革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗詳解演示文稿

革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗詳解演示文稿當前1頁，總共141頁。優(yōu)選革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗當前2頁，總共141頁。目錄一、腸桿菌科二、弧菌科三、非發(fā)酵革蘭陰性桿菌四、其他革蘭陰性苛養(yǎng)菌當前3頁，總共141頁。腸桿菌科當前4頁，總共141頁。第一節(jié)概述當前5頁，總共141頁。腸桿菌科（Enterobacteriaceae）細菌是一大群形態(tài)、生物學性狀相似，需氧或兼性厭氧的革蘭陰性桿菌或球桿菌在自然界中廣泛分布，可棲生在人和動物的腸道內(nèi)，多數(shù)為條件致病菌，少數(shù)為致病菌致病菌：沙門菌、志賀菌、耶爾森菌等條件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸櫞酸桿菌、腸桿屬菌、沙雷菌、變形桿菌等與醫(yī)學的關系分類當前6頁，總共141頁。1）形態(tài)與染色革蘭陰性桿狀或球桿狀細菌，無芽孢，多數(shù)有鞭毛，能運動，少數(shù)細菌有莢膜或包膜，有致病性的菌株多數(shù)有菌毛共同特性當前7頁，總共141頁。2）培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基如血瓊脂和麥康凱培養(yǎng)基上容易生長，大部分菌屬在22~35℃生長良好大腸埃希菌菌落特征（血平板）大腸埃希菌菌落特征（MAC）當前8頁，總共141頁。SS培養(yǎng)基（沙門志賀培養(yǎng)基）乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠等抑制劑強選擇培養(yǎng)基大腸埃希菌產(chǎn)酸桃紅色乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌無色乳糖不發(fā)酵菌落膽鹽、煌綠：抑制大腸埃希菌及G+菌，提高腸道致病菌檢出率乳糖發(fā)酵中性紅呈紅色乳糖不發(fā)酵當前9頁，總共141頁。EMB（伊紅美藍培養(yǎng)基），乳糖、伊紅、美蘭弱選擇培養(yǎng)基大腸埃希菌（非致病菌）乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸伊紅結合美藍形成紫黑色金屬光澤化合物有色的乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌等（致病菌）乳糖不發(fā)酵伊紅美藍不能結合無色的乳糖不發(fā)酵菌落當前10頁，總共141頁。3)生化反應

非?；顫?。發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）、觸酶陽性、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陽性4）抗原結構：O抗原菌體抗原H抗原菌毛抗原表面抗原當前11頁，總共141頁。5）變異性多樣。如S-R變異、H-O變異，生化反應變異、耐藥性變異6）抵抗力不強。加熱60℃30min既被殺死，對干燥、化學消毒劑敏感、耐低溫、耐膽鹽、煌綠（可抑制非致病菌）當前12頁，總共141頁。臨床意義（一）腸道外感染除志賀菌外，多數(shù)腸桿菌科細菌均可引起腸道外感染，且往往為獲得性的感染鼠疫耶爾森菌可引起自然疫源烈性傳染病鼠疫，傷寒沙門菌可經(jīng)糞口傳播引起血流感染（二）腸道內(nèi)感染是人和動物腸道感染的重要病原菌。比較明確的腸道病原菌有埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶爾森菌屬等當前13頁，總共141頁。微生物檢驗KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋――當前14頁，總共141頁。第二節(jié)埃希菌屬當前15頁，總共141頁。埃希菌屬主要有5個種，1）大腸埃希菌臨床最常見2）蟑螂埃希菌3）弗格森埃希菌4）赫爾曼埃希菌5）傷口埃希菌當前16頁，總共141頁。一、生物學特性形態(tài)與染色為革蘭陰性短桿狀，多數(shù)有周鞭毛和菌毛培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在血瓊脂平板上某些菌株可產(chǎn)生β-溶血，在SS瓊脂平板上少數(shù)菌株可發(fā)酵乳糖，形成粉紅色菌落。在麥康凱平板上菌落呈粉紅色。在伊紅美藍瓊脂平板上呈有金屬光澤的紫黑色菌落。在液體培養(yǎng)基中，呈渾濁生長當前17頁，總共141頁。一、生物學特性生化反應特征：發(fā)酵多種糖，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣KIA產(chǎn)酸/產(chǎn)酸、產(chǎn)氣IMViC中4個試驗的結果為＋＋――MIU中3個試驗結果為＋＋―氧化型發(fā)酵型產(chǎn)堿型陽性:紅色陰性:淡黃色硝酸鹽還原實驗OF實驗當前18頁，總共141頁。一、生物學特性4.抗原構造1)O（菌體）抗原：脂多糖，耐熱2)H（鞭毛）抗原：蛋白質(zhì)，不耐熱3)K（表面）抗原：莢膜多糖，耐熱，能阻止O抗原凝集反應當前19頁，總共141頁。一、生物學特性5.抵抗力自然狀態(tài)下較強。加熱60℃30min既被殺死，耐低溫，對常用化學消毒劑敏感、對膽鹽、煌綠有選擇性抑制作用，對鏈霉素、卡那霉素等敏感，但易耐藥當前20頁，總共141頁。二、臨床意義1.致病因素1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關。K抗原有抗吞噬作用，菌毛有黏附作用2）內(nèi)毒素：細胞壁上的脂多糖（LPS）3）腸毒素：大腸埃希菌可產(chǎn)生兩種腸毒素：一種是不耐熱腸毒素（LT）；另一種是耐熱腸毒素（ST）當前21頁，總共141頁。二、臨床意義2.所致疾病1）腸道外感染大腸埃希菌是臨床分離的革蘭陰性桿菌中最常見的菌種，可引起各種類型的感染，主要是引起人類泌尿系感染腸道外感染（多為內(nèi)源性感染）化膿性感染——定位轉(zhuǎn)移腹膜炎、闌尾炎、創(chuàng)傷感染、手術刀口感染等泌尿道感染——病原菌來自病人腸道（上行性）占泌尿道感染首位、女性多見（尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎等）當前22頁，總共141頁。二、臨床意義2）腸道內(nèi)感染

