《青藏高原的細菌耐藥性調(diào)查報告（論文）》

青藏高原的細菌耐藥性調(diào)查TOC\o\u1前言 51.1研究背景 51.2殘留抗生素的來源及危害 61.3細菌耐藥性的形成機制 62巴氏桿菌與土壤微生物的相關(guān)實驗 92.1動物體巴氏桿菌 92.2土壤微生物 92.3多殺性巴氏桿菌和土壤微生物的相關(guān)研究方法 93巴氏桿菌在土壤微生物的作用下形成的特性及結(jié)果 123.1多殺性巴氏桿菌 123.2土壤微生物 14結(jié)論 17參考文獻 -1-致謝 -3-1前言1.1研究背景巴氏桿菌病是一種非常明顯的傳染病，通過多殺性巴氏桿菌使大部分家畜、家禽、鳥類、野生動物等之間傳播，甚至感染人類傳染病,主要在青海地區(qū)牛羊出血性敗血癥、豬肺疾病、性萎縮性鼻炎豬和家禽牲畜和家禽的急性或慢性傳染病如霍亂、兔巴氏桿菌疾病對水產(chǎn)養(yǎng)殖造成了很大的損失。掌握青藏高原動物巴氏桿菌疾病發(fā)病率提供科學依據(jù)將來控制疾病,研究人員在2008-2009年的10個縣(市)青海牦牛、藏羊、豬、雞、兔巴氏桿菌病病原體在傳統(tǒng)的分離和鑒定,結(jié)果表明,野生菌株的應變和質(zhì)量控制有一定的生化差異,野生菌株耐藥率較高,和質(zhì)量控制菌株無耐藥性。還發(fā)現(xiàn)復合巴氏桿菌是青藏高原牦牛出血性敗血癥的病原體，但其致病因素和發(fā)病機制尚不清楚。巴氏桿菌是條件致病菌的一種。一旦由于各種原因使其毒力增加或動物抵抗力降低，就會通過內(nèi)源性傳播引起巴氏桿菌的發(fā)生和流行。由于青海省大部分疫區(qū)地理環(huán)境惡劣、交通不便，部分接受過短期培訓的民間獸醫(yī)或牧民將開展疫情防控工作。在對動物進行免疫時，經(jīng)常會射出“飛針”，這可能會導致防疫工作出現(xiàn)漏洞。此外，受疫情影響的地區(qū)在全省前幾日的雨雪過程中暴發(fā)疫情。這些因素可能是該疾病的主要原因。從動物細菌分析完后繼續(xù)開始另一方面的研究進程。我們研究人員收集了5種15厘米的土壤類型(栗鈣土、山地草甸土、黑鈣土土壤，不同顏色沙漠土壤)都是通過青藏高原層層篩選得來，主要通過高通量測序技術(shù)手段，分析土壤的主要體系結(jié)構(gòu)以及細菌群落的特征，和分析之間的關(guān)系基于土壤結(jié)構(gòu)和土壤細菌群落的多樣性的因素。結(jié)果表明，有機碳和總氮含量在土壤類型排名如下:栗鈣土大于山地草甸土大于黑鈣土土壤大于，灰色的沙漠土壤大于棕灰色的土壤，也沒有樣品的高度之間的相關(guān)性情節(jié)和土壤養(yǎng)分的積累。微生物的生長，是通過很多的因素構(gòu)成的。比如說必須具備一定的營養(yǎng)含量，一定的空氣，水分。其次還應該有合適的滲透壓，適合的酸堿度和溫度等等條件。但是這種情況是微生物非常喜歡的聲場環(huán)境，不僅有著非常多的種類而且數(shù)量也非常的驚人，因此土壤環(huán)境往往是微生物最佳的發(fā)育環(huán)境。由于土壤的不同機質(zhì)、水分等要素也會有不同的區(qū)別從而劃分出不同的關(guān)系。所以根據(jù)這種不同的關(guān)系細菌微生物等也會隨之產(chǎn)生不同的變化規(guī)律，例如細菌大于放線菌，霉菌大于酵母菌，這種類似遞減的變化規(guī)律都可以反映出微生物的不同新陳代謝所需要土壤的種類和要需求，使土壤具有豐富的肥力，后期采用剛剛提到的高通量測序技術(shù)為土壤環(huán)境體系作出變化規(guī)律和需求的總結(jié)，達到一定程度上的優(yōu)化和持續(xù)性發(fā)展，從而充分的體現(xiàn)出本研究課題可行并具有實質(zhì)性的意義。