肪提取器中用乙醛提取風(fēng)干試樣中的脂肪，計(jì)算樣品的失重。其中失重除脂肪外，還有有機(jī)酸、磷脂、脂溶性維生素、葉綠素等，因而測(cè)定結(jié)果稱粗脂肪或乙醛提取物。三、儀器設(shè)備：1、實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。2、分析篩：孔徑0.45mm（40目）。3、分析天平：感量0.0001g。4、電熱恒溫水浴鍋：室溫一100℃。5、干燥箱：50℃—200℃o6、索氏脂肪提取器（帶球形冷凝器）：100或150ml。7、濾紙：中速、脫脂。8、干燥器：用變色硅膠為干燥劑。9、棉線繩。四、試劑：無(wú)水乙醛（分析純）。五、試樣的選取和制備：取具有代表性試樣，用四分法縮減至50g,粉碎至40目。六、測(cè)定步驟：1、將棉線繩剪成適當(dāng)大小置于無(wú)水乙醛中浸泡24小時(shí)（注意密閉、防火）后取出，曬干備用。將濾紙置于105C干燥箱中干燥2小時(shí)，取出稱其恒重。2、將待測(cè)試樣粉碎過(guò)40目后，取適量于135c干燥箱內(nèi)干燥40分鐘，制成風(fēng)干樣品。3、用分析天平精確稱取2.5g風(fēng)干試樣，置于預(yù)先標(biāo)號(hào)恒重的濾紙中包好，并用處理好的棉線繩系好。4、濾紙包放于抽提管內(nèi)，在抽提瓶中加入60—100ml無(wú)水乙酸，在40—45C的水浴中加熱，使乙醛回流。待3小時(shí)左右（油高的5小時(shí)）用濾紙檢查抽提管流出的乙醛，揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點(diǎn)。5、取出試樣后，置于恒重的鋁盒內(nèi)，于135℃干燥箱內(nèi)，恒重40分鐘，并將棉線剪去，置于干燥器中冷卻30分鐘后，稱重。七、測(cè)定結(jié)果的計(jì)算和表達(dá)：1、風(fēng)干樣中粗脂肪含量：Mo-（M3-M2-M1）EE%=X100同其中：M。為風(fēng)干試樣重，goMi為濾紙恒重，goM二為鋁盒恒重，goM3為烘后鋁盒+濾紙包重，go2、原樣中粗脂肪含量：EE%=（1-原樣中水份含量）X風(fēng)干樣中粗脂肪含量3、重復(fù)性：每個(gè)試樣取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。粗脂肪含量在10%以上（含10%）允許相對(duì)偏差為3%；粗脂肪含量在10%以下時(shí)，允許相對(duì)偏差為5%o油脂酸敗試驗(yàn)（間苯三酚試紙法）一、儀器和用具：恒溫水浴鍋電爐錐形瓶：50ml,插有5cm長(zhǎng)玻璃管的膠塞移液管、棕色瓶等二、試劑：間苯三酚試紙：取長(zhǎng)7cm、寬4cm的濾紙條，浸入0.1%間苯三酚-乙醇溶液中，浸泡約3min后取出，陰干，裝入棕色瓶中備用。直徑約2mm的大理石顆粒或碳酸鈣。鹽酸3、操作方法：取間苯三酚試紙條安置在錐形瓶膠塞的玻璃管內(nèi)，再取試樣5ml注入錐形瓶中，加鹽酸5ml,搖勻，立即加入大理石5?6粒，塞緊膠塞，在約25c的水浴中放置20min。試紙變紅為陽(yáng)性，表示有醛類存在，試樣已發(fā)生酸??；試紙呈黃色或橙色時(shí)為陰性。玉米脂肪酸值的測(cè)定一、原理：在室溫下用無(wú)水乙醇提取玉米中的脂肪酸，用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鉀溶液滴定，計(jì)算脂肪酸值。二、試劑和材料：除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?、無(wú)水乙醇2、酚酸-乙醇溶液(10g/L)：1.0g酚醐溶于100ml95%(V/V)乙醇。3、c(KOH)=0.01mol/L氫氧化鉀-95%乙醇標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(KOH)=0.5mol/L氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制：稱取28g氫氧化鉀，置于聚乙烯容器中，先加入少量無(wú)C02的蒸儲(chǔ)水(約20ml)溶解，再將其稀釋至1000ml,密閉放置24h。