是人和動物腸道的正常菌群，但其中有些菌株能引起輕微腹瀉至霍亂樣嚴重腹瀉，根據(jù)其不同的血清型別、毒力和所致臨床癥狀的不同，將引起人腹瀉的大腸埃希菌分為5類：當前23頁，總共141頁。三、微生物學常規(guī)檢驗1.標本采集腸外感染的標本：取血液、痰液、膿液、分泌物等腸內(nèi)感染的標本：取腹瀉和食物中毒者的糞便、肛拭和殘留食物當前24頁，總共141頁。三、微生物學常規(guī)檢驗2.腸道外感染標本的常規(guī)檢驗

１）檢驗程序２）檢驗方法直接檢查→分離培養(yǎng)→鑒定（KIA、MIU）3.腸道內(nèi)感染標本的常規(guī)檢驗1)分離培養(yǎng)：選擇培養(yǎng)基2)鑒定：生化反應、血清學試驗、毒素或毒力試驗當前25頁，總共141頁。第三節(jié)沙門菌屬當前26頁，總共141頁。案例

一男性病人，高熱10天，有納差、腹部不適、全身酸痛的前驅(qū)癥狀。腹部有壓痛，肝脾腫大。肥達試驗：

H1:40，O1：160，PA1：20，PB<1:20。醫(yī)生懷疑病人得了腸熱癥。

請問：1、為明確診斷，應采集哪些標本來進行微生物學檢驗？

2、所采集的標本應做哪些微生物學檢驗才能有助于疾病的診斷？

3、為了明確診斷，是否還可以再抽血做肥達試驗？

當前27頁，總共141頁。一、生物學特性1.形態(tài)與染色

革蘭陰性桿菌，不產(chǎn)生芽孢，無莢膜，除少數(shù)菌株（雞沙門菌和雛沙門菌）外，一般都有周鞭毛，能運動當前28頁，總共141頁。一、生物學特性2.培養(yǎng)特性※兼性厭氧，對營養(yǎng)的要求不高，在普通營養(yǎng)瓊脂平板上生長的菌落為半透明、S型菌落，可出現(xiàn)粗糙型的菌落（S-R）變異?！谀c道選擇性培養(yǎng)基上因不發(fā)酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在SS瓊脂平板上可形成中心黑色的菌落當前29頁，總共141頁。一、生物學特性3.生化反應※發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣（傷寒沙門菌不產(chǎn)氣），不發(fā)酵乳糖?！鄶?shù)沙門菌反應特征為：KIA：KA++，MIU：+--，IMViC：-+-+/-當前30頁，總共141頁。二、臨床意義1、致病因素1．侵襲力菌毛和Vi抗原構成2．內(nèi)毒素

3．腸毒素

2、所致疾病

沙門菌主要通過污染食品和水源經(jīng)口感染1.臨床常見傷寒和副傷寒：腸熱癥2.胃腸炎3.菌血癥或敗血癥4.攜帶者當前31頁，總共141頁。二、臨床意義菌毛穿入淋巴液胸導管第二次菌血癥遲發(fā)型變態(tài)反應腸壁壞死、潰瘍高熱、肝脾腫大、玫瑰疹、白細胞↓等全身中毒癥狀肝脾腎淋巴結膽囊尿排菌糞便排菌發(fā)病期（1-4W）潛伏期2W腸熱癥傷寒沙門菌等經(jīng)口吸附小腸黏膜細胞上在腸壁、腸系膜淋巴組織中繁殖（致敏）血流（第一次菌血癥）腸出血、腸穿孔當前32頁，總共141頁。三、微生物檢驗標本采集1周取血，2、3周取糞，3周取尿液，全病程骨髓，血清學診斷應在病程的不同時期分別采集2～3份標本食物中毒：糞便、嘔吐物、可疑食物帶菌者：糞便尿液：中段尿離心后取沉淀物分離鑒定增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反應→血清鑒定當前33頁，總共141頁。三、微生物檢驗當前34頁，總共141頁。三、微生物檢驗鑒定1）生化反應鑒定：可以菌落革蘭染色，若為革蘭陰性桿菌，進行氧化酶、觸酶和硝酸鹽還原試驗，氧化酶陰性，后兩者為陽性者可做KIA和MIU等生化反應進一步鑒定KIA（KA－＋）MIU（＋－－）當前35頁，總共141頁。四、微生物檢驗2）血清學鑒定定屬：多價O抗血清對沙門菌分離株進行定屬定群：每個O血清群的單價因子血清定群定型：用單價H因子血清與待測菌做玻片凝集試驗3）血清學診斷（肥達試驗）用已知的傷寒沙門菌O.H抗原、副傷寒沙門菌A、B、C的H抗原，檢測受檢血清中有無相應的抗體的半定量凝集試驗。結果解釋：正常值傷寒沙門菌O抗體效≥1:80，H抗體效價≥1:160，副傷寒沙門菌A、B、C的H抗體效價≥1:80才有臨床意義當前36頁，總共141頁。第四節(jié)志賀菌屬當前37頁，總共141頁。