1.2殘留抗生素的來源及危害當和農(nóng)用或醫(yī)用抗生素使用不當或處理不規(guī)范時導致大自然環(huán)境里的抗生素殘留，不同的細菌感染可以導致相同的疾病，也就是說，相同的疾病可能來自不同的細菌感染。因此，醫(yī)生必須在開處方之前進行細菌培養(yǎng)，確認患者感染的細菌類型，然后確定相應的處方。在我國的臨床治療中，只有35%的醫(yī)生僅根據(jù)經(jīng)驗為患者開處方，只有47%的醫(yī)生在服藥前進行相關(guān)篩查，而5%的處方是根據(jù)患者的需要開處方的。在一項針對性調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)在7278例病例中，有5193例接受了藥物治療，其中只有134例在給藥前在感染部位進行了細菌培養(yǎng)。正常狀況下，細菌互相制約，以維持一個平衡的共生狀態(tài)。人體是可以適應這種情況的，不會生病?？股亻L期使用，更易使原本并不致病的微生物大量增殖，敏感的細菌被抑制，在敏感的細菌（例如，抗抗生素的細菌和霉菌）中繁殖。引起人類感染，即“二重感染”，由金黃色葡萄球菌和白色念珠菌引起的鵝口瘡的偽膜性腸炎的常見原因。嬰兒、老年人、體弱者等，因抵抗力低下，長期、大量使用廣譜抗菌藥物時，導致人體發(fā)生感染，臨床稱之為條件致病菌引起的感染。臨床常見的二重感染包括真菌感染（如念珠菌性口腔炎）和對該抗生素耐藥菌株逐漸增殖感染如霉菌性肺炎、梭狀芽胞桿菌腸炎、尿路感染、白色念珠菌陰道炎，以及霉菌性腸炎等。1.3細菌耐藥性的形成機制一般我們把細菌對人為的抗細菌藥物等產(chǎn)生的耐受強度稱之為細菌的耐藥性又叫抗藥性。根據(jù)產(chǎn)生的原因，耐藥性可分為獲得性耐藥和自然耐藥。一旦發(fā)生，就意味著藥物的治療效果會大大降低。有一種次生代謝產(chǎn)物值得研究，他是人們最常用的一種天然抗生素，從細菌身上發(fā)現(xiàn)得來，讓自身受保護不讓別的微生物對自己產(chǎn)生影響，所以這種次生代謝產(chǎn)物常常被人們用來解決需要處理的微生物。當微生物接觸到抗菌藥物時，一樣的也會通過各種手段途徑去不受到抗菌藥物的作用，從而不被抗菌劑通過改變自身代謝途徑而殺死。例如，金黃色葡萄球菌和淋球菌產(chǎn)生乳酸內(nèi)酰胺，并且對乳酸內(nèi)酰胺抗生素有耐藥性。獲得性耐藥可以通過質(zhì)粒遺傳，質(zhì)粒將耐藥基因轉(zhuǎn)移到染色體上，形成內(nèi)在耐藥，也可以通過不再接觸抗菌藥物而消除獲得性耐藥。細菌的結(jié)構(gòu)和化學組成代代相傳不會改變，所以由細菌的染色體基因決定的天然耐藥一般不會改變，然后其具體機制可分為以下5類:滅活酶的產(chǎn)生、抗菌藥物作用靶點的變化、細菌外膜通透性的變化、活性流出系統(tǒng)的影響、細菌生物被膜的形成，下面開始詳細展開介紹。耐藥性通常被分為5種每一種都非常重要，其中最重要機制之一是產(chǎn)生滅活酶，這是細菌通過滅活的抗菌藥物從而讓這種藥物失活，從細菌進入之前就已經(jīng)被產(chǎn)生的滅活酶所解決，達到一定程度的耐藥性。β-內(nèi)酰胺酶通過不同的染色體或質(zhì)粒介導來表達出自己的基因體系。經(jīng)過β-內(nèi)酰胺類的β-內(nèi)酰胺環(huán)的執(zhí)行過程讓內(nèi)酰胺環(huán)的抗菌作用崩解，讓抗生素的抗菌作用除去。隨著新型抗生素在臨床中的應用，鼻內(nèi)酰胺酶的種類迅速增加，其作用機制在β-內(nèi)酰胺類抗生素一章中進行了闡述。