吸取上層清液至另一聚乙烯塑料瓶中。c(KOH)=0.5mol/L氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的標(biāo)定精確稱取在105c烘2h并在干燥器中冷卻后的鄰苯二甲酸氫鉀2.04g,溶于50ml不含C02蒸鐲水中，滴加酚酸-乙醇指示劑3?5滴，用配制的氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液滴定至微紅色，以30s不褪色為終點(diǎn)，記下所耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液ml數(shù)(VI),同時(shí)做空白試驗(yàn)(不加鄰苯二甲酸氫鉀，同上操作)，記下所耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液ml數(shù)，(VO)o按下式計(jì)算氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度。C(KOH)1000C(KOH)1000x/w

(Vi-Vo)x2O4.22式中：c(KOH)一一氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度，mol/L1000一一換算系數(shù)m一一稱取鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量，gVI一一滴定所耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液體積，mlV0一一空白試驗(yàn)所耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液體積，ml204.22一—鄰苯二甲酸氫鉀的摩爾質(zhì)量，g/mol注：氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液按要求定時(shí)復(fù)標(biāo)4、c(KOH)=0.01mol/L氫氧化鉀-95%乙醇標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液準(zhǔn)確移以20.0ml己經(jīng)標(biāo)定好的0.5mol/L氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用95%(V/V)乙醇稀釋定容至1000ml,盛放于聚乙烯塑料瓶中，臨用前稀釋。三、儀器與設(shè)備：具塞磨口錐形瓶：250ml移液管：50.0ml、25.0ml微量滴定管：5ml,最小刻度為0.02ml；10ml,最小刻度為0.05ml天平：感量為0.01g振蕩器：往返式，振蕩頻率為100次/min四、分析步驟：1、試樣處理：稱取約10g試樣，精確到0.01g,于250ml具塞磨口錐形瓶中，并用移液管準(zhǔn)確加入50.0ml無(wú)水乙醇，置往返式振蕩器上振蕩lOmin,頻率為100次/min。靜置1?2min,在玻璃漏斗中放入折疊濾紙過(guò)濾，并加蓋濾紙。棄去最初幾滴濾液，收集濾液25nli以上。2、測(cè)定：精確稱取25.0ml濾液于1501nl錐形瓶中，加50ml不含C02的蒸儲(chǔ)水，滴加3?4滴酚醐-乙醇指示劑后，用O.Olmol/L的氫氧化鉀-95%乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至呈微紅色，30s不消褪為止。記下耗用的氫氧化鉀-95%乙醇溶液體積(VI)注：樣品提取后一定要及時(shí)滴定，滴定應(yīng)在散射日光或日光燈下對(duì)著光源方向進(jìn)行，滴定終點(diǎn)不易判定時(shí)，可用己加去C02蒸馀水后尚未滴定的提取液作參照，當(dāng)被滴定液顏色與參照相比有色差時(shí)，即可視為己到滴定終點(diǎn)。