案例

男性，35歲。因腹痛，膿血便2天來診。

患者3天前出差回來后突然發(fā)熱達38℃，無寒戰(zhàn)，同時有腹痛、腹瀉，大便每日10余次，為少量膿血粘液便，伴里急后重。醫(yī)生接診后，懷疑患者患了細菌性痢疾。

請問：1、為做病原學上的檢查，應該采集什么標本？

2、應該選用什么標本來進行分離培養(yǎng)？對可疑菌落需做哪些生化反應和血清學試驗來鑒定？

當前38頁，總共141頁。志賀菌屬細菌是引起人類細菌性痢疾的主要腸道病原菌之一志賀菌屬可用特異性抗血清將其分為4個血清群（種）：A群為痢疾志賀菌：癥狀最重B群為福氏志賀菌：我國多見C群為鮑特志賀菌D群為宋內(nèi)志賀菌：癥狀最輕，我國多見當前39頁，總共141頁。一、生物學特性1.形態(tài)與染色為革蘭陰性短桿菌，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，某些菌株有菌毛2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在腸道鑒別培養(yǎng)基上可形成乳糖不發(fā)酵、中等大小、無色半透明的菌落，宋內(nèi)志賀菌常形成粗糙型菌落，且能遲緩分解乳糖，培養(yǎng)48h后可形成乳糖發(fā)酵的粉紅色菌落。當前40頁，總共141頁。一、生物學特性3.生化反應發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖。KIA：KA-；MIU：--/+-；IMViC：-/++--當前41頁，總共141頁。一、生物學特性4、抗原構造與分類志賀菌屬菌種有O抗原，無H抗原，部分菌種有K抗原。O抗原是分類的依據(jù)，有群特異性和型特異性兩種抗原。根據(jù)生化反應和O抗原的不同，將志賀菌屬分為4個血清群（A、B、C、D）和40余個血清型A群痢疾志賀菌B群福氏志賀菌（★）C群鮑氏志賀菌D群宋內(nèi)志賀菌（★）當前42頁，總共141頁。一、生物學特性5.變異性（1）S-R變異：宋內(nèi)志賀菌（診斷血清中含有兩相血清）（2）耐藥性變異（3）毒力變異6.抵抗力本屬細菌對理化因素的抵抗力較其他腸桿菌科細菌為低。對酸較敏感，在運送培養(yǎng)時須使用含有緩沖劑的培養(yǎng)基，以免被糞便中其他細菌代謝中的酸所殺死。當前43頁，總共141頁。二、臨床意義致病因素1）侵襲力2）內(nèi)毒素：志賀菌主要致病物質(zhì)3）外毒素2.所致疾病

主要引起人類細菌性痢疾，主要有以下3種臨床類型：1）急性細菌性痢疾2）慢性菌痢3）帶菌者當前44頁，總共141頁。二、臨床意義細菌（菌毛）吸附腸黏膜上皮細胞穿入細胞并擴散周圍及深入黏膜下層釋放內(nèi)毒素、外毒素腸局部黏膜炎癥（變性、壞死、脫落）出血、壞死、潰瘍膿血便/黏液血便刺激腸壁植物神經(jīng)腸蠕動↑腸肌痙攣腺體分泌↑水分吸收↓腹痛、腹瀉刺激直腸肛門括約肌里急后重便數(shù)增加吸收入血發(fā)熱、白細胞↑高熱、休克中毒性腦病DIC死亡毒血癥中毒性菌痢當前45頁，總共141頁。三、微生物學檢驗1.標本采集取糞便或肛拭標本。

發(fā)病早期采集黏液膿血便做床邊接種。

若不能及時送檢（甘油保存液或卡-布運送培養(yǎng)基內(nèi)）當前46頁，總共141頁。三、微生物學檢驗KIA（KA－－）MIU（－－－）IMVC（－＋－－）當前47頁，總共141頁。三、微生物學檢驗3.檢驗方法1）分離培養(yǎng)2）鑒定先進行氧化酶、觸酶和硝酸鹽還原試驗（-++）

后做KIA和MIU等生化反應試驗當前48頁，總共141頁。第五節(jié)克雷伯菌屬當前49頁，總共141頁?？死撞鷮伲耗c桿菌科中的一屬，為條件致病菌，臨床感染中以肺炎克雷伯菌多見，也是引起醫(yī)院感染的重要病原菌當前50頁，總共141頁。一、生物學特性1.形態(tài)與染色肺炎克雷伯菌為革蘭陰性桿菌，單個、成雙或者短鏈狀排列，有明顯莢膜，無芽孢，無鞭毛，有菌毛2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通瓊脂平板上，形成較大、灰白色、黏液型的菌落，相鄰菌落容易發(fā)生融合，用接種針沾取時可挑出長絲狀細絲在麥康凱或SS瓊脂平板上，形成較大、紅色、黏液型菌落。在血平板上不溶血。粘絲試驗BAP菌落特征染色形態(tài)當前51頁，總共141頁。一、生物學特性3.生化反應分解葡萄糖、乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，KIA：AA+-；MIU：--+；IMViC:--++4.抗原結構：O抗原K抗原：莢膜多糖，用以分型當前52頁，總共141頁。二、臨床意義克雷伯菌屬的細菌多感染免疫力低下的人群，是醫(yī)院感染中最重要的條件致病菌肺炎克雷伯菌是臨床標本中常見的細菌，可引起典型的原發(fā)性肺炎肺炎克雷伯菌肺炎亞種還能引起各種肺外感染當前53頁，總共141頁。三、微生物學檢驗1.采集標本主要有痰液、血液、尿液、膿、腦脊液、糞便、胸腹水等。2.檢驗方法1）直接檢查：膿、痰直接涂片染色鏡檢，尿、腦脊液取離心沉渣涂片染色鏡檢。可見革蘭陰性球桿菌，有明顯的莢膜。2）分離培養(yǎng)：血液、腦脊液標本先經(jīng)肉湯增菌培養(yǎng)，其他標本接種血平板或麥康凱瓊脂平板進行分離培養(yǎng)。3）鑒定①生化反應：革蘭染色，氧化酶、觸酶和硝酸酶、KIA、MIU、IMViC②莢膜腫脹試驗當前54頁，總共141頁。第六節(jié)變形桿菌屬