氨基苷類抗生素鈍化酶:氨基苷在暴露于抗生素后鈍化酶失去后者抗菌效果,常見的氨基苷鈍化酶乙?；浮⑾佘樟姿峄?這些酶基因的質(zhì)粒介導的合成,可以腺苷乙酰和?；柞；c氨基或羥基氨基苷,氨基酸的結(jié)構(gòu)變化類失去抗菌活性;其它酶:細菌能產(chǎn)生氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶滅活氯霉素;生產(chǎn)酯酶滅活大環(huán)內(nèi)酯類抗生素;金黃色葡萄球菌產(chǎn)生核糖轉(zhuǎn)移酶使林可霉素失活?？咕饔檬〉臅r候一般是靶蛋白的結(jié)合位點在細胞內(nèi)膜里發(fā)生了位移，不僅抗生素無法對接而且作用性大大降低，調(diào)查研究青霉素就是通過這種方式使肺炎鏈球菌形成的良好耐藥性，經(jīng)過抗生素和細菌的碰撞，產(chǎn)生原敏感菌所不存在的新靶蛋白，使抗生素無法與新靶蛋白結(jié)合，產(chǎn)生高耐藥性。如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌比金黃色葡萄球菌更敏感青霉素結(jié)合蛋白組成青霉素結(jié)合蛋白；隨著目標蛋白數(shù)量的增加，細菌還是能通過蛋白數(shù)量的增加達到穩(wěn)定繁殖發(fā)育，因此讓抗菌藥物形成耐藥性。調(diào)查研究，腸球菌對β-內(nèi)酰胺類的耐藥非但可以產(chǎn)生生β-內(nèi)酰胺酶，還能夠供給青霉素結(jié)合蛋白的量，然后還降低青霉素與抗生素的結(jié)合親和力，從而有了多重的耐藥機制。許多廣譜抗生素對銅綠假單胞菌無作用或作用微弱。主要原因是抗菌藥物不能進入銅綠假單胞菌，從而發(fā)生自然耐藥。當細菌接觸抗生素時，隨著改變通道蛋白的特性和數(shù)量來減少細胞膜的通透性，然后得到一種性耐藥。在一般情形下外膜通道蛋白OmpF以及OmpC合成特異性的跨膜通道，讓抗生素不同藥物分子結(jié)合細菌，然后不斷暴露于抗生素細菌后，應變突變，得到OmpF蛋白結(jié)構(gòu)基因失活和阻礙，從而使OmpF通道蛋白破壞，因此β內(nèi)酰胺、喹諾酮藥物延伸到細菌內(nèi)部的降低。在銅綠假單胞菌中，也有一個特異的OprD蛋白通道，通過暈粗亞胺培南通道進入細菌，當這個蛋白通道丟失時后也產(chǎn)生特異的耐藥性。隨著一些細菌可以將藥物泵入體內(nèi)，將細菌排出體外。這種泵需要能量，所以被稱為主動流出系統(tǒng)。由于這一活性流出系統(tǒng)的存在及其抗菌選擇性的特點，表皮葡萄球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和彎曲桿菌都可以對、大環(huán)內(nèi)酯類四環(huán)素、氟喹諾酮類、氯霉素和β-內(nèi)酰胺類產(chǎn)生多重耐藥性。細菌的流出系統(tǒng)由蛋白質(zhì)組成，主要是膜蛋白。這些蛋白質(zhì)有四個家族:MF家族；RND家族；ABC家庭以及SMR家族。流出系統(tǒng)由三種蛋白組成，即附加蛋白、轉(zhuǎn)運蛋白和外膜蛋白。外膜蛋白類似于位于外膜或細胞壁的通道蛋白，是藥物從細胞中泵出的外膜通道。附加蛋白作為轉(zhuǎn)運蛋白與外膜蛋白之間的橋梁，轉(zhuǎn)運蛋白位于細胞漿膜中，漿膜起著泵的作用。當細菌以生物膜的形式存在時，耐藥性明顯增強，抗生素的應用不僅不能有效去除BF，還會誘發(fā)耐藥性的出現(xiàn)。還有一種滲透限制為生物膜中許多的胞外多糖產(chǎn)生分子屏障和電荷屏障，阻礙或延緩抗生素的滲透。此外，細菌在生物膜中分泌的某些水解酶濃度較高，可促進進入生物膜的抗生素失活。營養(yǎng)限制:生物膜的流動性較低，生物膜深層的氧和營養(yǎng)濃度較低。這種狀態(tài)下細菌的生長和代謝是緩慢的。然而，大多數(shù)抗生素對這種狀態(tài)的細菌并不敏感，所以抗生素只能破壞外層的細菌并不可以從根本的解決感染，一旦停止用藥又會馬上復發(fā)。