3、空白試驗(yàn)：取25.0ml無(wú)水乙醇于150ml錐形瓶中，加50ml不含C02的蒸儲(chǔ)水，滴加3?4滴酚儆-乙醇指示劑，用O.Olmol/L的氫氧化鉀-95%乙醇溶液滴定至呈微紅色，30s不消褪為止。記下耗用的氫氧化鉀-95%乙醇溶液體積(V0)五、結(jié)果計(jì)算：口匕mH、11220x(Vi-Vo)c、/100月旨肪酸值(KOHmg/lOOg)=—Xm100-w式中：VI一一滴定試樣所耗氫氧化鉀-95%乙醇溶液體積，mlV0一一滴定空白所耗氫氧化鉀-95%乙醇溶液體積，mlc一一氫氧化鉀-95%乙醇溶液的準(zhǔn)確濃度，mol/L50一一提取試樣用無(wú)水乙醇的體積，ml25一一用于滴定的濾液的體積，ml100換算為100g(干)試樣的質(zhì)量，gm試樣的質(zhì)量，gw一一試樣水分百分?jǐn)?shù)，即每100g試樣中含水分的質(zhì)量，g六、結(jié)果表示：每份試樣取兩個(gè)平等樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后一位數(shù)。七、重復(fù)性：同一分析者對(duì)同一試樣同時(shí)進(jìn)行兩次測(cè)定，結(jié)果差值不超過(guò)2mgK0H/100go僅供個(gè)人學(xué)習(xí)參考僅供個(gè)人學(xué)習(xí)參考氟的測(cè)定離子選擇性電極法.原理：氟離子選擇電極的氟化錮單晶膜對(duì)氟離子產(chǎn)生選擇性的對(duì)數(shù)響應(yīng)，氟電極和飽和甘汞電極在被測(cè)試液中，電位差可隨溶液中氟離子的活度的變化而改變，電位變化規(guī)律符合能斯特方程式(E=Eo-2.303RT(E=Eo-2.303RTlgcP)E與Ige?呈線性關(guān)系。2.303RT/F為該直線的斜率（25℃時(shí)為59.16）。在水溶液中，易與氟離子形成絡(luò)合物的三價(jià)鐵（FeD、三價(jià)鋁（A1*）及硅酸根（SiCVD等離子干擾氟離子測(cè)定，其他常見離子對(duì)氟離子測(cè)定無(wú)影響。在測(cè)量溶液的酸度為pH5?6,用總離子強(qiáng)度緩沖液消除干擾離子及酸度的影響。.試劑和溶液試劑均為分析純；實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合GB/T6682中三級(jí)用水的規(guī)格；全部溶液貯于聚乙烯塑料瓶中。⑴c（CH3COONa?3H：O）=3mol/L乙酸鈉溶液稱取204g乙酸鈉（CH3COONa?3H：O）,溶于約300ml水中，待溶液溫度恢復(fù)到室溫后，以lmol/L乙酸（GB/T676）調(diào)節(jié)至pH7.0,移入500nli容量瓶，加水至刻度。⑵c（NasCAO/PZHS）=0.75mol/L檸檬酸鈉溶液稱取110g檸檬酸鈉（Na3C6H5O7?2H:O）,溶于約300ml水中,加高氯酸（HC1O.）14ml,移入500ml容量瓶，加水至刻度。⑶總離子強(qiáng)度緩沖液乙酸鈉溶液（1）與檸檬酸鈉溶液（2）等量混合，臨用時(shí)配制。⑷c（HC1）=lmol/L鹽酸溶液量取10ml鹽酸（GB/T622）,加水稀釋至120ml。⑸氟標(biāo)準(zhǔn)溶液氟標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取經(jīng)100C干燥4h冷卻的氟化鈉（GB/T1264）0.2210g,溶于水，移入100ml容量瓶中，加水至刻度，混勻，貯備于塑料瓶中，置冰箱內(nèi)保存，此液每毫升相當(dāng)于l.Omg氟。氟標(biāo)準(zhǔn)溶液：臨用時(shí)準(zhǔn)確吸取氟貯備液10.00ml于100ml容量瓶中，加水至刻度，混勻。