當前55頁，總共141頁。變形桿菌屬是腸桿菌科中的一菌屬，是一群動力活潑、產(chǎn)硫化氫、可形成遷徙生長，是條件致病菌和醫(yī)院感染的常見菌。當前56頁，總共141頁。1.形態(tài)與染色革蘭陰性桿菌，呈多形性，有周身鞭毛，運動活潑，無芽胞，無莢膜。2.培養(yǎng)特性

兼性厭氧，對營養(yǎng)無特殊要求，在營養(yǎng)瓊脂和血瓊脂平板上，普通變形桿菌和奇異變形桿菌多呈遷徙生長，是本屬細菌的重要特征。在腸道選擇培養(yǎng)基上，形成透明或半透明的無色菌落。產(chǎn)生硫化氫，在SS平板上形成無色黑心菌落。普通變形桿菌、奇異變形桿菌的一些菌株和產(chǎn)黏變形桿菌在血平板上溶血。一、生物學特性當前57頁，總共141頁。3.生化反應分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解乳糖；KIA：KA++；MIU:++/-+；IMViC:+/-+--

迅速分解尿素（2-4h），苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性4.抗原構造變形桿菌X19、X2、Xk菌株的O抗原,即OX19、OX2和OXK某些立克次體有共同抗原成分，臨床上用OX19、OX2和OXK代替立克次體的抗原，與病人血清進行凝集試驗，用以輔助診斷立克次體病，此試驗稱為外斐試驗。一、生物學特性當前58頁，總共141頁。二、臨床意義變形桿菌屬中由普通變形桿菌、奇異變形桿菌引起的感染最為常見。主要引起泌尿系感染，發(fā)病率僅次于大腸埃希菌，醫(yī)源性感染較多見。此外還可以引起食物中毒、呼吸道感染、創(chuàng)口感染及多個部位感染等。當前59頁，總共141頁。1、標本采集有血液、尿、腦脊液、膿液、痰液、糞便，可疑食物等。2、檢驗方法1）直接檢查2）分離培養(yǎng)3）鑒定4）鑒別三、微生物學檢驗當前60頁，總共141頁。

第七節(jié)腸桿菌屬當前61頁，總共141頁。廣泛存在于污水、土壤和蔬菜中，是腸道正常菌叢的成員，能引起多種條件致病性感染。臨床上常見的有：產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、坂崎腸桿菌、泰洛腸桿菌、聚團腸桿菌、格高菲腸桿菌5個菌種。當前62頁，總共141頁。1、形態(tài)與染色革蘭陰性粗短桿菌，有周身鞭毛，無芽胞，部分菌株有莢膜2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上能夠生長，形成較大的、灰白色或黃色的黏液狀菌落，在腸道選擇培養(yǎng)基上，形成發(fā)酵乳糖的紅色菌落。3、生化特性多數(shù)菌株分解葡萄糖、乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；KIA：AA+-；MIU：+--/+；IMViC:--++一、生物學特性當前63頁，總共141頁。腸桿菌屬廣泛存在于自然環(huán)境中，是腸道正常菌群的成員，能引起醫(yī)院感染中多種條件致病性感染在臨床標本中最常檢出的是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，能引起呼吸道、泌尿道及傷口感染，也可引起敗血癥、腦膜炎等。坂崎腸桿菌能引起新生兒腦膜炎和菌血癥，死亡率高達75％二、臨床意義當前64頁，總共141頁。1.標本采集血液、尿液、膿液、痰液、腦脊液等。2.檢驗方法1）直接檢驗2）分離培養(yǎng)3）鑒定MAC上稍大而粘稠的菌落SS上如果生長，為白色或乳白色、不透明粘稠狀的菌落三、微生物學檢驗當前65頁，總共141頁。