2巴氏桿菌與土壤微生物的相關(guān)實驗2.1動物體巴氏桿菌2.1.1實驗樣品：本次無菌取樣的對象，都是從病死的動物身上獲取的。為了區(qū)別巴氏桿菌和地域的聯(lián)系，本次的取樣對象，皆為青藏高原的高原動物的內(nèi)臟器官（也即心肝脾肺腎），如牦牛（馬尾牛）、藏羊（藏系羊）等。2.1.2實驗所需溶液試劑：血瓊脂平板、血瓊脂斜面和5%胎牛血清；肉湯培養(yǎng)基、MH培養(yǎng)基、細菌生化反應培養(yǎng)基；以及上海易佰聚經(jīng)貿(mào)有限公司專業(yè)生產(chǎn)(供應)的各種藥敏紙片。2.2土壤微生物2.2.1實驗樣品：筆者這次選取的實驗對象，是以包括唐古拉山在內(nèi)的，十余個具有原生態(tài)意義的土壤，作為采集實驗樣品。該樣品共11份，按五點采樣法，對30cm內(nèi)的垂直深度進行土壤取樣，并均勻混合后，存入滅菌包裝盒。2.2.2實驗所需溶液試劑：高氏1號培養(yǎng)基:可溶性淀粉(20g)，KNO3(1g)，NaCl(0.5g)，K2HPO4·3H2O(0.5g)，MgSO4·7H2O(0.5g)，F(xiàn)eSO4·7H2O(0.01g)，H2O(1L)，瓊脂(8g)，pH7.4～7.6．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:牛肉膏(3g)，蛋白胨(10g)，NaCl(5g)，H2O(1L)，瓊脂(8g)，pH7．4～7．6．LB培養(yǎng)基:胰蛋白胨(10g)，酵母提取物(5g)，NaCl(10g)，H2O(1L)，中性TSBY培養(yǎng)基:胰胨豆湯粉(30g)，蔗糖(340g)，酵母提取物(5g)，H2O(1L)．YEME培養(yǎng)基:酵母提取物(3g)，蛋白胨(5g)，麥芽提取物(3g)，葡萄糖(10g)，蔗糖(340g),H2O(1L)，高壓滅菌后加入MgCl2·6H2O(2.5mol·L－1)。萘啶酮酸:丙酮溶解，制成濃度為5mg·mL－1的母液，終濃度為20μg·mL－1．Tris溶液(20mmol·L－1pH8.0):稱取Tris固體，用去離子水溶解或滅菌蒸餾水溶解，加入濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至所需值．溶菌酶(50mg·mL－1):用20mmol·L－1pH8.0Tris溶液配制．2.3多殺性巴氏桿菌和土壤微生物的相關(guān)研究方法2.3.1多殺性巴氏桿菌發(fā)病情況的調(diào)查：筆者這次分別走訪了班瑪、久治、達日等縣，并在此期間，和各鄉(xiāng)縣，對于牲畜有過了解的獸醫(yī)站獸醫(yī)，以及部分工作人員進行了溝通，以期能夠獲取關(guān)于患病的牲畜，是否具有家族遺傳病史，以及流行病等問題。病料的采集及病死動物剖檢：本次對于樣品的采集，都是筆者在走訪縣鄉(xiāng)時，采集到的，已病死的牲畜內(nèi)臟，并依次做好了編號(Q1～9)便于后期分辨。病料的觸片、染色及鏡檢：依次將各類牲畜的各種內(nèi)臟制作成觸片或印片，分別進行革蘭和美藍染色，然后鏡檢。