此液每毫升相當(dāng)于100.Oug氟。氟標(biāo)準(zhǔn)稀溶液：準(zhǔn)確吸取氟標(biāo)準(zhǔn)溶液10.00ml于100ml容量瓶中，加水至刻度，混勻，此液每毫升相當(dāng)于lO.Oug氟。即配即用。.儀器、設(shè)備氟離子選擇電極：測(cè)量范圍10Tmol/L?5X10%ol/L,pF-1型或與之相當(dāng)?shù)碾姌O。甘汞電極：232型或與之相當(dāng)?shù)碾姌O。磁力攪拌器。酸度計(jì)：測(cè)量范圍0.0?T400mV,pHS-3型或與之相當(dāng)?shù)乃岫扔?jì)或電位計(jì)。僅供個(gè)人學(xué)習(xí)參考分析天平：感量0.0001g。納氏比色管：50mlo容量瓶:50,100mlo超聲波提取器。.試樣制備取具有代表性的樣品2kg,以四分法縮分至約250g,粉碎，過(guò)0.42mm孔篩，混勻，裝入樣品瓶，密閉保存，備用。.分析步驟⑴氟標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備吸取氟標(biāo)準(zhǔn)稀溶液0.50、1.00、2.00、5.00、10.00ml,再吸取氟標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00、5.00ml,分別置于50ml容量瓶中，于各容量瓶中分別加入鹽酸溶液5.00ml,總離子強(qiáng)度緩沖液25ml,加水置刻度,混勻。上述標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度分別為0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、10.Oug/mlo⑵試液制備a、飼料試液制備（除飼料級(jí)磷酸鹽外）精確稱取約含2000ug氟的試樣（精確至0.0002g）,置于50ml納氏比色管中，加入鹽酸溶液5.0ml,密閉提取lh（不時(shí)輕輕搖動(dòng)比色管），應(yīng)盡量避免樣品粘于管壁上，或置于超聲波提取器中密閉提取20min。提取后加總離子強(qiáng)度緩沖液25ml,加水置刻度，混勻，干過(guò)濾。濾液供測(cè)定用。b、磷酸鹽試液制備準(zhǔn)確稱取0.5?1g試樣（精確至0.0002g）置于100ml容量瓶中，用鹽酸溶液溶解并定容至刻度，混勻。取5.00ml溶解液至50ml容量瓶中，加入25nli總離子強(qiáng)度緩沖液，加水至刻度，混勻。供測(cè)定用。⑶測(cè)定將氟電極和甘汞電極與測(cè)定儀器的負(fù)端和正端聯(lián)接,將電極插入盛有水的50ml聚乙烯塑料燒杯中,并預(yù)熱儀器，在磁力攪拌器上以恒速攪拌，讀取平衡電位值，更換2?3次水，待電位值平衡后，即可進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)液和試樣液的電位測(cè)定。由低到高濃度分別測(cè)定氟標(biāo)準(zhǔn)工作液的平衡電位。同法測(cè)定試液的平衡電位。以平衡電位為縱坐標(biāo)，氟標(biāo)準(zhǔn)工作液的氟離子濃度為橫坐標(biāo)，用回歸方程計(jì)算或半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。每次測(cè)定均應(yīng)同時(shí)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取試液的氟離子濃度。.分析結(jié)果計(jì)算和表述⑴飼料中氟含量計(jì)算飼料（除飼料添加劑級(jí)磷酸鹽外）按式①計(jì)算出試樣中氟的含量：x=px50xl000=Px500/77X1OOO777式中：X試樣中氟的含量，mg/kg；P試樣中氟的濃度，ug/ml；m試樣質(zhì)量，g;50一一測(cè)試液體積，mlo磷酸鹽按式②計(jì)算出試樣中氟的含量：X二上迎幽xW2=gxl000②//ixIOOO5m⑵結(jié)果表示每個(gè)試樣取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果，結(jié)果表示到0.1mg/kg。.