第八節(jié)其他常見腸桿菌科細菌當前66頁，總共141頁。一、沙雷菌屬二、耶爾森菌屬三、愛德華菌屬四、枸櫞酸桿菌屬五、哈夫尼亞菌屬當前67頁，總共141頁。一、沙雷菌屬當前68頁，總共141頁。沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫(yī)院感染的一個重要的菌屬，臨床標本中以黏質(zhì)沙雷菌最常見。條件致病菌，可引起肺炎、敗血癥、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、泌尿道感染等。佩戴隱形眼鏡所引起的紅眼病。當前69頁，總共141頁。1、形態(tài)與染色本屬細菌為革蘭陰性小桿菌，有周身鞭毛，能運動，氣味沙雷菌有微莢膜，其余菌種無莢膜、無芽胞。黏質(zhì)沙雷菌是細菌中最小者，可用于檢查除菌濾器的除菌效果2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在營養(yǎng)瓊脂上能夠生長，形成不透明，白色或有色（紅色、粉紅色）的菌落。色素的產(chǎn)生在室溫中更為明顯。所產(chǎn)生的兩種不同色素是：非水溶性的靈菌紅素和水溶性的吡羧酸。在伊紅美藍和麥康凱瓊脂平板上形成無色的大而粘稠的菌落。一、生物學特性當前70頁，總共141頁。該菌曾一度被認為是無害的環(huán)境污染菌，但由于該菌具有侵襲性并對許多常用抗菌藥物有耐藥性，現(xiàn)已成為一種重要的條件病原菌黏質(zhì)沙雷菌是引起腸道外感染的主要病原菌，與許多醫(yī)院內(nèi)感染的暴發(fā)流行有關二、臨床意義當前71頁，總共141頁。KIA：KA--MIU：+--IMViC：--/+++賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：++-DNA酶陽性三、生化反應當前72頁，總共141頁。二、耶爾森菌屬當前73頁，總共141頁。與人類疾病密切相關的有3個菌種，包括鼠疫耶爾森菌、小腸結腸炎耶爾森菌、假結核耶爾森菌，都是人畜共患病病原菌。當前74頁，總共141頁。鼠疫耶爾森菌在我國傳染病防治法中被列為甲類傳染病，曾在世界上造成多次大流行，引起大批患者死亡，造成人類重大災害，由于世界上鼠疫自然疫源尚未全部消滅，至今仍有人間或鼠間流行，因此，必須予以重視。鼠疫耶爾森菌有兩種毒素：內(nèi)毒素和鼠毒素臨床類型

有3種常見的臨床類型：（1）腺鼠疫（2）敗血型鼠疫（3）肺鼠疫此外尚有較為少見的皮膚鼠疫、腸鼠疫、腦膜炎型鼠疫、眼鼠疫等鼠疫耶爾森菌當前75頁，總共141頁。為革蘭染色陰性直桿狀或球桿狀，兩端鈍圓，兩極濃染，有莢膜，無芽孢，無鞭毛鼠疫耶爾森菌兼性厭氧，耐低溫，在4～43℃均能生長，最適生長溫度為25～28℃，最適pH為6．9～7．2。在普通培養(yǎng)基上可生長，但發(fā)育緩慢。在血瓊脂平板上培養(yǎng)以37℃最好，48小時后形成柔軟、粘稠的粗糙菌落。在肉湯培養(yǎng)基中開始混濁生長，24小時后表現(xiàn)為沉淀生長，48小時后逐漸形成菌膜，稍加搖動后菌膜呈鐘乳石狀下垂。肝臟新鮮壓片顯微鏡下形態(tài)特征當前76頁，總共141頁。鼠疫耶爾森菌檢驗程序鼠疫耶爾森菌傳染性極強屬于危害程度第二類的病原微生物采取嚴格的防護措施并嚴格遵守實驗室對烈性傳染病的操作規(guī)程方可進行操作當前77頁，總共141頁。鼠疫耶爾森菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對大多數(shù)糖不分解；KIA：KA--；MIU：---；IMViC：--+-；賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：---；不液化明膠；當穿刺培養(yǎng)時，培養(yǎng)物表面成膜狀，細菌沿穿刺線呈縱樹狀生長。當前78頁，總共141頁。小腸結腸炎耶爾森菌小腸結腸炎耶爾森菌可寄居在鼠、家畜和兔多種動物體內(nèi)，多表現(xiàn)為小腸炎和結腸炎，癥狀與菌痢和闌尾炎相似。小腸結腸炎耶爾森菌為革蘭陰性球桿菌，無芽孢，無莢膜，22-25℃培養(yǎng)有周鞭毛，呈翻滾螺旋狀運動，35℃無動力。兼性厭氧，耐低溫。具有嗜冷性，在4℃增菌3周可分離純化；25℃時動力+，37℃時動力-;VP試驗25℃時+，37℃時-；KIA：KA--；賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：-+-當前79頁，總共141頁。小腸結腸炎耶爾森菌檢驗程序當前80頁，總共141頁。三、愛德華菌屬當前81頁，總共141頁。四、枸櫞酸桿菌當前82頁，總共141頁。枸櫞酸桿菌屬枸櫞酸桿菌屬以前僅有3個種，即弗勞地枸櫞酸桿菌，異型枸櫞酸桿菌和無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌。枸櫞酸桿菌屬是人和動物腸道的正常菌群，也是條件致病菌，能引起腹瀉和腸道外感染如菌血癥、腦膜炎和腦膿腫等當前83頁，總共141頁。本菌屬是腸桿菌科中的一屬，為條件致病菌與臨床及醫(yī)院感染相關的病原菌主要是弗勞地枸櫞酸桿菌，科澤枸櫞酸桿菌和布拉克枸櫞酸桿菌臨床最常見的感染部位是泌尿道，常為老年男性患者（≥65歲）此外還可引起菌血癥、腹瀉、某些腸道外感染及多菌混合感染，導致延長住院時間及死亡科澤枸櫞酸桿菌還可引起嬰幼兒腦膜炎和腦膿腫當前84頁，總共141頁。1、形態(tài)與染色本屬細菌為革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛、無芽孢、無莢膜2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在MAC、EBME、SS上為無色透明或紅色。弗勞地枸櫞酸桿菌可產(chǎn)生硫化氫，在SS瓊脂上形成有黑色中心的菌落。本菌屬的部分生化特性和抗原結構（O抗原）與沙門菌屬相似，應注意鑒別當前85頁，總共141頁。