野生菌的分離、純化：分別剪取各牲畜的各種內(nèi)部組織病料，接種于5%胎牛血清肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24h，再在鮮血瓊脂平板培養(yǎng)基上純化，置4℃冰箱保存以做備用。生化試驗：將純化后的11株野生菌和C47－8分別接種到生化培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)兩到三天判定其結(jié)果。同時分別用接種環(huán)勾取2環(huán)滅菌純化水蘸于氧化酶試紙上，再勾取少許純化后的細菌進行氧化酶試驗，一分鐘內(nèi)判定結(jié)果。動物致病性試驗：將純化后的11株野生菌(Q1～11)及C47－8分別接種到鮮血瓊脂斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)18～24h制成菌懸液，并與麥氏濁管進行比濁，選取濃度3.0×109個/mL的菌懸液分別腹腔注射12只小白鼠，0.5mL/只。同時應用0.22μm細菌濾器分別對上述11株菌懸液過濾，各取濾液腹腔注射12只小白鼠，每只0.5mL，作為對照。藥敏試驗:分別用滅菌棉拭子蘸取動物致病性試驗中選取的濃度為3.0×109個/mL的菌懸液均勻涂布于MH平板培養(yǎng)基上(培養(yǎng)基厚度為4mm)進行藥敏試驗。判定標準參照美國臨床實驗室標準委員會(NCCLS)藥敏試驗紙片擴散法法規(guī)[9]。2.3.2土壤微生物鏈霉菌分離：在超凈工作臺中取土樣0.1g，置于處理過的，裝有0.9mLLB液體培養(yǎng)基的離心管中，100r·min－1振蕩半小時;取懸液進行梯度稀釋,稀釋倍數(shù)為10/3，將稀釋的土壤懸液200μL涂布到高氏1號瓊脂培養(yǎng)基上,靜置半小時后倒置培養(yǎng)，30℃培養(yǎng)至單菌落出現(xiàn)．將單菌落分別移種到高氏1號瓊脂平板上劃線分離，純化好的菌種用20%甘油制成菌懸液,放入凍存管于－20℃冰箱保藏備用。液體培養(yǎng):將凍存的菌懸液分別滴加到帶有萘啶酮酸(20μg·mL－1)的液體培養(yǎng)基中,于150～200r·min－1、30℃下?lián)u床培養(yǎng),直至培養(yǎng)基混濁?；蚪MDNA提取:菌種DNA用天根生化科技(北京)有限公司是的DNA提取試劑盒（離心柱型）進行提取。借助PCR擴增法對DNA序列的測定及分析:選擇通用引物27F和1492Ｒ［5’－AGAGTTTGATCCTGGCTCAG－3’和5’－GGTTACCTTGTTACGACTT－3’］．PCR反應體系(25μL):2.5μL10×PCＲ，3μL25mmol·L－1MgCl2，0.5μL10mmol·L－1dNTP，2μL10μmol·L－1引物，1μL0.2mol·L－1海藻糖，0.2μL2U·μL－1TaqDNA聚合酶，ddH2O13.8μL。待PCR擴增完畢后，用1.5%的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，檢測后即可進行測序。根據(jù)測序結(jié)果，用基于局部比對算法的搜索工具，從美國國家生物技術(shù)信息中心（GenBank）中調(diào)出相似性較高的相關(guān)菌株的16SrDNA序列用，CLUSTALX做多序列比對分析，用MEGA4.0軟件，采用鄰接法，進行聚類分析和系統(tǒng)進化樹構(gòu)建。拮抗性試驗:采用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基斜面，37℃下培養(yǎng)三到四天時間，待細菌長好后加入2mL無菌水制備靶標菌懸液待用．