骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察

關(guān)于骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察第1頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆罩苽浞椒?，?jì)算分裂中期染色體數(shù)目，觀察端著絲點(diǎn)的形態(tài)特點(diǎn)．實(shí)驗(yàn)原理：小鼠骨髓細(xì)胞中的造血干細(xì)胞，具有高度的分裂能力，可得到較多的細(xì)胞中期的分裂相．第2頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察

實(shí)驗(yàn)用品：材料：小白鼠（2n=42）．用品：顯微鏡、冰箱、恒溫箱、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、注射器、解剖剪、鑷子、移液器、載玻片、燒杯等。藥品：0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)檸檬酸鈉溶液、0.07M氯化鉀溶液、（或0.35%氯化鉀溶液）、蒸餾水、Giemsa原液，甲醇、乙酸等。第3頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察實(shí)驗(yàn)步驟：預(yù)處理取股骨沖洗骨髓離心低滲固定離心滴片染色觀察第4頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察1、取健康小白鼠（約65-90天齡），腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，劑量為4ml/Kg動(dòng)物體重。2、2-3小時(shí)后，用損傷脊椎法處死小白鼠，取出股骨，把肌肉刮凈，剪下，用2%檸蒙酸鈉溶液洗凈血污及殘?jiān)?、剪去關(guān)節(jié)頭，用3-5ml2%檸檬酸鈉溶液沖洗股骨斷面至粉白色，制備了骨髓細(xì)胞懸浮液。第5頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察4、將骨髓細(xì)胞懸液，1000rpm離心10分鐘。5、吸去上清液，加入0.075M氯化鉀溶液5ml，立即將細(xì)胞團(tuán)吹打均勻，置37℃水浴25-30分鐘。6、加入卡諾氏固定液5-6滴，攪拌均勻進(jìn)行預(yù)固定10分。7、再以1000rpm離心10分鐘。第6頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察8、棄上清液，僅留約0.2-0.3ml的細(xì)胞團(tuán)與部分上清液，吹均勻制成細(xì)胞懸浮液涂片觀察。注意：如果細(xì)胞分散的不好，可再按上述方法再固定1-2次，使染色體進(jìn)一步分散。9、取預(yù)先冰凍的載玻片，滴2-3滴細(xì)胞懸浮液于其上，立即吹氣均勻打散、過火、置室溫中自然干燥。第7頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察10、用Giemsa染液,染色15-20分鐘，自來水沖洗，空氣干燥。11、在低倍鏡下觀察中期分裂相細(xì)胞，計(jì)算染色體的數(shù)目，以確定其細(xì)胞2n的染色體數(shù)目。第8頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察繪圖：繪制一個(gè)圖像清晰、形態(tài)典型的小白鼠染色體組形圖。思考：思考實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的事項(xiàng)，積累經(jīng)驗(yàn)。第9頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日骨髓