3.枸櫞酸桿菌的基本生化反應特征：三糖鐵瓊脂中產(chǎn)酸/產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)堿/產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)生硫化氫，枸櫞酸鹽陽性，脲酶陰性/陽性，吲哚陽性/陰性，動力陽性，VP陰性，鳥氨酸陽性/陰性，精氨酸陽性，賴氨酸陰性枸櫞酸桿菌屬與類似菌屬的鑒別當前86頁，總共141頁。腸桿菌科小結腸桿菌科細菌是革蘭陰性桿菌中最主要的成員，也是臨床最常見的病原菌，是臨床泌尿道、呼吸道、腸道、腹腔和盆腔等感染的常見病原菌現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)與人類感染有關的腸桿菌科細菌有33個菌屬，約有40種以上的腸桿菌科的細菌可在臨床標本中檢測出腸桿菌科細菌為革蘭陰性桿狀或球桿狀、無芽孢、多數(shù)有鞭毛，能運動，有致病性的菌株多數(shù)有菌毛當前87頁，總共141頁。需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好主要生化特性為發(fā)酵葡萄糖、觸酶陽性、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陽性革蘭氏陰性桿菌除腸桿菌科外，還有弧菌科和非發(fā)酵菌，所以首先應與這些菌進行鑒別，鑒別可用形態(tài)、葡萄糖氧化或發(fā)酵、氧化酶、鞭毛等加以區(qū)別腸桿菌科細菌的檢驗要點為直接涂片檢查，分離培養(yǎng)，細菌鑒定，必要時還要作血清學鑒定及毒素檢測當前88頁，總共141頁。實驗室抗菌藥物敏感試驗抗菌藥物的選擇，需參照相關標準的基礎上，咨詢醫(yī)院相關專業(yè)人士，結合醫(yī)院的具體情況來選擇實驗室提供的抗菌藥物敏感試驗結果對臨床合理使用抗生素意義重大同時細菌的耐藥譜，還可作為醫(yī)院感染流行病學調(diào)查的一個重要實驗室依據(jù)當前89頁，總共141頁?；【飘斍?0頁，總共141頁。案例2014年9月19日下午5點，李滄區(qū)下午5點，李滄區(qū)疾控中心接到市八醫(yī)的電話報告：9月19日下午4：00，該院腸道門診接診2例腹瀉病患者，癥狀相似，腹瀉十余次，嘔吐四次。截止7點，該院已累計收治了7例疑似霍亂病人，病人的臨床表現(xiàn)劇烈腹瀉，先瀉后吐，無腹痛、無發(fā)熱，發(fā)病時間分別為9月18、19日。區(qū)疾控中心應急處置分隊對7例病人進行了個案流行病學檢查，發(fā)現(xiàn)7例病人均為附近某小區(qū)居民，9月17日中午，均參加了村民姜先生在手拉手餐館舉辦的結婚午宴，同時霍亂快診O139陽性。請問：1：結合臨床表現(xiàn)，你初步懷疑什么菌感染？2：應采集幾級防護？除個人防護用品外，還應準備什么？3：霍亂采樣的注意事項有哪些？應做哪些微生物學檢查？

當前91頁，總共141頁。一、弧菌屬弧菌屬分布廣泛，以水中最多。人類致病的主要有霍亂弧菌和副溶血性弧菌，分別引起霍亂和食物中毒。當前92頁，總共141頁。（一）霍亂弧菌※

霍亂弧菌是霍亂的病原菌，該病為一種急性烈性腸道傳染病，發(fā)病急，傳染性強，病死率高，屬于國際檢疫傳染病，為我國甲類傳染病。※

霍亂弧菌包括兩個生物型：古典生物型和埃爾托（Eltor）生物型。當前93頁，總共141頁。一、生物學特性1.形態(tài)與染色革蘭陰性，弧形或逗點狀，單端鞭毛，運動活潑。取患者米泔樣糞便作懸滴觀察，可見該菌呈穿梭樣或流星狀運動，做涂片染色鏡檢，可見“魚群狀”排列當前94頁，總共141頁。2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求不高，最適溫度35℃，耐堿不耐酸，最適pH8.8-9.9,在堿性蛋白胨水中，經(jīng)35℃培養(yǎng)6-9h形成菌膜，可達快速增菌目的。在堿性瓊脂平板上，形成較大、圓形、扁平、無色透明或半透明似水滴狀菌落。在TCBS上，因發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸形成較大黃色菌落。在亞碲酸鉀瓊脂平板上，菌落中心呈灰褐色。在血平板上，Eltor生物型有β溶血。當前95頁，總共141頁。3、生化反應4、抗原結構及分型H抗原弧菌屬所共有，特異性低O抗原特異性高，O1和O139群引起霍亂，O1型根據(jù)特異性分為古典生物型和埃爾托生物型5、抵抗力抵抗力弱，不耐熱，耐堿不耐酸。埃爾托（Eltor）生物型較古典生物型強。當前96頁，總共141頁。1、致病物質(zhì)鞭毛、菌毛和霍亂腸毒素（主要致病物質(zhì)）2、所致疾病引起霍亂，人是唯一易感者，通過污染的水源或經(jīng)食物經(jīng)口感染?；魜y后可獲得牢固的免疫二、臨床意義當前97頁，總共141頁。1、標本采集發(fā)病早期及未服抗生素前采樣?？刹扇』颊呒S便、嘔吐物或肛拭子。采集標本及時接種于堿性蛋白胨水中2、檢驗程序三、微生物學檢驗當前98頁，總共141頁。3、檢驗方法1）直接鏡檢①革蘭染色鏡檢，如見魚群狀排列的革蘭陰性弧菌，可初步報告。②動力及制動試驗：去病人米泔水樣便或嘔吐物，懸滴法鏡檢，可見流星樣運動的細菌。加入O1群霍亂弧菌多價血清后動力消失，制動試驗陽性，可早期報告2）增菌培養(yǎng)堿性蛋白胨水