采用涂抹接種法將供試鏈霉菌接入高氏1號瓊脂平皿，涂勻，30℃培養(yǎng)一周，在無菌條件下用8mm打孔器，將鏈霉菌切成圓形菌餅制備鏈霉菌拮抗性篩選瓊脂塊．分別將3株供試靶標菌懸液與牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基混合后制成平板，將已制備好的放線菌瓊脂塊置于已接好靶標菌的牛肉膏蛋白胨瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)三天時間，觀察靶標菌生長情況及透明度，測量拮抗圈直徑。

3巴氏桿菌在土壤微生物的作用下形成的特性及結(jié)果3.1多殺性巴氏桿菌3.1.1病理剖檢結(jié)果:牦牛、豬、藏羊、家兔均有少量皮下出血。部分牦牛、豬、藏羊肝表面有壞死灶，肝腫大易碎。淋巴結(jié)水腫以及肺表面有肝臟改變面積，呈大理石樣，有纖維素性胸膜炎改變；冠狀脂肪，內(nèi)外心包膜出血明顯，心包積水；咽喉、頸部、四肢等部位皮下浸潤有漿液，偶有帶血，上呼吸道粘膜顯示卡他性粘膜炎。死雞肝表面有白色或黃色壞死灶；肺部侵蝕，表面大理石斑紋；肌性胃和腸出血明顯，冠狀脂肪和心臟內(nèi)外膜均有出血點或血點，出血最明顯的是十二指腸。3.1.2染色、病料觸片和顯微鏡檢查結(jié)果材料:革蘭氏染色和顯微鏡檢查進行肝、肺、脾、腎和其他病材料標呈現(xiàn)革蘭陰性、愚鈍兩端、單或雙方式排序、并與統(tǒng)一的形態(tài)可以看到小芽孢桿菌，顯微鏡下顯示兩極有大量強染色的小桿菌。3.1.3菌落形態(tài)及培養(yǎng)特點:11株野生菌及c47-8株均在不溶血的血瓊脂培養(yǎng)基上形成蒼白、圓形、微隆起、半透明、潮濕、光滑、整齊、豐富的露珠樣菌落。在5%胎牛血清肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后，肉湯渾濁均勻，連續(xù)培養(yǎng)4-6d后，液體變清，在管底形成粘稠物質(zhì)，振蕩后不分散，產(chǎn)生菌膜。3.1.4生化檢測結(jié)果見表13.1.5致病性試驗結(jié)果:試驗組小鼠均于兩至三天內(nèi)死亡。尸檢發(fā)現(xiàn)，在心包和胸腔有漿液和纖維狀滲出物。腸出血尤其明顯;肝表面有淺白色壞死灶。收集必要器官，分離革蘭陰性桿菌，對照組小鼠在3天后后仍然健康。3.2土壤微生物3.2.1菌株培養(yǎng)特點:從青藏高原帶來的10多種的樣品里通過中共分離剖析出鏈霉菌屬菌株151株，其中43隔離高30度培養(yǎng)的瓊脂培養(yǎng)基1號在7至15天的觀察記錄其襯底菌絲菌落形態(tài)、基內(nèi)菌絲、空中菌絲、顏色改變，能不能產(chǎn)生可溶性色素，栽培特點，如表2和圖1所示的結(jié)果。從結(jié)果可以看出，訓練43隔離特性符合鏈霉菌屬的一般特征，即殖民地輻射、表面粗糙、干燥，覆蓋一層干粉的孢子，并結(jié)合培養(yǎng)基，不容易掌握，有鮮艷的顏色，正面和負面的菌落以及中央和邊緣不同的顏色種類，不同的顏色是刺激性氣味等。3.2.2菌株的分子生物學鑒定:對151株菌株中的43株進行16SrDNA測序。經(jīng)序列比對，41株菌株與已知鏈霉菌的相似性均在百分之九十九以上，均確認為鏈霉菌。結(jié)果如表3所示。3.2.3抗菌結(jié)果分析：從土壤中分離的151株鏈霉菌屬的青藏高原背景下，68株顯示抗菌活性,包括廣譜強敵對的菌株或某種細菌菌株具有較強的拮抗阻力,其中菌株耐所有三個指標細菌占拮抗細菌總數(shù)的百分之60左右。在68株拮抗鏈霉菌中，分別有52株、54株和63株拮抗大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌。由此可見，革蘭氏陰性菌分離的鏈霉菌明顯強于革蘭氏陽性菌的拮抗作用。