允許差同一分析者對(duì)同一飼料同時(shí)或快速連續(xù)地進(jìn)行兩次測(cè)定，所得結(jié)果之間的相對(duì)偏差:在試樣中氟含量小于或等于50mg/kg時(shí)，不超過(guò)10%；在試樣中氨含量大于50mg/kg時(shí)，不超過(guò)5%o飼料酸結(jié)合力的測(cè)定方法儀器設(shè)備：酸度計(jì)，恒溫磁力攪拌器，溫度計(jì)，微型植物試樣粉碎機(jī)，恒溫水浴鍋，250ml與1000ml容量瓶，酸式滴定管，250nli燒杯，分樣篩，鐵架臺(tái)，玻棒。試劑：l.OOmol/L的鹽酸：取80ml濃度為36%?37%的濃鹽酸，用1000ml容量瓶進(jìn)行定容，再用硼砂進(jìn)行滴定，滴加鹽酸或NaOH校準(zhǔn)濃度。標(biāo)準(zhǔn)緩沖劑：pH4.00(25℃)與pH6.86(25℃)兩種。飼料樣品：采取一定數(shù)量的玉米、豆粕、小麥、菜粕、棉粕、次粉、小麥熬、魚粉、磷酸氫鈣、石粉、乳清粉、酸化劑、玉米蛋白粉、肉粉等飼料樣品，粉碎并通過(guò)一定規(guī)格的分樣篩。測(cè)定方法：粉碎的樣品進(jìn)行篩分(<0,25mm),后用四分法取樣。準(zhǔn)確稱取10.0g于干燥潔凈的250ml的燒杯中，加入90ml的去離子水，在恒溫水浴中加熱，至溫度達(dá)到37c±1℃左右，取下放在磁力攪拌器上，打開攪拌開關(guān)進(jìn)行攪拌，并插入溫度計(jì)控制溫度在37c±1℃內(nèi)。將酸度計(jì)電極插入溶液中，待pH值恒定后記下此數(shù)據(jù)。然后，用標(biāo)準(zhǔn)LOOmol/LHCL逐步進(jìn)行滴定，每次滴1ml,滴入后至pH值恒定時(shí)記錄數(shù)值。植物油脂檢驗(yàn)皂化值的測(cè)定GB5524一、定義：在規(guī)定條件下皂化1g油脂所需的氫氧化鉀毫克數(shù)為皂化值。二、原理：在回流條件下將樣品和氫氧化鉀-乙醇溶液一起煮沸，隨后用標(biāo)定的鹽酸溶液滴定過(guò)量的氫氧化鉀。三、試劑：所有試劑必須是分析純級(jí)，使用水為蒸馀水或與其相當(dāng)純度的水。1、氫氧化鉀：大約0.5mol/L氫氧化鉀溶解在95%(V/V)乙醇中。此溶液應(yīng)為無(wú)色或淡黃色。通過(guò)下列步驟可制得穩(wěn)定的無(wú)色溶液。將8g氫氧化鉀和5g鋁片入在1L乙醇中回流lh,立刻蒸飾。將需要量的氫氧化鉀溶解于蒸馀物中，靜置數(shù)天，然后傾出清亮的上層清液而除去碳酸鉀沉淀。將此液貯存在配有橡皮塞的棕色或黃色玻璃瓶中備用。2、鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：c(HCI)=0.5mol/L3、酚猷10g/L溶于95%(V/V)乙醇，或堿性藍(lán)6B20g/L溶于95%(V/V)乙醇。4、助沸物：玻璃珠或?qū)捔?。四、儀器：1、錐形瓶：容量250ml,耐堿玻璃制成，帶有磨口。2、回流冷凝管：帶有連接錐形瓶的磨玻璃接頭。3、加熱裝置：如水浴鍋、電熱板或其他適合的儀器，不能用明火加熱。4、滴定管：容量501nL最小刻度為0.1ml。5、移液管：容量25ml。五、步驟：1、稱取2g,準(zhǔn)確到0.005g的試驗(yàn)樣品于錐形瓶中。注：以皂化值170~200為依據(jù)，被測(cè)樣量為2g。對(duì)于其他范圍皂化值，樣量將以約一半氫氧化鉀乙醇溶液被中和為依據(jù)而改變。2、用移液管將25.0ml氫氧化鉀-乙醇溶液加到試樣中，并加入一些助沸物，連接回流冷凝管與錐形瓶，并將錐形瓶放在加熱裝置上慢慢煮沸，不時(shí)搖動(dòng)，油脂維持沸騰狀態(tài)60min。難于皂化的需煮沸2ho加酚酣指示劑于熱溶液于，并用標(biāo)準(zhǔn)體積鹽酸溶液滴定到指示劑的粉色剛消失