3）分離培養(yǎng)堿性瓊脂平板和TCBS瓊脂平板4）血清學鑒定當前99頁，總共141頁。（二）溶血性弧菌※溶血性弧菌是一種嗜鹽性細菌，主要來自海產(chǎn)品。引起食物中毒。當前100頁，總共141頁。一、生物學特性1、形態(tài)與染色革蘭陰性，直或微彎的桿狀，在不同培養(yǎng)基上菌體形態(tài)差異較大。兩極濃染，單端鞭毛，運動活潑。當前101頁，總共141頁。2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求不高，最適NaCL濃度為3.5%，在無鹽培養(yǎng)基上不生長。在堿性蛋白胨水中，經(jīng)35℃培養(yǎng)6-9h形成菌膜?！?.5%NaCL瓊脂平板上，呈蔓延生長，菌落周圍不整齊，凸起，光滑濕潤，不透明，※在TCBS上，不發(fā)酵蔗糖，菌落綠色（與霍亂弧菌相區(qū)別）。※在羊血瓊脂平板上，形成圓形、凸起，光滑濕潤，灰白色菌落，有β溶血。※在SS平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀當前102頁，總共141頁。當前103頁，總共141頁。3、生化反應致病菌株能使人或兔紅細胞發(fā)生溶血，對馬紅細胞不溶血，稱神奈川試驗。4、抵抗力抵抗力弱，不耐熱，耐堿不耐酸。當前104頁，總共141頁。1、致病物質(zhì)粘附因子（主要為菌毛）、毒素2、所致疾病引起食物中毒二、臨床意義當前105頁，總共141頁。1、標本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標本立即送檢，如不能及時送檢，應將標本置于3.5%NaCL蛋白胨水或卡布培養(yǎng)基中送檢。2、檢驗方法1）增菌培養(yǎng)3.5%NaCL蛋白胨水2）分離培養(yǎng)TCBS瓊脂平板和3.5%NaCL瓊脂平板3）鑒定三、微生物學檢驗當前106頁，總共141頁。二、氣單胞菌屬氣單胞菌屬廣泛分布于自然界，可引起腹瀉和腸道外感染當前107頁，總共141頁。一、生物學特性1、形態(tài)與染色革蘭陰性直桿狀，有時成球桿狀或絲狀，單極鞭毛，運動極為活潑，無芽孢，有窄的莢膜。2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上經(jīng)培養(yǎng)，形成微白色半透明菌落；在血平板上，形成較大、扁平菌落，有β溶血；在腸道培養(yǎng)基上，形成扁平、無色菌落；在TCBS上，生長不良；液體培養(yǎng)基呈均勻渾濁。3、生化反應發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，氧化酶和觸酶試驗陽性，在6%NaCL中不生長當前108頁，總共141頁。1、致病物質(zhì)溶血毒素和細胞毒素2、所致疾病主要引起人類腸內(nèi)感染（腹瀉）和腸外感染（傷口感染和敗血癥）。二、臨床意義當前109頁，總共141頁。1、標本采集采取患者糞便、肛拭、血液、膿液、腦脊液、尿液等標本。2、檢驗方法1）直接涂片革蘭陰性短桿菌，懸滴法細菌運動活潑2）分離培養(yǎng)４℃冷增菌3）鑒定４）鑒別①與腸桿菌科及非發(fā)酵菌的鑒別：本屬氧化酶陽性，能發(fā)酵葡萄糖②與鄰單胞菌和弧菌屬的鑒別：本菌屬對O/129耐藥，TCBS平板上不生長三、微生物學檢驗當前110頁，總共141頁。三、鄰單胞菌屬鄰單胞菌屬只有一個種即類志賀鄰單胞菌。引起人類水樣腹瀉和食物中毒。當前111頁，總共141頁。1、染色及形態(tài)本菌為革蘭陰性桿菌，1-5根極端鞭毛，運動活潑2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在腸道選擇鑒別培養(yǎng)基上，形成不發(fā)酵乳糖的無色菌落，TCBS平板上不生長。3、生化反應氧化酶、觸酶試驗陽性，硝酸鹽還原試驗陽性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，吲哚試驗陽性，O/129敏感4、鑒別試驗1）與志賀菌屬鑒別：氧化酶和動力試驗為陽性，志賀菌屬均為陰性