結(jié)論隨著一系列抗生素的發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)了耐藥性。細菌耐藥性繼續(xù)增加，藥物研究者和制造商還沒有生產(chǎn)出新的藥物來替代已經(jīng)產(chǎn)生耐藥性的抗生素。據(jù)歐洲疾病預防控制中心估計，每年可能有25000人死于與抗生素耐藥性有關(guān)的感染。近年來，由于臨床用藥不合理的現(xiàn)象不斷發(fā)生，細菌耐藥性呈上升趨勢，許多病原菌對抗生素有較強的耐藥性。醫(yī)院內(nèi)巴氏桿菌耐藥性呈上升趨勢，給醫(yī)院感染控制和臨床治療帶來了諸多問題，因此關(guān)注病原菌的臨床分布特點和耐藥趨勢對臨床用藥具有重要意義。一些附著在上呼吸道和腸道的菌株可能在適當條件下迅速繁殖，產(chǎn)生大量新的巴氏桿菌。當這些細菌附著在附著的食物上時，細菌的繁殖和分泌會污染食物，對人體健康造成危害?，F(xiàn)在，全世界的人都被這個問題困擾著。隨著巴氏桿菌對人體危害的日益嚴重，這些相關(guān)問題越來越受到人們的重視。因此，有必要建立一種快速、超靈敏的檢測巴氏桿菌的方法。該檢測方法的建立將對它們之間的耐藥鄰域具有非常重要的實際應用價值。因此，以基于青藏高于為基礎對細菌的耐藥性進行分析，可以為臨床有效防治提供科學依據(jù)，為更好地指導臨床合理使用抗生素。參考文獻[1]CHOTIANS．Isolation，identificationandserotypingofpasteurellamultocidaisolationfrompneumobiclungsofBovineandtheirsensitivetoseveralantibioties［J］．JurnalImuTernakdanVeterier，1997，2(3):198－203．[2]ARIASME，GONZALEZ-PEREZJA，GONZALEZ-VILAFJ，etal．Soilhealth-anewchallengeformicrobiologistsandchemists［J］．InternationalMicrobiology，2005，8(1):13－21．[3]TALBOTJM，BＲUNSTD，TAYLOＲJW，etal.EndemismandfunctionalconvergenceacrosstheNorthAmericansoilmycobiome［J］．ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica，2014，111(17):6341－6346．[4]李晨華，張彩霞，唐立松，等．長期施肥土壤微生物群落的剖面變化及其與土壤性質(zhì)的關(guān)系［J］．微生物學報，2014，54(3):319－329．LICH，ZHANGCX，TANGLS，etalEffectoflongtermfertilizingregimeonsoilmicrobialdiversityandsoilproperty［J］．ActaMicrobiologicaSinica，2014，54(3):319－329．(inChinesewithEnglishabstract)[5]鄭燕，賈仲君．新一代高通量測序與穩(wěn)定性同位素