基因組dna提取的學(xué)習(xí)課件

基因組dna提取的學(xué)習(xí)課件第1頁/共11頁預(yù)備知識核酸是重要的生物大分子之一，脫氧核糖核酸（DNA）是核酸的一種，DNA是絕大多數(shù)生物（除少數(shù)RNA病毒外）記錄、存儲、傳遞遺傳信息的分子。近年來，分子生物學(xué)技術(shù)迅速發(fā)展，在分子遺傳學(xué)研究領(lǐng)域的諸多方面涉及到抽提基因組DNA的方法。DNA的提取是進(jìn)行PCR擴(kuò)增、Southern雜交、限制性片段長度多態(tài)性分析等實驗的基礎(chǔ)。第2頁/共11頁二、實驗原理

使用消化緩沖液使DNA從細(xì)胞內(nèi)釋放出來，65度溫育可以加速DNA溶解，酚——氯仿異戊醇抽提可以將蛋白質(zhì)與DNA分離，冷的異丙醇沉淀DNA，70％的乙醇洗去DNA表面的殘留有機(jī)溶劑。第3頁/共11頁三實驗材料新鮮存活的果蠅或－20℃凍存的果蠅5～10個。

四實驗儀器及用具玻璃棒、燒杯、離心管、量筒、分析天平、水浴鍋、臺式高速離心機(jī)、4℃冰箱、長玻璃吸管、微量加樣器、槍頭、紫外分析儀、瓊脂糖電泳裝置。第4頁/共11頁五、藥品和試劑酚（Tris飽和酚）、氯仿、異戊醇、十二烷基硫酸鈉(SDS)、Tris堿、乙二胺四乙酸（EDTA）、異丙醇。溶液配制：消化緩沖液：含100mM的Nacl，10mMTris.cl（PH8.0）,25mM的EDTA（PH8.0）,0.5％的SDS。TE緩沖液（PH8.0）：含10mMTris.cl（PH8.0）,1mM的EDTA（PH8.0）。電泳緩沖液TAE（50×TAE）：取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/LEDTA(pH8.0)20ml，加蒸餾水至100ml。1×TAE為配制瓊脂糖凝膠及其電泳的應(yīng)用緩沖液。0.8％瓊脂糖凝膠的配制：稱取0.32g瓊脂糖，加入40ml1×TAE，于電爐上加熱至沸騰，待凝膠冷卻至50℃左右（手試微燙），加入3μlGoldViewTW熒光染料，混勻后將膠倒入插好梳子的制膠板上，冷卻后備用。第5頁/共11頁六、實驗步驟

1）取6只麻醉的果蠅（讓乙醚揮發(fā)干凈）放入1.5ml離心管中，加入消化緩沖液30μl，用200μlTip槍頭迅速搗碎。

2）補(bǔ)加消化緩沖液400μl，混勻，置65℃溫浴30分鐘每10分鐘搖蕩一次，以使樣品被充分消化。

3）取出離心管加入400μl酚：氯仿：異戊醇（25：24：1）的混合物，蓋緊管蓋，上下顛倒充分混勻，抽提樣品5min,12000rpm離心5分鐘。

4）小心吸取上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中。加入400μl異丙醇，輕輕混勻3min，此時可見白色線團(tuán)狀物質(zhì)出現(xiàn)。第6頁/共11頁5）14000rpm離心10分鐘，讓線團(tuán)狀物質(zhì)沉到管底或管壁，小心倒出液體。6）用400μl70％的乙醇洗滌沉淀，12000rpm離心5min,倒掉乙醇，倒置晾干至乙醇味道消失，沉淀用50μlTE緩沖液溶解。7）取5-8μlDNA溶液,與2μl上樣buffer混合,然后上樣于0.7％的瓊脂糖凝膠上，120伏電壓下電泳30min。8）將瓊脂糖凝膠置于紫外分析儀中觀察DNA條帶的綠色熒光。第7頁/共11頁注意事項：A

實驗前將部分藥品（酚、氯仿、異戊醇、異丙醇）4℃預(yù)冷。

B

消化液要預(yù)熱,以抑制DNase,加速蛋白變性,促進(jìn)

DNA溶解

C

避免在操作過程中機(jī)械振動過于劇烈，以免造成DNA的斷裂。D

使用離心機(jī)要注意安全，先定時，再將轉(zhuǎn)速從零慢慢增大。E

乙醇洗滌DNA后一定要晾干，否則電泳點樣時樣品容易上漂。第8頁/共11頁基因組DNA的提取圖片第9頁/共11頁實驗報告要求：1