2）與氣單胞菌和弧菌屬的鑒別：本菌屬對O/129敏感，TCBS平板上不生長當前112頁，總共141頁。一、生物學特性1.形態(tài)與染色革蘭陰性，直或微彎的桿狀，在不同培養(yǎng)基上菌體形態(tài)差異較大。兩極濃染，單端鞭毛，運動活潑。當前113頁，總共141頁。2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求不高，最適NaCL濃度為3.5%，在無鹽培養(yǎng)基上不生長。在堿性蛋白胨水中，經(jīng)35℃培養(yǎng)6-9h形成菌膜。※在3.5%NaCL瓊脂平板上，呈蔓延生長，菌落周圍不整齊，凸起，光滑濕潤，不透明，※在TCBS上，不發(fā)酵蔗糖，菌落綠色（與霍亂弧菌相區(qū)別）。※在羊血瓊脂平板上，形成圓形、凸起，光滑濕潤，灰白色菌落，有β溶血?！赟S平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀當前114頁，總共141頁。1、致病物質(zhì)粘附因子（主要為菌毛）、毒素2、所致疾病引起食物中毒二、臨床意義當前115頁，總共141頁。1、標本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標本立即送檢，如不能及時送檢，應將標本置于3.5%NaCL蛋白胨水或卡布培養(yǎng)基中送檢。2、檢驗方法1）增菌培養(yǎng)3.5%NaCL蛋白胨水2）分離培養(yǎng)TCBS瓊脂平板和3.5%NaCL瓊脂平板3）鑒定三、微生物學檢驗當前116頁，總共141頁?；【菩〗Y

霍亂是烈性傳染病，凡在流行季節(jié)和地區(qū)有腹瀉癥狀的患者均應快速準確作出病原學診斷。標本直接檢查有助于快速診斷。將標本直接接種于堿性胨水后，轉(zhuǎn)種TCBS等平板觀察菌落形態(tài)?？梢删鋺褂肙1群和O139群霍亂弧菌多價和單價抗血清進行凝集。結合菌落特征和菌體形態(tài)，作出初步報告。進一步純培養(yǎng)，依據(jù)全面生化反應，血清學分群及分型進行最后鑒定。符合霍亂弧菌的菌株尚需區(qū)分古典生物型和El-Tor生物型當前117頁，總共141頁。

副溶血性弧菌具有嗜鹽性，在不含NaCl的培養(yǎng)基上不生長。主要引起食物中毒和急性腹瀉，從腹瀉患者中分離到的菌株95%以上能使人或兔紅細胞發(fā)生溶血，對馬紅細胞不溶血，為神奈川現(xiàn)象當前118頁，總共141頁。

氣單胞菌屬是革蘭陰性直桿菌、球桿菌或絲狀菌，極端單鞭毛，動力陽性，來自人類菌種（嗜溫菌）在10～42℃生長；來自魚類或環(huán)境菌種（嗜冷菌）在22～25℃生長。氧化酶、觸酶、硝酸鹽還原陽性，發(fā)酵葡萄糖等糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，O/129耐藥。引起腹瀉和菌血癥等。與腸桿菌科和非發(fā)酵菌鑒別：本菌屬氧化酶陽性，發(fā)酵葡萄糖；腸桿菌科發(fā)酵葡萄糖，氧化酶陰性。非發(fā)酵菌可能氧化酶陽性或陰性，不發(fā)酵葡萄糖。與弧菌屬鑒別：本菌屬在≥6％NaCL培養(yǎng)基不生長，分解甘露醇，O/129耐藥。當前119頁，總共141頁。非發(fā)酵革蘭陰性桿菌當前120頁，總共141頁。

非發(fā)酵菌是一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌廣泛存在于人體體表、開放體腔，以及醫(yī)院相關的外環(huán)境中，多為條件致病菌。醫(yī)院感染中銅綠假單胞菌、不動桿菌占重要地位。當前121頁，總共141頁。

假單胞菌屬※為一群嚴格需氧、有鞭毛、無芽胞、無莢膜的革蘭陰性桿菌?！趸负陀|酶試驗陽性?？僧a(chǎn)生大量水溶性色素，如綠膿素、紅膿素當前122頁，總共141頁。

一、銅綠假單胞菌屬

假單胞菌屬的代表菌屬，產(chǎn)生水溶性色素綠膿素，使膿液或培養(yǎng)基呈綠色，而得名。為條件致病菌，是醫(yī)院感染的常見菌。當前123頁，總共141頁。

1、形態(tài)與染色革蘭陰性桿菌，球桿狀或絲球狀，長短不一。單個、呈雙或短鏈狀排列。無芽孢，有莢膜，有1-3根鞭毛，運動活潑，臨床分離株常有菌毛。2、培養(yǎng)特性專性需氧，部分菌株兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。在普通瓊脂平板和SS平板上生長良好，可生長溫度25-42℃，最適生長溫度35℃，4℃不生長而42℃生長是該菌的鑒別點之一?！谘桨搴望溈祫P平板上形成不同形態(tài)菌落，生姜氣味?！赟S瓊脂平板上，經(jīng)48h培養(yǎng)菌落中央呈棕綠色（與沙門菌和志賀菌相區(qū)別）※在普通瓊脂平板上，可產(chǎn)生多種色素，以綠膿素和青膿素為主一、生物學性狀當前124頁，總共141頁。當前125頁，總共141頁。3、生化反應葡糖糖、木糖氧化；觸酶、氧化酶陽性；利用枸櫞酸鹽、還原硝酸鹽并產(chǎn)生氮氣；液化明膠，吲哚陰性；4、抵抗力比其他無芽孢細菌抵抗力強。當前126頁，總共141頁。二、臨床意義

1、致病物質(zhì)產(chǎn)生多種致病